Технологическая схема получения гипериммунных сывороток - Технология приготовления гипериммунных сывороток

Сыворотку получают методом цитрирования крови с последующим сепарированием и дефибринированием плазмы.

Сыворотку крови консервируют 0,5 %-ным раствором фенола и от полноты адсорбции антител.

При получении большинства противовирусных гипериммунных сывороток используют антигены без адъювантов, отстаивают в специальных емкостях в течение двух месяцев. Отстоявшуюся сыворотку фильтруют вначале через пластины Ф, а затем через стерилизующие пластины СФ.

В последующем сыворотку расфасовывают во флаконах емкостью по 100 мл. Флаконы закрывают пробками и для герметичности их обкатывают алюминиевыми колпачками. На флаконы наносят этикетку и часть продукции сдают на контроль.

Гипериммунные сыворотки, получаемые из крови путем удалеформенных элементов и фибрина, называются нативными (в отличие сывороток, подвергнутых дополнительной очистке и концентрации специальными методами).

Этапы получения гипериммунных сывороток

Цитрирование

Сепарирование

Дефибринирование

Концентрирование 0,5 % - ным раствором фенола

Отстаивание в течение 2 месяцев

Стерилизующая фильтрация

Фасовка во флаконы

Контроль

Принципы очистки сывороток основаны на выделении из них активных белковых фракций (преимущественно гамма-глобулинов) и удалении балластных фракций, не являющихся носителями антител (например, альбумины).

Выделенные фракции растворяют в меньшем объеме растворите ля, по сравнению с исходным объемом, что позволяет препарат сконцентрировать и вводить в меньших дозах.

Необходимость в получении концентрированных сывороток связана:

    - со значительными объемами выпускаемых лечебных сывороток исчисляемыми сотнями тонн. Для расфасовки сывороток требуете: большое количество флаконов, пробок, колпачков, ящиков для упаковки. Кроме того, большие затраты уходят на транспортировку такого объема сывороточных препаратов - с недостаточно высокой активностью отдельных сывороток, ко торые вводятся животным в больших дозах (с профилактической целью - по 20 - 60 мл, с лечебной - по 40 - 120 мл). Уменьшения общего объема выпускаемых сывороток и повышения их активности можно достигнуть путем их очистки и концентрации иммуноглобулинновой фракции гипериммунной сыворотки.

В производственных условиях очистку и концентрацию сывороток проводят чаще всего комбинированным способом, включающим:

    - ферментативный гидролиз; - прогрев ферментированных сывороток в кислой среде; - солевое фракционирование; - дополнительную очистку от неактивных белков с использованием органических растворителей, сорбентов; -дополнительное выдерживание сывороток при пониженных температурах.

При такой обработке удаляется до 80 - 85 % балластных белков сыворотки.

Кроме указанных методов очистки и концентрации сывороточных препаратов, гамма-глобулиновая фракция выделяется из сыворотки крови методом ультрафильтрации. Для этого используются ультрафильтрационные модули на полых волокнах, отличающихся пределом задержания по молекулярной массе: 5000, 15000, 50000, 100000 дальтон. В соответствии с этим, в биопромышленности используются модули УФУ-5, УФУ-15, УФУ-50, УФУ-100.

Для задержания гамма-глобулинов лучше всего использовать УФУ100, обеспечивающую практически полную задержку гамма-глобулинов на фильтре, так как молекулярная масса гамма-глобулинов составляет 160000 - 900000 дальтон.

Производственные опыты по ультрафильтрации сывороток дали возможность сконцентрировать их в 3 раза и практически без потерь иммуноглобулинового компонента. Это позволяет сократить объем сывороточных препаратов в 3 раза и во столько же раз повысить их удельную активность.

Более того, ультрафильтрат, который в основном представлен альбуминовой фракцией, может быть использован в качестве компонента питательной среды для выращивания микроорганизмов, а также как протеиносодержащий препарат для лечения животных.

Отечественный метод приготовления сыворотки, известный под названием "Диаферм-3" (диализ, ферментация), был разработан в 1954 г. и затем усовершенствовался.

Метод "Диаферм-3" включает восемь стадий:

    - стадия ферментативного гидролиза сывороточных белков пепсином в течение 1 ч при рН 3,2 и 1 ч при рН 4,2 при температуре 22 -25 °С; - стадия термоденатурации в течение 45 мин, при рН 4,3 и 58 °С вприсутствии 14-14,5% сульфата аммония ; - стадия высаливания активных глобулинов сульфатом аммония(34%) при рН 7,1; - стадия стерилизующей фильтрации; - стадия диализа и дополнительной очистки от балластных белков в их изоэлектрической точке при рН 5,2-5,6 в присутствии хлороформа (СН); - стабилизация очищенной сыворотки в течение 3 месяцев; - повторная стерилизующая фильтрация - расфасовка.

Линия производства сывороток.

1 - сепаратор; 2 - дефибринатор; 3 отстойник; 4 - фильтр предварительной очистки; 5 - фильтр стерилизующей фильтрации; 6 - сборник готовой продукции

Повторной стерилизации подвергают в случае необходимости ряд сывороток (противодифтерийные, противоботулинические) с появлением хлопьевидного осадка.

В промышленном производстве готовится множество различных сывороток. Технологические приемы приготовления их в общих чертах одинаковы. В то же время для приготовления отдельных сывороток имеются свои технологические особенности производства, которые для каждой сыворотки оговорены в соответствующей научно-технической документации.

Похожие статьи




Технологическая схема получения гипериммунных сывороток - Технология приготовления гипериммунных сывороток

Предыдущая | Следующая