Діагностика - Отруєння тварин препаратами міді

Діагноз встановлюється на підставі даних анамнезу, клінічних ознак, інтоксикації, патологоанатомічного розтину і хіміко-токсикологічних досліджень.

Характерними симптомами при хронічній інтоксикації є : схуднення, жовтушність слизових оболонок, гематурія за нормальної температури тіла.

Особливе значення мають хіміко-токсикологічні дослідження. При діагностиці враховують вміст міді в кормах, крові тварин і м'язовій тканині. У м'язовій тканині тварин вміст міді коливається в межах від 0,53 до 5,86 мг/кг. У печінці свиней утримується 15,6 - 73,7 мг/кг, ягняти - 9,8 мг/кг, кіз - 156 мг/кг, барана - 60 мг/кг, теляти - до 150 мг/кг, уток і гусаків - 11,0 - 158,0 мг/кг міді. При отруєннях вміст міді в печінці збільшується до 1000 мг у 1 кг ( у перерахуванні на суху речовину ). Підвищений вміст міді в печінці можна установити через кілька місяців після інтоксикації.

У нормі в крові різних тварин утримується від 0,5 до 2,5 мг/л міді. У молодих тварин у крові утримується більші міді. У крові здорової великої рогатої худоби утримується 0,7 - 1,0 мг/л міді, у крові плоду - 1,9 мг/л. Якщо в крові новонародженої великої рогатої худоби утримуються 0,7 мг/л міді виникають симптоми порушення функції центральної нервової системи. Ці симптоми підсилюються, коли в крові знижений вміст кобальту, марганцю, йоду і підвищений вміст молібдену і свинцю.

Потреба тварин у міді не перевищує 0,2 - 0,4 мг/кг. Гострі отруєння відзначаються при вмісті більше 500 мг/кг міді в раціоні. Хронічні - при багаторазовому споживанні кормів, вміст 20 - 30 мг/кг міді ( гемолітичний криз, жовтяниця ). При вмісті в печінці міді вище 150 - 250 мг/кг спостерігається гемолітичний криз.

Методи визначення міді.

Якісна проба:

    1. 1 - 2 мл мінералізату змішують з водою 1:1, після чого 2-3 краплі нейтралізують 25 % розчином аміаку ( судять за лакмусовим папірцем). Краплю мінералізату наносять на смужку фільтрувального паперу, просоченого 4% розчином силікату натрію, витримують одну хвилину над розчином аміаку, висушують і обприскують спиртовим розчином рубеановодневої кислоти ( ОД г в 10 мл спирту ). При наявності міді з'являється пляма темно - зеленого кольору. 2. Вміст шлунково-кишкового тракту змішують з бідистильваною водою, етиловим спиртом і соляною кислотою в співвідношенні 10:5:10:2 і через 10 хвилин фільтрують через паперовий фільтр. До 5 мл фільтрату додають 1 мл насиченого розчину тетраетилтіурамдисульфіду в етиловому спирті. Поява темно - зеленого забарвлення свідчить про високу концентрацію міді. Як додатковий тест використовують реакцію з жовтою кров'яною сіллю. Для цього в пробірку вносять 1 мл фільтрату, 5 крапель концентрованої оцтової кислоти і 5 крапель 5 % розчину фероціаніду калію. В присутності міді з'являється червоно - коричневе забарвлення або осад у результаті утворення колоїдного фероціаніду міді.

Кількісна проба.

Принцип методу базується на мінералізації біоматеріалів мінеральними кислотами з подальшими фотоелектроколориметричними визначенням міді за реакцією з тєтраетилтіурамдисульфідом при 435 нм.

Приготування реактивів

    1. 0,1 М розчин комплексону Ш: 16,81 г реагенту розчиняють бідистильваною водою в мірній колбі на 500 мл і доводять до мітки. 2. Розчин міді стандартний основний, 1 мг/мг; 67,31 мг CuCI2 *2 H2O або 98,91 мг CuSO4 X 5H2O розчиняють у мірній колбі місткістю 25 мл, куди попередньо додають 1 мл концентрованої соляної кислоти. Об'єм доводять до мітки водою, перемішують і зберігають у холодильнику. 3. Розчин міді стандартний робочий, 5 мкг/мл: готують розчиненням основного розчину бідистильваною водою в 200 разів. Розчин стійкий протягом тижня. 4. Розчин тетраетилтиурамдисульфіду ( ТМТД ) в етанолі : в мірну колбу на 100 мл вносять 0,25 г препарату, додають 90 мл етанолу і нагрівають до мітки спиртом і декантують від осаду.

Підготовка посуду та матеріалу.

У колбу чи інший посуд вносять 1 мл етилового спирту і 10 мл концентрованої азотної кислоти. Після бурхливої реакції, яка супроводжується виділенням окислів азоту, посуд витримують 30 хв. при кімнатній температурі. Потім промивають дистильованою водою і сушать при 1100 С. перед застосуванням посуд ополіскують бідистильованою водою.

Досліджуваний сухий зразок вагою 50 - 100 г подрібнюють у млинку. Органи та тканини тварин, патматеріал подрібнюють ножицями, а потім гомогенізують, використовуючи пластмасові склянки. Рідкі зразки перемішують струшуючи протягом 1 хвилини.

Середній сухий зразок корму масою 1 г, сирої печінки - 0,5 г або крові ( сироватки ) об'ємом 2,0 мл переносять у круглу колбу ємкістю 100 мл, додають 10 мл. концентрованої азотної кислоти і 0,2 мл етилового спирту. Після припинення бурного виділення окислів азоту колбу витримують на піщаній бані до просвітлення гідролізату і розчинення основної маси матеріалу. Потім вносять 5 мл 57% соляної кислоти і посилюють нагрівання. Розкладання матеріалу продовжують до появи білих парів хлорного ангідриду. Якщо в момент кипіння соляної кислоти розчин приймає коричневе забарвлення ( обвуглюється ), швидко вносять 5 - 10 крапель азотної кислоти і знову доводять до виділення хлорного ангідриду. На кінцевій стадії гідролізу нагрівання зменшують, а мінера лізати витримують 5 хвилин на піщаній бані. Після охолодження вмісту колби додають бідистильовану воду в об'ємі 14 мл. Паралельно проводять контрольний дослід на чистоту реактивів.

Побудова калібрувального графіка.

У колби місткістю 100 мл вносять 0,5; 1; 2; 3 мл робочого стандартного розчину міді ( 5 мкг/мл ) і по 5 мл 57 % соляної кислоти. Об'єм розчину доводять бідистильованою водою до 14 мл. Потім вносять 1 мл 0,1 М розчину комплексну Ш, 13 мл етилового спирту і 4 мл насиченого розчину тетураму в спирті. Після змішування розчин витримують при кімнатній температурі 30 хв., потім переносять у кювету з товщиною шару 20 мм і вимірюють оптичну густину при 435 нм ( синій світлофільтр ).

Хід аналізу.

До гідролізату об'ємом 14 мл додають 1 мл 0.1 М розчин комплексну Ш і 3 мл етилового спирту. Через 5 хвилин при появі осаду солей розчин фільтрують через паперовий фільтр у мірну колбу або циліндр ємкістю 50 мл. Осад на фільтрі промивають 1% розчином соляної кислоти, доводячи до початкового об'єму. Потім при помішуванні вносять 4 мл насиченого розчину тетураму в етанолі. Колби витримують при кімнатній температурі 30 хв. Подальші дослідження виконують, як і при побудові каліброваного графіка.

Одержаний водно-спиртовий розчин переносять у кювету з товщиною граней 20 мм і вимірюють його оптичну густину при 435 нм. Для порівняння розчинів ставлять контрольний дослід на вміст міді в реактивах, включаючи стадію мінералізації. Якщо оптична густина досліджуваного зразка більше оптичної густини максимального стандарту (15 мкг ), розводять забарвлений водно - спиртовий розчин 10 % розчином соляної кислоти в 48% етиловому спирті. Якщо гідролізат має жовте забарвлення, фотометрію розчину проводять двічі : до і після внесення розчину тетураму.

Обробка результатів дослідження.

Для визначення концентрації міді в досліджуваному матеріалі застосовують таку формулу розрахунку :

С=АК/М,

Де, С - концентрація міді в досліджуваному матеріалі, мг/кг, мг/л;

А - концентрація елемента в розчині, виявлена за допомогою каліброваного графіка мкг;

К - коефіцієнт, що враховує розведення розчину в ході аналізу;

М - маса зразка, взятого для дослідження, г, мл.

Як результат аналізу беруть середнє значення двох паралельних визначень, виражених з точністю до 0,001 мк/кг. Розходження результатів двох паралельних досліджень не повинно перевищувати 10%.

Прогноз.

У жуйних тварин при наявності яскраво виражених симптомів інтоксикації прогноз, як правило, несприятливий.

Похожие статьи




Діагностика - Отруєння тварин препаратами міді

Предыдущая | Следующая