Патофизиологическая роль церулоплазмина при "невоспалительных" лейкоцитозах, Влияние церулоплазмина на количественный состав лейкоцитов при "невоспалительных" лейкоцитозах - Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях

Влияние церулоплазмина на количественный состав лейкоцитов при "невоспалительных" лейкоцитозах

На предыдущем этапе работы было показано, что Цп способен изменять количество и функцию лейкоцитов при лейкоцитозе, вызванным асептическим воспалением. Возникает вопрос: влияние Цп на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов ограничивается только воспалительным лейкоцитозом или имеет место при других, "невоспалительных" перестройках количественного состава лейкоцитов.

В качестве моделей "невоспалительных" лейкоцитозов использовали лейкоцитоз, развивающийся при введении растворимого экзогенного пирогена и интоксикацию солями бария.

Известно, что пирогенал - это лекарственный препарат, изготавливаемый из липополисахаридов, образующихся в процессе жизнедеятельности микроорганизмов Pseudomonas aeruginosaе и др. При введении пирогенала наряду с повышением температуры тела наблюдаются кратковременная лейкопения, сменяющаяся лейкоцитозом, увеличение проницаемости тканей, подавление развития рубцовой ткани, улучшение восстановительных процессов в нервной ткани (93).

Лейкоцитоз в ответ на пирогенал вызывали однократным внутримышечным введением препарата в дозе 5 мкг/кг массы тела. Опытной группе животных одновременно с пирогеналом вводили внутрибрюшинно однократно церулоплазмин в дозе 60 мг/кг. Контрольной группе животных вводили стерильный физиологический раствор.

Показатели изучали через 8 и 24 часа от введения пирогенала.

В качестве другой модели лейкоцитоза была выбрана интоксикация хлоридом бария, поскольку показано, что длительное введение солей бария вызывает гиперплазию миелоидного ростка костного мозга и приводит к увеличению количества лейкоцитов в периферической крови (77, 143).

Подопытным животным вводили хлорид бария из расчета 10 мг/кг массы тела подкожно длительно в течение 20 суток до повышения количества лейкоцитов в периферической крови. Опытной группе животных на фоне бариевой интоксикации вводили церулоплазмин внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг массы тела на 7, 10, 13 сутки от начала введения хлорида бария. Показатели определяли на 11, 18, 22 и 30 сутки эксперимента.

Все животные в экспериментах были разделены на 3 группы. Группа 1 - интактный контроль, этой группе животных не вводили никаких веществ. Группа 2 - животные, у которых моделировали лейкоцитоз, вызванный введением пирогенала или бариевой интоксикацией. Группа 3 - животные, которым на фоне лейкоцитоза вводили церулоплазмин по описанным выше схемам.

Сначала изучали активность Цп в сыворотке крови у животных при введении пирогенала. Результаты представлены в таблице 80. Как видно, при введении пирогенала не отмечено изменения активности Цп в сыворотке через 8 и 24 часа. Это связано с тем, что в данном случае отсутствует повреждение тканей, стадия альтерации классического воспалительного процесса, а сам лейкоцитоз в ответ на введение растворимого экзогенного пирогена поэтому относится к "невоспалительным".

Активность Цп на фоне бариевой интоксикации определяли в момент максимального содержания лейкоцитов в периферической крови на 18 сутки эксперимента. Как видно из таблицы 81, активность Цп в сыворотке при этом достоверно не изменилась. Полученный факт, как и в случае с пирогеналом, позволяет отнести этот вид лейкоцитоза к "невоспалительным".

Таблица 80

Активность Цп в сыворотке крови при введении пирогенала

Группы

Животных /

Показатель

Интактные

Животные n=13

Пирогенал

8 часов n=5

24 часа n =5

М+m

М+m

М+m

Активность Цп,

Усл. ед.

72,08+2,41

8,68

70,40+2,84

6,35

72,80+2,31

5,17

Таблица 81

Активность Цп в сыворотке крови на фоне бариевой интоксикации

Группы

Животных /

Показатель

Интактные

Животные n=13

Барий

18 сутки n=5

М+m

М+m

Активность Цп,

Усл. ед.

72,08+2,41

8,68

65,60+5,89

13,16

Ответная реакция на введение экзогенного пирогена выражалась в появлении у животных контрольной группы лейкоцитоза со сдвигом лейкоформулы влево через 8 часов (таблицы 82 - 84). Лейкоцитоз был обусловлен увеличением количества молодых и зрелых форм нейтрофильных лейкоцитов как в относительных, так и в абсолютных величинах. В это же время имел место относительный перераспределительный лимфоцитоз. Полагают, что увеличение количества лейкоцитов в периферической крови в ответ на введение пирогенала обусловлено выбросом зрелых клеток из костномозгового депо. В пользу этого свидетельствуют быстрота наступления реакции и увеличение количества молодых форм нейтрофилов, что говорит о поступлении клеток из костного мозга и исключает перераспределительный лейкоцитоз, обусловленный мобилизацией пристеночного пула лейкоцитов (304).

Через 24 часа от введения пирогенала количество лейкоцитов и их популяций в периферической крови у контрольных животных не отличалось от нормы.

Цп не приводил к изменению общего количества лейкоцитов при лейкоцитозе в ответ на экзогенный пироген (таблица 82). Однако, анализ лейкоформулы показал, что через 8 часов от начала эксперимента у животных опытной группы имело место снижение в относительных величинах количества нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови (таблица 83). Пересчет на абсолютные величины обнаружил только снижение количества нейтрофилов преимущественно за счет сегментоядерных форм (таблица 84). Отмеченный факт, вероятно, связан с влиянием Цп на адгезивную способность лейкоцитов. Предыдущие исследования показали, что Цп способен увеличивать адгезию лейкоцитов к интактному и активированному гистамином эндотелию. В пользу этого предположения свидетельствует также и то, что уменьшалось количество сегментоядерных, то есть зрелых в функциональном отношении лейкоцитов, на которые способен оказывать влияние Цп. Через 24 часа от начала эксперимента под влиянием Цп количество нейтрофилов снижалось по сравнению с 8-м часом, однако, было достоверно выше, чем у контрольной группы. Причем, нейтрофилия была обусловлена исключительно сегментоядерными клетками.

Увеличение количества нейтрофилов не могло быть связано со стимуляцией синтетических процессов и пролиферативной активности костного мозга под влиянием Цп, так как время, необходимое для созревания нейтрофилов составляет в среднем 5 суток. Это не могло быть связано и с влиянием Цп на адгезивную способность лейкоцитов периферической крови к эндотелию сосудистой стенки, поскольку это привело бы к снижению количества нейтрофилов в циркулирующем пуле.

Не отрицая возможности других механизмов, мы предполагаем, что нейтрофилия, развившаяся в опытной группе на 24 час эксперимента, связана с влиянием Цп на выход клеток из пула постмитотических клеток костного мозга. Неделящиеся гранулоциты, метамиелоциты, палочкоядерные и сегментоядерные клетки, сохраняются в костном мозге в виде резерва, который при необходимости может быть мобилизован (72, 211, 253, 437). Адгезия зрелых гранулоцитов к внеклеточному матриксу и эндотелиальной выстилке синусоидов костного мозга является ключевой фазой выхода клеток в кровоток (227 - 229, 369). Мы полагаем, что Цп увеличивает прилипание зрелых форм нейтрофилов к эндотелию синусоидов и тем самым способствует выходу их из костного мозга.

Цп, таким образом, может обладать способностью не только усиливать пролиферацию белого ростка костного мозга в условиях интактного и стимулированного кроветворения, но и способствовать выходу созревших лейкоцитов из костного мозга.

Таблица 82

Влияние Цп на количество лейкоцитов в периферической крови крыс при введении пирогенала ( х 109/л, М+m; )

Группа 1

Интактные

Крысы

N=12

Группа 2

(пирогенал + физ. р - р) n=6

Группа 3

(пирогенал + Цп) n=6

8 часов

24 часа

8 часов

24 часа
    12,99+0,35; 1,21

15,21+0,84; 2,37

Р1-2<0,05
    12,83+1,08 2,65
    14,56+0,97; 2,38
    15,09+1,49; 3,34

Примечание. р - достоверность различий между группами по t - критерию.

Таблица 83

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при введении пирогенала (М+m; )

Показатели,

% клеток

Группа 1

Интактные

Крысы n=12

Группа 2

(пирогенал + физ. р - р) n=6

Группа 3

(пирогенал + Цп) n=6

8 часов

24 часа

8 часов

24 часа

Нейтрофилы

П / яд.
    3,08+0,48; 1,68
    5,67+0,33; 0,82*
    2,50+0,56; 1,38
    4,17+0,48; 1,17**
    2,40+0,60; 1,34

С / яд.
    11,83+0,89; 3,09
    30,33+1,67; 4,08*
    10,50+0,43; 1,05
    18,00+1,98; 4,86*,**
    14,00+1,52; 3,39

Всего

14,91+1,09; 3,78
    36,00+1,69; 4,15*
    13,17+0,75; 1,83
    22,17+2,23; 5,46*, **
    16,40+1,66; 3,71

Эозинофилы
    1,33+0,41; 1,44
    1,33+0,49; 1,21
    2,67+0,84; 2,07
    1,50+0,34; 0,84
    2,20+0,58; 1,30

Лимфоциты
    83,42+1,41; 4,87
    62,33+1,93; 4,72*
    84,17+1,08; 2,64
    75,50+2,45; 5,99*, **
    81,20+1,74; 3,89

Моноциты
    0,33+0,14; 0,49
    0,33+0,21; 0,52
    0,33+0,21; 0,52
    0,83+0,31; 0,75
    0,20+0,20; 0,45

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t - критерию.

Таблица 84

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при введении пирогенала (М+m; )

Показатели,

Х 109 / л

Группа 1

Интактные

Крысы n=12

Группа 2

(пирогенал + физ. р - р) n=6

Группа 3

(пирогенал + Цп) n=6

8 часов

24 часа

8 часов

24 часа

Нейтрофилы

П / яд.
    0,39+0,06; 0,19
    0,89+0,09; 0,23*
    0,31+0,06; 0,15
    0,63+0,11; 0,27
    0,34+0,08; 0,18

С / яд.
    1,56+0,14; 0,49
    4,76+0,39; 0,95*
    1,33+0,10; 0,25
    2,67+0,41; 1,00* ,**
    2,09+0,26; 0,58**

Всего
    1,95+0,17; 0,57
    5,65+0,45; 1,11*
    1,66+0,09; 0,24
    3,29+0,49; 1,21*,**
    2,43+0,26; 0,57**

Эозинофилы
    0,17+0,05; 0,17
    0,22+0,08; 0,19
    0,36+0,14; 0,33
    0,22+0,05; 0,13
    0,30+0,05; 0,12

Лимфоциты
    10,83+0,29; 1,03
    9,75+0,67; 1,65
    10,81+0,94; 2,31
    10,92+0,59; 1,46
    12,32+1,43; 3,21

Моноциты
    0,04+0,02; 0,07
    0,06+0,04; 0,09
    0,03+0,02; 0,05
    0,12+0,05; 0,12
    0,04+0,04; 0,09

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t - критерию.

Интоксикация солями бария привела к развитию лейкоцитоза на 11 сутки, а максимальное количество лейкоцитов отмечено на 18 сутки эксперимента (таблица 85). Анализ лейкоформулы показал, что лейкоцитоз был обусловлен клетками нейтрофильного ряда в относительных величинах, а в абсолютных - нейтрофилами и лимфоцитами (таблицы 86, 87). Полученные данные согласуются с результатами других исследователей, изучавших реакцию кроветворной ткани на введение хлорида бария (77, 143).

Применение Цп на фоне бариевой интоксикации привело к следующим изменениям количественного состава лейкоцитов. Общее количество лейкоцитов достоверно увеличилось по сравнению со второй группой на 11 сутки эксперимента (таблица 85). В другие сроки имело место перераспределение среди популяций лейкоцитов, которое приводило к достоверному росту палочкоядерных нейтрофилов на 11, 18, 22 и 30 сутки и общего количества нейтрофилов на 30 сутки эксперимента (таблицы 86, 87). Кроме того, при сравнении с животными второй группы на 11 и 18 сутки увеличилось количество эозинофилов, а на 22 и 30 сутки - моноцитов. Таким образом, нейтрофилия во все сроки эксперимента была обусловлена исключительно палочкоядерными клетками.

На основании данных предыдущих исследований, можно предположить, что рост числа нейтрофильных лейкоцитов и эозинофилов в периферической крови, начиная с 11 суток эксперимента, обусловлен влиянием Цп на лейкопоэз и увеличением количества пролиферирующих клеток - предшественников гранулоцитопоэза. Моноцитоз на поздних стадиях эксперимента связан с реакцией системы крови на хроническую интоксикацию ксенобиотиком.

Таблица 85

Влияние Цп на количество лейкоцитов в периферической крови крыс при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации ( х 109/л, М+m; )

Группа 1

(интактные

Крысы)

N=13

Группа 2

(Барий + физ. р-р ) n=6

Группа 3

(Барий + Цп) n=7

11 сутки

18 сутки

22 сутки

30 сутки

11 сутки

18 сутки

22 сутки

30 сутки
    10,33+0,38; 1,37
    17,46+0,83; 2,04

Р1-2<0,001
    20,13+1,31 3,21

Р1-2<0,001
    19,56+2,17 5,31

Р1-2<0,01
    16,61+1,59 3,89

Р1-2<0,01
    20,66+0,78; 2,07

Р1-3<0,001

Р2-3<0,05
    20,21+2,12; 5,60

Р1-3<0,01
    19,44+1,79; 4,75

Р1-3<0,01
    24,45+3,15; 7,72

Р1-3<0,01

Примечание. р - достоверность различий между группами по t - критерию.

Таблица 86

Влияние Цп)

Показа-тели,

% клеток

Группа 1

Интактные

N=13

Группа 2

(барий + физ. р-р) n=6

Группа 3

(барий + Цп) n=7

11 сутки

18 сутки

22 сутки

30 сутки

11 сутки

18 сутки

22 сутки

30 сутки

Нейтрофилы

П / яд.
    5,15+0,62; 2,23
    6,17+1,17; 2,86
    7,83+0,91; 2,23*
    10,50+1,26; 3,08*
    10,33+0,99; 2,42*
    10,14+0,91; 2,41*, **
    14,71+1,25; 3,30*, **
    15,71+0,78; 2,06*, **
    13,83+1,47; 3,60*

С / яд.
    11,00+0,83; 3,00
    15,50+0,76; 1,87*
    17,17+1,01; 2,48*
    18,33+1,78 4,37*
    19,00+0,58 1,41*
    14,14+1,20; 3,18
    16,29+1,36; 3,59*
    20,14+1,12 2,97*
    19,33+1,65 4,03*

Всего
    16,15+1,17; 4,28
    21,67+1,58; 3,88*
    25,00+1,65; 4,05*
    28,83+1,90; 4,67*
    29,33+1,49; 3,67*
    24,28+1,66; 4,39*
    31,00+2,09; 5,54*, **
    35,85+1,74; 4,59*, **
    33,17+2,63; 6,43*

Эозиноф.
    1,08+0,29; 1,04
    0,83+0,31; 0,75
    0,50+0,22; 0,55
    1,67+0,61; 1,51
    1,83+0,40; 0,98
    2,00+0,31; 0,82*, **
    1,86+0,26; 0,69**
    3,71+0,75; 1,98*
    2,83+0,75; 1,83

Лимфоц.
    82,31+1,17; 4,23
    77,50+1,71; 4,18*
    73,83+1,58; 3,87*
    69,00+2,46; 6,03*
    68,83+1,82; 4,45*

73,29+1,49;3,95*
    67,00+2,14; 5,66*, **
    59,29+1,57; 4,15*, **
    63,00+3,34; 8,17*

Моноц.
    0,46+0,14; 0,52

0
    0,67+0,33; 0,82
    0,50+0,22; 0,55

0
    0,57+0,29; 0,79
    0,14+0,14; 0,38
    1,14+0,26; 0,69*
    1,00+0,26; 0,63**

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t - критерию.

Таблица 87

Влияние Цп)

Показа-тели,

Х 109/л

Группа 1

Интактные

N=13

Группа 2

(барий + физ. р-р) n=6

Группа 3

(барий + Цп) n=7

11 сутки

18 сутки

22 сутки

30 сутки

11 сутки

18 сутки

22 сутки

30 сутки

Нейтрофилы

П / яд.
    0,52+0,06; 0,21
    1,08+0,23; 0,57*
    1,55+0,16; 0,39*
    1,96+0,16; 0,38*
    1,74+0,26; 0,64*
    2,11+0,22; 0,58*, **
    2,91+0,31; 0,83*, **

3,04+0,28;0,74*, **

3,22+0,27; 0,70*, **

С / яд.
    1,13+0,09; 0,34
    2,72+0,22; 0,55*
    3,41+0,14; 0,34*
    3,61+0,64 1,56*
    3,19+0,38 0,93*
    2,93+0,29; 0,75*
    3,25+0,38; 0,99*
    3,96+0,43 1,13*
    4,62+0,55 1,34*

Всего
    1,65+0,12; 0,44
    3,80+0,39; 0,94*
    4,96+0,23; 0,56*
    5,57+0,68; 1,65*
    4,93+0,62; 1,51*
    5,04+0,44; 1,17*
    6,17+0,59; 1,58*
    6,99+0,69; 1,84*
    7,84+0,71; 1,74*. **

Эозиноф.
    0,11+0,03; 0,11
    0,14+0,05; 0,11
    0,10+0,05; 0,11
    0,33+0,16; 0,39
    0,31+0,07; 0,18*
    0,41+0,06; 0,15*, **
    0,37+0,06; 0,15*, **
    0,66+0,11; 0,30*
    0,69+0,18; 0,43*

Лимфоц.
    8,52+0,36; 1,31
    13,52+0,68; 1,66*
    15,00+1,23; 3,00*
    13,58+1,67; 4,10*
    11,37+1,02; 2,50*
    15,13+0,61; 1,60*
    13,66+1,74; 4,61*
    10,03+1,92; 5,11
    15,69+2,59; 6,36*

Моноц.
    0,05+0,02; 0,05

0
    0,13+0,07; 0,17
    0,08+0,03; 0,08

0

0,12+0,06; 0,16
    0,02+0,02; 0,05
    0,21+0,04; 0,10*. **
    0,23+0,06; 0,15*. **

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t - критерию.

Похожие статьи




Патофизиологическая роль церулоплазмина при "невоспалительных" лейкоцитозах, Влияние церулоплазмина на количественный состав лейкоцитов при "невоспалительных" лейкоцитозах - Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях

Предыдущая | Следующая