Материалы и методы исследования, Экспериментальные модели - Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях
Эксперименты выполнены на 350 белых беспородных крысах и крови 100 здоровых людей - доноров областной станции переливания крови.
Все исследования на животных выполнены в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" (Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1977).
Использовали препарат церулоплазмин (активность - 10 усл. ед. на 1 мг белка), произведенный в НПО "Иммунопрепарат" (г. Уфа). Перед введением препарат церулоплазмин растворяли в стерильном физиологическом растворе.
Экспериментальные модели
Для изучения роли Цп в условиях in vivo использовали интактных животных (таблица 2) и экспериментальные модели нарушения качественного и количественного состава лейкоцитов. Среди последних выделяли лейкоцитозы:
- - асептическое воспаление (таблица 3), - "невоспалительные" лейкоцитозы в ответ на экзогенный пироген и интоксикацию хлоридом бария (таблица 4);
И лейкопении:
- - цитостатическая лейкопения (таблица 5), - асептическое воспаление на фоне лейкопении (таблица 6).
Влияние Цп на процессы СРО в фагоцитирующих клетках периферической крови людей - доноров областной станции переливания крови изучали в модельных системах in vitro (таблица 7). Исследовали влияние Цп на адгезивную способность лейкоцитов к интактному и активированному эндотелию (таблица 8).
Таблица 2
Схема введения Цп интактным животным
Группа животных |
Схема введения Цп |
Исследование показателей |
1. |
Внутрибрюшинно, 30 мг/кг однократно |
|
2. |
Внутрибрюшинно, 10 мг/кг семикратно через 48 часов (суммарная доза 70 мг/кг) |
|
3. |
Внутрибрюшинно, 30 мг/кг шестикратно через 48 часов (суммарная доза 180 мг/кг) |
|
Введение Цп интактным животным осуществляли для решения нескольких поставленных задач. Во - первых, для изучения влияния Цп на изменение количественного состава и функциональной активности лейкоцитов в условиях интактного организма. Во - вторых, для выбора оптимальной дозы Цп, которая могла быть использована в дальнейшем для изучения роли Цп при патологических процессах. В - третьих, для определения самостоятельности влияния Цп на количество и функцию лейкоцитов независимо от какого - либо патологического процесса. Суммарная доза Цп, введенная первой группе интактных животных составила 30 мг/кг (75% от физиологической концентрации Цп в сыворотке крови), второй группе - 70 мг/кг, а третьей - 180 мг/кг. Причем, первоначально изучали эффект однократного введения Цп, а показатели снимали через 30 минут после введения и на 5, 12 сутки, ожидая возможность пролонгированного действия Цп.
Таблица 3
Схема введения Цп при воспалении
Модель Эксперимента |
Группа животных |
Схема введения Цп |
Исследование показателей |
Асептическое воспаление (1,0 мл скипидара под кожу спины) |
Опыт |
Внутрибрюшинно, 30 мг/кг двукратно через 6 и 12 часов от индукции воспаления (суммарная доза 60 мг/кг) |
|
Контроль |
Стерильный физиологический раствор |
| |
Асептическое воспаление (1,0 мл скипидара под кожу спины) |
Опыт |
Внутрибрюшинно, 60 мг/кг однократно на 3 сутки от индукции воспаления |
|
Контроль |
Стерильный физиологический раствор |
|
В качестве модели воспалительного процесса было выбрано асептическое воспаление, которое воспроизводили подкожным введением 1,0 мл скипидара (187). Суммарная доза вводимого Цп составила 60 мг/кг. Причем, первой группе животных Цп вводили в ранние сроки развития воспалительной реакции двукратно (через 6 и 12 часов от индукции воспаления), а второй группе - однократно на 3 сутки. Таким образом, изучали возможность влияния Цп на количество и функцию лейкоцитов в разные сроки воспалительного процесса.
Таблица 4
Схема введения Цп при "невоспалительных" лейкоцитозах
Модель Эксперимента |
Группа животных |
Схема введения Цп |
Исследование показателей |
Пирогенал внутримышечно 5 мкг/кг Однократно |
Опыт |
Внутрибрюшинно, 60 мг/кг однократно одновременно с введением пирогенала |
|
Контроль |
Стерильный физиологический раствор |
| |
Бариевая интоксикация
В течение 20 суток). |
Опыт |
Внутрибрюшинно 30 мг/кг на 7, 10 и 13 сутки эксперимента (суммарная доза 90 мг/кг) |
|
Контроль |
Стерильный физиологический раствор |
|
Термин "невоспалительные" лейкоцитозы использован для экспериментальных моделей патологических процессов, сопровождающихся развитием лейкоцитоза без альтерации тканей. Первой группе животных вводили экзогенный пироген - пирогенал по методике (165). Пирогенал представляет собой растворимый липополисахарид клеточной стенки Ps. аeruginosa (93). Введение пирогенала приводит к мобилизации костно - мозгового резерва лейкоцитов и развитию лейкоцитарной реакции периферической крови (112, 119, 125, 126). У второй группы животных вызывали бариевую интоксикацию путем подкожного введения хлористого бария в количестве 10 мг на кг массы тела в течение 20 суток. Показано, что бариевая интоксикация приводит к миелоидной гиперплазии костного мозга за счет увеличения продукции КСФ (77, 143).
Таблица 5
Схема введения Цп при лейкопении
Модель Экперимента |
Группа животных |
Схема введения Цп |
Исследование показателей |
Циклофосфан внутрибрюшинно 250 мг/кг однократно |
Опыт |
Внутримышечно, 60 мг/кг однократно Одновременно с введением циклофосфана |
|
Контроль |
Стерильный физиологический раствор |
|
В качестве модели лейкопении была выбрана цитостатическая лейкопения, которую вызывали внутрибрюшинным введением циклофосфана (3, 40, 41). Для изучения влияния Цп на процессы регенерации лейкопоэза, подавленного цитостатиком, Цп вводили в суммарной дозе 60 мг/кг. Сроки исследования показателей определялись данными литературы о восстановлении лейкопоэза после воздействия цитостатика (39, 41, 192). После этого исследовали роль Цп при воспалительном процессе, протекающем на фоне цитостатической лейкопении.
Таблица 6
Схема введения Цп при воспалении на фоне лейкопении
Модель Эксперимента |
Группа животных |
Схема введения Цп |
Исследование показателей |
Асептическое воспаление на 3 сутки цитостатической Лейкопении (циклофосфан внутрибрюшинно 125 мг/кг однократно) |
Опыт |
Внутримышечно, 60 мг/кг однократно Одновременно с введением циклофосфана |
|
Контроль |
Стерильный физиологический раствор |
|
Таблица 7
Схема применения Цп в экспериментах in vitro
Модель |
Схема применения Цп |
Исследование показателей |
1. |
Цп в дозах 12,5%; 25%; 50%; 75%; 100%; 150% от физиологического уровня в сыворотке крови добавляли в цельную кровь. |
Хемилюминесценция цельной крови сразу после добавления растворов Цп. |
2. |
Цп в дозах 12,5%; 25%; 50%; 75%; 100%; 150% от физиологического уровня в сыворотке крови инкубировали 30 минут при 37оС с цельной кровью. |
Хемилюминесценция цельной крови после 30 минут инкубации с растворами Цп. |
Оценку дозо - зависимого влияния Цп на процессы СРО в фагоцитах изучали in vitro методом ХЛ цельной крови. Показано, что ХЛ цельной крови, усиленная люминолом, отражает способность фагоцитов генерировать активные формы кислорода (15, 60, 61, 176, 177). Применяли следующие дозы препарата (мг/мл): 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,6; что соответствовало 12,5%; 25%; 50%; 75%; 100%; 150% от его физиологической концентрации в сыворотке крови.
Таблица 8
Схема применения Цп при изучении адгезии лейкоцитов
Мо-дель |
Схема применения Цп |
Исследование показателей |
1. |
Цп в дозах 25%; 50%; 75%; 100%; 150% от физиологического уровня в сыворотке крови инкубировали 30 минут при 37оС с цельной кровью. |
Адгезия лейкоцитов к интактному эндотелию после 30 минут инкубации с растворами Цп. |
2. |
Цп в дозах 25%; 50%; 75%; 100%; 150% от физиологического уровня в сыворотке крови обрабатывали эндотелий. |
Адгезия лейкоцитов к обработанному Цп эндотелию. |
3. |
Цп в дозах 25%; 50%; 75%; 100%; 150% от физиологического уровня в сыворотке крови инкубировали 30 минут при 37оС с цельной кровью. |
Адгезия лейкоцитов к активированному гистамином (1550 нмоль/л) эндотелию. |
4. |
Цп в дозах 25%; 50%; 75%; 100%; 150% от физиологического уровня в сыворотке крови обрабатывали активированный гистамином эндотелий. |
Адгезия лейкоцитов к обработанному гистамином (1550 нмоль/л) и Цп эндотелию. |
Похожие статьи
-
Влияние церулоплазмина на количественный состав и фагоцитарную функцию лейкоцитов при асептическом воспалении Воспалительные процессы различной этиологии...
-
При лейкоцитозе в ответ на введение пирогенала нами отмечено изменение функциональной активности лейкоцитов. В контрольной группе, по данным ХЛ -...
-
Первой группе интактных животных Цп вводили внутрибрюшинно однократно в дозе 30 мг/кг. 30 мг/кг - доза, составляющая 75% от физиологической концентрации...
-
Влияние церулоплазмина на количественный состав лейкоцитов при "невоспалительных" лейкоцитозах На предыдущем этапе работы было показано, что Цп способен...
-
На следующем этапе исследования у нас возник вопрос о возможности влияния Цп на изменение функциональной активности лейкоцитов при воспалении на...
-
Для изучения влияния Цп на процессы генерации АФК фагоцитами в условиях in vitro использовали цельную кровь здоровых людей - доноров крови, так как...
-
Введение - Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях
Актуальность исследования. Регуляция количественного состава и функциональной активности фагоцитирующих клеток является актуальной проблемой современной...
-
Адгезивную способность лейкоцитов изучали по их способности прилипать к эндотелию сосудистой стенки по разработанной оригинальной методике. У крысы под...
-
РОФ - функционально разнородная группа белков, способных быстро изменять свою концентрацию при различных нарушениях гомеостаза независимо от природы и...
-
На первом этапе эксперимента к цельной крови добавляли растворы Цп различных концентраций (мкг/мл): 100,0; 200,0; 300,0; 400,0; 600,0; что...
-
Лейкоцитозы и лейкопении - Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях
Реализация неспецифической защиты организма зависит не только от функциональной активности фагоцитирующих клеток, но и от их количественного...
-
Определение активности церулоплазмина. Активность Цп определяли по методу Тэна Э. В. (175). В пробирку вносили 0,1 мл сыворотки крови, 1 мл 0,4М...
-
Одним из представителей РОФ третьего эшелона является Цп - исключительно активный гликопротеин 2 - глобулиновой фракции сыворотки крови человека и высших...
-
Фагоциты как центральное звено неспецифической защиты организма На современном этапе развития медицинской науки иммунофагоцитарная система...
-
Выражаю благодарность научному руководителю доктору медицинских наук, профессору Людмиле Владимировне Кривохижиной за помощь в планировании и организации...
-
Реализация функциональной активности фагоцитирующих клеток находится, в том числе, под контролем различных отделов нервной системы и регуляторных...
-
Характеристика пациентов, включенных в исследование, понятие показателя "плотности доз". Всего обследовано 566 больных, находившихся с различными формами...
-
Ветспециалистам, осуществляющим отбор проб для исследования в ветлабораторию, необходимо знать, что патологический материал от павшего и вынужденно...
-
При гистологическом исследовании тимуса мышей BALВ/c, содержавшихся при свободном доступе к пище и воде (1-я группа - пассивный контроль), установлено,...
-
Материал исследования Исследования проводили в период вегетативного сезона 2011-2015 гг. Сбор осуществляли преимущественно маршрутным методом. В ходе...
-
Материал для исследования следует брать по возможности до начала химиотерапии и лучше во время вскрытия или дренирования гнойного очага. Особенно...
-
Методы, используемые в исследовании: Анкетирование - метод получения психологической информации, а также социологических и демографических данных -...
-
Микроскопический метод исследования предусматривает наблюдение за живыми и убитыми микробами в окрашенном и неокрашенном состоянии. Различают простые и...
-
Понятие "метод" (от греч. "методос" -- путь к чему-либо) означает совокупность приемов и операций практического и теоретического освоения...
-
Методы и организация исследования Анализ литературных источников проводился на всех этапах исследования. Анализ специальной научно-методической...
-
Работа проводилась на базе Всероссийской коллекции микроорганизмов (ВКМ) Института биохимии и физиологии микроорганизмов (ИБФМ) им. Г. К. Скрябина РАН....
-
Изменение Границ Сердца При Гипертрофии Правого И Левого Желудочков, Общем Увеличении Сердца, Гидроперикарде. Диагностическое Значение. Относительная...
-
При соблюдении определенных условий можно проводить общую анестезию животным практически любого возраста, даже со значительными нарушениями работы...
-
ГИНЕКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ, Лабораторные исследования - Родильница в раннем послеродовом периоде
1. Специальный статус. Наружные половые органы развиты правильно. Бартолиниевы железы не увеличены. Уретра не инфильтрирована. В зеркалах: влагалище...
-
Международный терроризм - в политическом аспекте - совершение, организация, содействие осуществлению, финансирование или поощрение агентами или...
-
Этиология и патогенез В настоящее время установлено, что микроорганизм Helicobacter pylori (HP) является важным участником формирования таких...
-
Введение, Лабораторные методы исследования функции почек - Оценки функционального состояния почек
Основными функциями почек являются выделительная (удаление конечных продуктов обмена), гомеостатическая, направленная на сохранение постоянства...
-
ПЛАН ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ БОЛЬНОГО - Острый панкреатит, отечная форма
Ї Общеклиническое исследование крови (исследование крови является одним из важнейших диагностических методов, т. к. кроветворные органы чрезвычайно...
-
Общенаучные методы исследования - Методология научного исследования в естествознании
Процесс познания как основа любого научного исследования представляет собой сложный диалектический процесс постепенного воспроизведения в сознании...
-
Методы биологических исследований - Аналогия и моделирование в биологических исследованиях
Когда мы говорим о биологии, мы говорим о науке, которая занимается исследованием всего живого. Все живые существа, включая ареал их обитания, изучаются....
-
Не существует таких явлений природы, технических или социальных процессов, которые были бы предметом изучения математики, но при этом не относились бы к...
-
Определение здоровья. Основные методы его изучения - Роль медицины в обеспечении здоровья
Здоровье - это такое состояние, которое обеспечивает оптимальное взаимоотношение организма с окружающей средой и способствует активизации всех видов...
-
Клинический материал и методы исследования - Аллотрансплантаты в реконструктивной хирургии сосудов
Работа выполнена на базе отделения сердечно-сосудистой хирургии и центра "Диабетической стопы и нарушения кровообращения в конечностях" ГУЗ Пермской...
-
Материал и методы исследования - Фауна рыб нижнего течения реки Гайва
Материал для данной работы был собран на р. Гайва Пермского края в весеннее-летне-осенний период с 6 мая по 11 сентября 2015 года, как во время...
-
6.1 манифестная форма (на ЭКГ признаки предвозбуждения желудочков в виде дельта-волны) 6.2 преходящая форма (эпизоды ЭКГ, на которых регистрируются...
Материалы и методы исследования, Экспериментальные модели - Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях