Матеріали та методи дослідження - Будова і властивості ферментів
Завдання на виконання роботи: визначити амілолітичну здатність ферментного препарату за швидкість гідролізу крохмалю до декстринів.
Лабораторний посуд: мірні колби, піпетки, пробірки, скляні палички.
Матеріали і реактиви: 1,0 %-й розчин розчинного картопляного крохмалю (наважку беруть з такого розрахунку, щоб в 100 мл розчину був 1 г сухого крохмалю, кількісно переводять її у велику склянку з киплячою водою, кип'ятять 2 хв й охолоджують, весь час перемішуючи розчин скляною паличкою. Охолоджений крохмаль переносять у мірну колбу того об'єму, із розрахунку на який взята наважка крохмалю, додають буферний розчин у кількості 10 мл на 100 мл розчину і доводять до позначки дистильованою водою. Розчин крохмалю готують у день аналізу); буферний розчин: змішують рівні об'єми нормальних розчинів оцтової кислоти (58 мл льодяної оцтової кислоти в 1 л дистильованої води) та натрій оцтовокислого (82 г CH3COONa або 136,1 г CH3COONa. 3H2O в 1 л води), рН = 4,7; основнй розчин йоду (1,4 г кристалічного йоду і 4,4 г калій йодистого розчиняють у малому об'ємі води і доводять об'єм розчину до 100 мл, зберігають у темному місці); робочий розчин йоду готують в день аналізу (20 мл основного розчину йоду доводять дистильованою водою до 100 мл і на кожні 100 мл робочого розчину додають 4 г йодистого калію); розчин технічного амілосубтиліну (1:1000).
Принцип методу: грунтується на гідролізі 1,0 %-го буферного розчину крохмалю під впливом амілолітичних ферментів. Кінець реакції контролюють візуально за йодною пробою. За часом, протягом якого проходить розщеплення крохмалю до продуктів, що не забарвлюються йодом, визначається амілолітична активність препарату.
Хід роботи: У конічну колбу місткістю 50 - 100 мл вносять піпеткою 20 мл 1,0 %-го розчину крохмалю і занурюють у водяну баню з температурою 30 °С (±0,2 °С). Загальний об'єм реакційної суміші завжди має дорівнювати 30 мл, і якщо на аналіз беруть менше 10 мл ферментного розчину, то об'єм, якого не достає, доповнюють дистильованою водою, яку приливають перед додаванням ферментного розчину. Через 10 хв витримування в бані у колбу вносять ферментний розчин при ретельному перемішуванні і точно за секундоміром відмічають час. За початок реакції беруть час, коли з піпетки виллється половина вмісту. Через кожну хвилину (або частіше) після початку реакції скляною паличкою відбирають краплину рідини і на білій порцеляновій пластинці з'єднують її з раніше нанесеною краплиною робочого розчину йоду. Реакція розщеплення крохмалю вважається закінченою, коли йод перестане давати зміну забарвлення при з'єднанні з краплиною дослідної рідини (протягом перших 10 с). Час, за який проходить розщеплення крохмалю до продуктів, що не забарвлюються йодом, може становити від 3 до 20 хв, але надійніші результати отримують у межах від 5 до 15 хв. Примітка. Якщо час зникнення забарвлення менше 3 хв, то визначення повторюють з меншою кількістю розчину ферменту, наприклад - 2 мл. У цьому разі в пробірку чи колбу з 20 мл крохмалю вносять 8 мл дистильованої води. Під час аналізу дуже активних препаратів концентрації розчинів роблять меншими (0,1 г в 200 або 500 мл). Якщо час зникнення забарвлення становить більше 20 хв, то готують розчин більшої концентрації, наприклад 1:50 чи 1:100, а рідину можна не 45 розбавляти зовсім. У разі зникнення забарвлення в межах 3 - 5 хв проби відбирають кожні 15 с; 5 - 10 хв - кожні 30 с; а понад 10 хв - кожну хвилину. Скляну паличку після кожної проби промивають дистильованою водою і витирають чистим некрохмаленим рушником. Розрахунок АЗ проводять за формулою:
АЗ = (1.1)
Де 0,2 - кількість крохмалю в реакційній суміші, г; 60 - коефіцієнт перерахунку на 1 год; а - кількість ферментного препарату, введеного в реакційну суміш, грами повітряно-сухої речовини або мл рідинних об'єктів; t - час, за який пройшло розщеплення крохмалю до нездатних забарвлюватися йодом продуктів, хв; 1 - перерахунок на 1 г повітряно-сухого препарату або 1 мл розчину.
Результати
T1=0о С ф=27 хв
T2=20о С ф=8 хв
T3=37о С ф=3 хв
T4=90о С ф=32 хв
АЗ1=
АЗ2=
АЗ3=
АЗ4=
Похожие статьи
-
Залежність швидкості ферментативної реакції від температури - Будова і властивості ферментів
Підвищення температури завжди збільшує швидкість хімічних реакцій, зокрема ферментативних. Як показник зростання швидкості реакції використовують...
-
У розділі представлена загальна методологія досліджень, яка сприяла досягненню мети відповідно до комплексу теоретичних, інструментальних та серії...
-
Способи вираження активності ферментів - Будова і властивості ферментів
У біологічних об'єктах ферменти знаходяться в дуже мізерних концентраціях, тому для оцінки ферментативних процесів визначають не вміст ферментів, що...
-
Амілаза її види та будова - Будова і властивості ферментів
Амілази (грец. бmylon -- крохмаль) -- ферменти класу гідролаз, які забезпечують гідроліз б-1,4-глікозидних зв'язків у молекулах полісахаридів --...
-
Специфічність дії ферментів, Класифікація і номенклатура ферментів - Будова і властивості ферментів
Кожен ензим діє на певний субстрат або групу речовин, які подібні за своєю структурою. Специфічність дії ферментів пояснюється схожістю конфігурації...
-
Дія різних видів амілаз - Будова і властивості ферментів
Ферменти мають дуже високою специфічністю. Ця специфічність обумовлена особливою формою молекули ферменту, точно відповідній формі молекули субстрату. Цю...
-
Іммобілізовані ферменти та їх застосування - Будова і властивості ферментів
Ферменти виявляють свою активність не тільки в мікропросторі клітини, але й поза організмом. Вони є виключно активними і специфічними каталізаторами,...
-
Використання амілаз у харчовій промисловості - Будова і властивості ферментів
Амілази набули широкого біотехнологічного застосування в таких галузях, як текстильна, фармацевтична, харчова, у виробництві мийних засобів. Гідролітичні...
-
Вступ - Будова і властивості ферментів
Обмін речовин в організмі живої істоти можна визначити як сукупність всіх хімічних перетворень, яким піддаються сполуки, що надходять ззовні. Ці...
-
Механізм дії ферментів - Будова і властивості ферментів
З'ясування механізмів, що лежать в основі каталітичного дії ензимів, є однією з фундаментальних завдань і актуальних проблем не тільки ензимології, а й...
-
Літературний огляд, Будова ферментів - Будова і властивості ферментів
Будова ферментів За хімічною природою ферменти - це білки, що проявляють каталітичні властивості, тобто вони прискорюють перебіг різних хімічних...
-
Об'єктом проведеного дослідження стали процеси відтворення населення, а саме вплив радіаційного чинника та паління на ризик виникнення репродуктивних...
-
Методи ідентифікації лікарських засобів
Аналіз будь-якого ЛП або ЛР починається з доведення того, що маєм справу із тим препаратом, назва якого вказана на маркуванні. Дослідження на тотожність...
-
Рослинний матеріал та умови стресу, викликаного важкими металами Рослинний матеріал та умови культивування Дослідження проводились на рослинах Nicotiana...
-
Життєздатність пилку - це його здатність проростати на приймочці маточки за наявності усіх необхідних сприятливих умов. Зрозуміло, що життєздатний...
-
Клинические особенности применения - Ферменты в гастроэнтерологии
Одним из важных факторов, определяющих успех лечения, является правильный выбор ферментного препарата, его дозы и продолжительности лечения. При выборе...
-
Состав ферментных препаратов - Ферменты в гастроэнтерологии
При нарушении пищеварения применяются различные лекарственные средства, содержащие ферменты. В зависимости от состава ферментные препараты можно...
-
ФЕРМЕНТНЫЕ ПРЕПАРАТЫ В ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИИ - Ферменты в гастроэнтерологии
Ферментные препараты - это группа фармакологических средств, способствующих улучшению процесса пищеварения. Нарушения процесса пищеварения различной...
-
Переносимость и побочные эффекты - Ферменты в гастроэнтерологии
Побочные эффекты при применении ферментных препаратов встречаются крайне редко (менее 1%) и носят чаще всего дозазависимый характер. В моче больных,...
-
Профілактика передачі ВІЛ від матері до дитини - ВІЛ-інфекція у дітей
У зв'язку з зазначеною вище фемінізацією ВІЛ-інфекції вважаю за потрібне висвітлити основні форми профілактики передачі ВІЛ від матері до дитини....
-
Методи загартовування - Методи загартовування. Масаж
Загартовування -- це своєрідне тренування термоадаптаційних механізмів організму, їхня підготовка до своєчасної мобілізації, це один із методів...
-
Протягом кількох років нами проводилися цілеспрямовані дослідження з проблеми забруднення басейну Чорного моря баластними водами, в тому числі за...
-
Моніторингові дослідження морського середовища проведені в бухтах внутрішніх акваторій портів Північно-західної частини Чорного моря. Спостереження...
-
Форма тіла пінгвінів обтічна, що ідеально для пересування у воді. Мускулатура і пристрій кісток дозволяють їм під водою працювати крилами майже як...
-
Энзимотерапия - Использование ферментов в медицинской практике в качестве лекарственных средств
Энзимотерапия - это использование ферментов в качестве лекарственных средств. Использование ферментов в качестве терапевтических средств имеет много...
-
Вихідний розчин. 0.200 г здрібненої на порошок сировини (250) (2. 9. 12) поміщають у круглодонну колбу місткістю 100 мл, додають 40 мл спирту(60 %,...
-
Краткая фармакологическая характеристика - Ферменты в гастроэнтерологии
Ацидин-пепсин - препарат, содержащий протеолитический фермент. Получают из слизистой оболочки желудка свиней. Таблетки по 0,5 и 0,25 г содержат 1 часть...
-
Гипервитаминоз -- острое расстройство в результате интоксикации сверхвысокой дозой одного или нескольких витаминов (содержащихся в пище или...
-
З числа збудників групи кишкових інфекцій, широко поширених у забруднених поверхневих водах, у якості показових можна використати сальмонели. Це...
-
Контамінанти та їх вплив на мікробіоту "водоймища" Для визначення найбільш актуальних проблем, що вимагають подальших наукових розробок, пов'язаних з...
-
Литература - Ферменты в гастроэнтерологии
1. Гребенев А. Л., Мягкова Л. П. Болезни кишечника. М., 1994.- 397с. 2. Григорьев П. Я., Яковенко А. В. Справочное руководство по гастроэнтерологии. М.,...
-
Для достовірної оцінки життєздатності пилку безсумнівне значення має спостереження над його проростанням безпосередньо на рильцях запилених квіток. З...
-
ДОСЛІДЖЕННЯ ВІЛ-ІНФЕКЦІЇ, Особливості ВІЛ-інфекції у дітей - ВІЛ-інфекція у дітей
Особливості ВІЛ-інфекції у дітей Надамо загальну характеристику ВІЛ-інфекції у дітей: ВІЛ-інфекція у дітей характеризується раннім та стрімким розвитком...
-
Україна за підсумком 2014 року експортувала 27 млн ??тонн зернових вантажів. Експорт цих вантажів відбувається через морські порти (95%), з...
-
Об'єкти та методи досліджень У дослідах використовували гербіциди Зеллек Супер, к. е. (галоксифоп, 30 г/л діючої речовини); Арамо 50 (тепралоксидим, 50...
-
Властивості води, Чудесні зцілення водою - Водойми рідного краю. Їх стан та охорона
Володимир Леліков вважає, що вода, яку ми споживаємо, впливає на емоційний стан людини та здатність її організму до цілісного, ефективного...
-
Гриби розмножуються безстатевим і статевим способами. Безстатеве розмноження відбувається частинами міцелію або окремими клітинами, які дають початок...
-
У комплексному лікуванні хворих хронічним гломерулонефритом і пієлонефритом, поряд з медикаментозними засобами і повноцінною дієтою, широко...
-
Для визначення ефективності занять лікувальної гімнастики, відпустці процедур лікувального масажу і фізіотерапії на організм хворих на хронічний...
-
1. Самыми распространенными ферментативными препаратами являются комплексы ферментов желудочно-кишечного тракта (Фестал, Панзинорм форте, Мезим форте,...
Матеріали та методи дослідження - Будова і властивості ферментів