Біохімічні методи визначення життєздатності пилку (методи Шардакова, Діакону) - Визначення життєздатності пилку та зародкового мішка
Життєздатність пилку - це його здатність проростати на приймочці маточки за наявності усіх необхідних сприятливих умов. Зрозуміло, що життєздатний (живий) пилок - дуже активний фізіологічно, а нежиттєздатний - фізіологічно неактивний. Базуючись на цьому, розробили велику кількість методів визначення життєздатності пилку, але жоден з них не є універсальним або таким, що придатен для будь-яких видів рослин.
Метод В. С. Шардакова
Метод базується на тому, що життєздатний пилок містить у великій кількості фермент пероксидазу, а тому легко дає забарвлену сполуку за дії реактивів, які містять бензидин. Нежиттєздатний пилок не містить пероксидази, а тому не забарвлюється.
Для проведення дослідження життєздатності пилку в окремих склянках з темного скла готують чотири розчини.
- 1. 0,20 г бензидину основного в 100 мл 50%-го розчину етилового спирту; 2. 0,15 г нафтолу в 100 мл 50%-го розчину етилового спирту; 3. 0,25 г натрію вуглекислого в 100 мл дистильованої води; 4. 0,3% розчин перекису водню.
Безпосередньо перед використанням розчини (1, 2 і 3) змішують у невеликих рівних об'ємах. Цю суміш розчинів і 4-й розчин наливають в окремі крапельниці. Пилок поміщають на предметне скло і піпеткою додають краплю суміші розчинів (1, 2, 3) і через одну хвилину додають краплю розчину 4. Перемішують скляною паличкою і накривають покривним склом.
Спостереження проводять відразу після нанесення краплі розчину 4. Якщо численні бульбашки кисню, що виділяються, будуть заважати вивченню препарату, то їх видаляють підняттям покривного скла. Живий пилок забарвлюється в яскраво-рожевий або темно-червоний колір завдяки наявності пероксидази, а мертвий залишиться безбарвним або жовтуватим. Підрахунки проводять не менше, ніж у 5-х полях зору мікроскопу, заповнюють таблицю.
Таблиця 2
Визначення життєздатності пилку за методом В. С. Шардакова
Вид рослини |
*** | |||||
Стан пилкових |
Поле зору |
Середній | ||||
Зерен |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Відсоток |
Забарвлені пилкові |
Життєздатного | |||||
Зерна |
Пилку | |||||
Незабарвлені пилкові | ||||||
Зерна | ||||||
Життєздатні | ||||||
У кожному полі зору, | ||||||
% |
Для свіжозібраного пилку цей метод дає задовільні результати, але для пилку, який зберігався, результати виходять дещо завищені.
Метод П. І. Діакону
Життєздатність пилку за методом П. І. Діакону оцінюють за ступенем активності сукциндегідрази. Відомо, що дихання клітин найбільш пов'язане з життєвими процесами і здійснюється за участю ферментів дегідраз. У разі припинення дихання можна говорити про загибель клітин.
Зміну активності сукциндегідрази можна легко визначити за допомогою безбарвного розчину хлориду трифенілтетразола. За наявності активної сукциндегідрази хлорид трифенілтетразола відновлюється до формазану, що має червоний колір. У разі припинення життєвих процесів формазан не утворюється, забарвлення клітин не відбувається.
Для проведення досліджень потрібно виготовити буферний розчин Серенсена з рН 717 за прописом: для 10 мл фосфатного буферного розчину беруть 7 мл 1/15М розчину Na2HРО4-2H2О та додають до нього 3 мл 1/15М розчину КH2РО4.
На предметне скло наносять краплю буферного розчину та додають трохи досліджуваного пилка. Витримують 4-5 хвилин, після цього обережно фільтрувальним папером відсмоктують буферний розчин і додають 1-2 краплі розчину хлориду трифенілтетразолу. Після цього препарат накривають покривним склом і ставлять у термостат на 30 хвилин при температурі 37 єС.
Після завершення експозиції препарат досліджують під мікроскопом, визначаючи забарвлення пилкових зерен не менше, ніж у п'яти полях зору і заповнюють наведену нижче таблицю:
Таблиця 3
Визначення життєздатності пилку за методом П. І. Діакону
Вид рослини |
*** | |||||
Стан пилкових |
Поле зору |
Середній | ||||
Зерен |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Відсоток |
Забарвлені пилкові |
Життєздатного | |||||
Зерна |
Пилку | |||||
Незабарвлені пилкові | ||||||
Зерна | ||||||
Життєздатні | ||||||
У кожному полі зору, | ||||||
% |
Червоне забарвлення пилкових зерен вказує на їх життєздатність. Мертві пилкові зерна зовсім не забарвлюються та залишаються жовтими.
Похожие статьи
-
Для достовірної оцінки життєздатності пилку безсумнівне значення має спостереження над його проростанням безпосередньо на рильцях запилених квіток. З...
-
Прийнято розрізняти життєздатність і здатність до запліднення пилкових зерен. Життєздатність пилкових зерен - це здатність чоловічого гаметофіту до росту...
-
Розвиток пилку у нормі і за патології - Визначення життєздатності пилку та зародкового мішка
Розвиток чоловічого гаметофіту у покритонасінних відбувається за єдиним планом і складається з ряду процесів, кожен з яких є результатом попереднього та...
-
Методи ідентифікації лікарських засобів
Аналіз будь-якого ЛП або ЛР починається з доведення того, що маєм справу із тим препаратом, назва якого вказана на маркуванні. Дослідження на тотожність...
-
Рослинний матеріал та умови стресу, викликаного важкими металами Рослинний матеріал та умови культивування Дослідження проводились на рослинах Nicotiana...
-
Підсумовуючи наведені дані, відмічаю наступне: ? Досліджувана лікарська рослинна сировина пасифлори інкарнатної містить істинні алкалоїди індольного...
-
Це непряме визначення глибини дефекту кислотної ерозії емалі після її протравлення розчином НСL. Крапля 1 ммоль/л НСL наноситься на очищену і висушену...
-
Вихідний розчин. 0.200 г здрібненої на порошок сировини (250) (2. 9. 12) поміщають у круглодонну колбу місткістю 100 мл, додають 40 мл спирту(60 %,...
-
Методи рефлексодіагностики, Аурикулодіагностика - Рефлексотерапія
Для встановлення акупунктурного діагнозу, тобто ступеня функціонального дисбалансу (надлишок, не достаток)- окремих меридіанів, внутрішніх органів чи...
-
Метод сигмальних відхилень: порівнюються результати антропометричних досліджень дитини (довжина та маса його тіла, окружність грудної клітини) з даними...
-
Опис сировини (ДФУ) Ідентифікацію сировини проводять за ДФУ: А. Стебла від зелених до сірувато-зелених або коричнюватих, здерев'янілі, порожнисті, уздовж...
-
Кількісне визначення вмісту аскорбінової кислоти - Фармакогностичне вивчення рослин роду хризантема
Кількісне визначення кислоти аскорбінової проводили згідно ДФ ХІ видання [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10]. 20,0 г (точна наважка) сировини переносили в...
-
Визначення проводили згідно ДФ ХІ видання [3, 6-5, 8, 9]. 5,0 г (точна наважка) подрібненої сировини переносять у колбу місткістю 250 мл, заливають 200...
-
Кількісне визначення вмісту дубильних речовин - Фармакогностичне вивчення рослин роду хризантема
Кількісне визначення дубильних речовин проводили згідно ДФ ХІ видання. Визначення кількісного вмісту дубильних речовин проводили перманганатометричним...
-
Кількісне визначення вмісту флаваноїдів Кількісне визначення флавоноїдів проводили згідно ДФ ХІ видання [1, 2-6, 7, 8, 9, 10]. 1,0 г (точна наважка)...
-
Мікропресорефлексотерапія та вібромасаж. Методи та техніка впливу. - Рефлексотерапія
Мікропресорефлексотерапія (цуботерапія) є способом пролонгованої дії на механорецептори і полягає в накладанні і фіксації в зоні точок акупунктури кульок...
-
Предмет, задачі і методи патологічної фізіології
ПРЕДМЕТ, ЗАДАЧІ І МЕТОДИ ПАТОЛОГІЧНОЇ ФІЗІОЛОГІЇ Патологічна фізіологія - це наука, яка вивчає загальні закономірності виникнення, розвитку і завершення...
-
Неінвазивні методи діагностики атопічного дерматиту у дітей
Мета дослідження - вивчення перспективи і можливості застосування дерматоскопії та ультрасонографії шкіри як методів об'єктивної оцінки стану шкіри при...
-
Встановлено, що хірургічне лікування гриж міжхребцевих дисків поперекового відділу хребта нерідко пов'язане з недостатнім і суб'єктивним прогнозуванням,...
-
Виявлення ізоферментних спектрів гваякол пероксидази в ПААГ в нативних умовах проводили за загальною методикою ... []. Гель для електрофорезу готували як...
-
Поняття про групи крові та резус-фактор - Кровотечі: визначення, основні ознаки кровотеч
Грумпа кромві -- це класифікація крові за наявністю або відсутністю певних успадковуваних антигенів на поверхні еритроцитів. Такими антигенами можуть...
-
Виявлення дубильних речовин, Виявлення сапонінів - Фармакогностичне вивчення рослин роду хризантема
1. Реакція з розчином залізо-амонійних галунів. До 2 мл витягу додавали 4 краплі розчину залізо-амонійних галунів. Спостереження: чорно-синє забарвлення....
-
ДОСЛІДЖЕННЯ ВІЛ-ІНФЕКЦІЇ, Особливості ВІЛ-інфекції у дітей - ВІЛ-інфекція у дітей
Особливості ВІЛ-інфекції у дітей Надамо загальну характеристику ВІЛ-інфекції у дітей: ВІЛ-інфекція у дітей характеризується раннім та стрімким розвитком...
-
У комплексному лікуванні хворих хронічним гломерулонефритом і пієлонефритом, поряд з медикаментозними засобами і повноцінною дієтою, широко...
-
Перша допомога - Кровотечі: визначення, основні ознаки кровотеч
В умовах подання першої допомоги можлива тільки тимчасова або попередня зупинка кровотечі на період, необхідний для доставки потерпілого до лікувального...
-
Кровотечі: визначення, основні ознаки кровотеч - Кровотечі: визначення, основні ознаки кровотеч
Кровотеча -- це витікання крові із кровоносних судин при порушенні їхньої цілісності. Класифікація Причиною кровотечі може бути ушкодження судин...
-
Об'єктом проведеного дослідження стали процеси відтворення населення, а саме вплив радіаційного чинника та паління на ризик виникнення репродуктивних...
-
У розділі представлена загальна методологія досліджень, яка сприяла досягненню мети відповідно до комплексу теоретичних, інструментальних та серії...
-
Для визначення ефективності занять лікувальної гімнастики, відпустці процедур лікувального масажу і фізіотерапії на організм хворих на хронічний...
-
Кровотеча артеріальний кров вентиляція Штучну вентиляцію легень (ШВЛ) на місці пригоди можна здійснити такими засобами: "Із рота в рот" та "Із рота в...
-
Екстракт пасифлори протипоказаний при стенокардії, інфаркті міокарда, вираженому атеросклерозі. Не можна поєднувати з прийомом...
-
Пасифлора інкарнатна (Passiflora incarnata) містить флавоноїди (вітексин, сапонарін, віценін тощо), мальтол, кумарини, ціаноглікозиди, алкалоїди( гармін...
-
Методи загартовування - Методи загартовування. Масаж
Загартовування -- це своєрідне тренування термоадаптаційних механізмів організму, їхня підготовка до своєчасної мобілізації, це один із методів...
-
Визначення числа Streptococcus mutans, Емаль зуба - Карієсогенна ситуація в порожнині рота
За методикою Dentocult SMR після стимуляції слиновиділення парафіном пластмасовою паличкою декілька разів проводять забір слини під язиком та зі спинки...
-
Алкалоїди - гарман, гармін, гармол. Вони об'єднані в групу, що отримала назву "тип гарману" (b-карболіну). Але чим складніша структура таких речовин, тим...
-
Алкалоїди, їх класифікація Алкалоїди - це група органічних азотовмісних речовин, переважно рослинного походження, що мають лужний характер та високий...
-
З найдавніших часів життя людини пов'язане з лісом, з лікарськими рослинами. Ще в сиву давнину люди помітили, що багато рослин мають цілющі властивості,...
-
Визначення статі дитини - Шляхи передачі спадкової інформації
Щоб визначити стать майбутньої дитини, необхідно спочатку зрозуміти, яку хромосому несе сперматозоїд -- X або Y. Яйцеклітина жінки серед 23 хромосом...
-
Гриби розмножуються безстатевим і статевим способами. Безстатеве розмноження відбувається частинами міцелію або окремими клітинами, які дають початок...
-
Біоадаптивне управління (англ. biofeedback -- біологічний зворотний зв'язок (БЗЗ)) -- перспективний напрям сучасної медицини. Це нефармакологічне...
Біохімічні методи визначення життєздатності пилку (методи Шардакова, Діакону) - Визначення життєздатності пилку та зародкового мішка