Ферментативные методы, Микробиологические методы - Методы количественного определения витамина B6

Определение коферментных форм витамина В6 ферментативными методами основано на реакции взаимодействия фосфорилированных форм витамина - пиридоксальфосфата и пиридоксаминофосфата, присутствующих в исследуемом материале, с апоферментами некоторых пиридоксалевых ферментов. В определенных интервалах скорости ферментативных реакций пропорциональны концентрации исследуемых коферментов. Впервые для определения пиридоксальфосфата в биологическом материале использован апофермент тирозиндекарбоксилазы Str. faecalis, выращенного на синтетической среде, лишенной витамина В6. Позже для этой цели был предложен апофермент триптофаназы из Е. coli, полученный в условиях, обеспечивающих максимальную диссоциацию кофермента. Наиболее чувствительным методом является определение фосфорилированных форм витамина В6. с помощью апофермента аспартаттрансаминазы, полученного из дрожжей. Этот метод позволяет определять до 0,00001 мкг/мл суммы пиридоксальфосфата и пиридоксаминфосфата.

Микробиологические методы

При изучении биологической роли витамина В6, в частности как ростового фактора для микроорганизмов, установлено, что в нем нуждаются главным образом молочнокислые бактерии и дрожжи. Различные формы витамина В6 одними и теми же микроорганизмами используются по-разному. Это дало возможность разработать методы дифференциального микробиологического определения различных форм витамина В6, используя молочнокислые бактерии и дрожжи. Поскольку микроорганизмы в противоположность животным для роста могут использовать только свободные, не связанные с белками формы витамина В6, перед применением микробиологических методов исследуемый образец необходимо подвергать автоклавированию в кислой среде. Дрожжи Saccharomyces carlsbergensis способны использовать для роста в одинаковой степени пиридоксин, пиридоксаль и пиридоксамин, поэтому дрожжевой метод нашел применение для количественного определения суммарного содержания витамина В6 в исследуемом материале.

Похожие статьи




Ферментативные методы, Микробиологические методы - Методы количественного определения витамина B6

Предыдущая | Следующая