Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам - Бактериологическое исследование на анаэробные бактерии и чувствительность к антибиотикам

Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам подразделяют на две группы:

    1. Диффузные методы:
      - Диско-диффузный метод; -Е-тест.
    2. Методы серийных разведений антибиотика в питательной среде:
      -разведение препарата в жидкой питательной среде; -разведение препарата в плотной питательной среде.

Диффузные методы

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Диско-диффузный метод

Диффузные методы определения чувствительности основаны на диффузии антибактериальных препаратов из носителя в плотную питательную среду. Стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, засевают "газоном" на питательную среду. На поверхность посева укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, концентрации которых соответствуют требованиям ВОЗ. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубирования посева в термостате оценивают чувствительность микроорганизма (рис. 5). Если исследуемый микроорганизм чувствителен к одному из препаратов, вокруг соответствующего диска образуется зона задержки роста, где концентрация антибиотика превосходит минимальную подавляющую концентрацию (МПК). Устойчивые к препарату культуры не образуют стерильных зон. Однако диффузный метод позволяет лишь косвенно судить о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (устойчивый, малоустойчивый, чувствительный, высокочувствительный штамм).

Е-тест.

Это модификация диско-диффузного метода, однако, пользуясь этим методом, можно определить МПК. Для реализации этого метода используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. Полоски помещают на поверхность засеянной питательной среды. Если бактерии чувствительны к действию препарата, вокруг участков полоски, содержащих его ингибирующие концентрации, образуется эллипсовидная зона задержки роста, в месте пересечения которой с полоской Е-теста получают значение МПК.

Методы серийных разведений

Основаны на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибактериальных препаратов - величины его МПК. МПК - минимальная концентрация, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма в бульонной культуре или на плотной питательной среде.

Метод серийных разведений в жидкой питательной среде

Антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон). Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком. После инкубации при температуре 37 С проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной концентрацией, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма. Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 6). МПК - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий

Метод серийных разведений в плотной питательной среде

Этот метод аналогичен методу серийных разведений в жидкой питательной среде, однако определение МПК требует более сложных манипуляций. Готовят двойные серийные разведения препарата от 1:10000 до 1:320000, затем вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки, содержащие расплавленный и остуженный до 45 С агар. Затем содержимое пробирок быстро выливают в стерильные чашки Петри и после застывания питательной среды засевают исследуемый микроорганизм. После инкубации определяют МПК по отсутствию роста на чашках, содержащих наименьшие концентрации препарата.

Похожие статьи




Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам - Бактериологическое исследование на анаэробные бактерии и чувствительность к антибиотикам

Предыдущая | Следующая