Совершенствование классической схемы выделения клебсиеллезных бактериофагов
В последнее время научно-исследовательские лаборатории многих стран (в т. ч.и России)особое внимание уделяют диагностике инфекционных заболеваний, характеризующихся тяжелым течением, а нередко и летальным исходом. К их числу относятся клебсиеллезные инфекции.
Представители рода Klebsiella достаточно широко распространены в природе. Так, если в 90-ые годы XX века насчитывалось около 5-6 видов бактерий данного рода, то сегодня их более 12 (Kl. pneomoniae, Kl. ozaenae, Kl. rhinoscleromatis, Kl. ornithinolytica, Kl. oxytoca, Kl. planticola, Kl. terrigena, Kl. mobilis, Kl. singaporensis, Kl. granulomatis, Kl. variicola, Kl. aerogenes, Kl. milletis, Kl. sinegalensis). Большинство видов еще малоизучены, о степени патогенности, области распространения сложно что-либо сказать точно. Все еще находится в процессе изучения и представляет собой огромный интерес для ученых. клебсиеллезный инфекционный бактериофаг
Клебсиеллы - это сравнительно устойчивые бактерии. При нагревании до 65°С погибают через 1 час, но при комнатной температуре могут сохраняться месяцами. Среди этих микроорганизмов имеются патогенные варианты, способные вызывать у животных и людей самостоятельные заболевания.
Исследования по изучению бактериофагов, (уже с 1915 года) позволили широко использовать их для решения многих задач в микробиологии, вирусологии, генетике, биохимии, иммунологии, радиобиологии, биотехнологии и других областях биологических исследований. Фаги являются одним из наиболее подходящих объектов для глубокого изучения ряда вирусологических проблем и, в частности, взаимоотношения вируса с клеткой-хозяином. При их использовании, возможно, моделировать как явно выраженную продуктивную инфекцию, так и потенциальное вирусоносительство в форме лизогении.
В ветеринарии и медицине практическое использование фагов связано с изучением наследственной изменчивости бактерий (трансдукция, фаговая конверсия), индикацией и идентификацией патогенных бактерий, фаготерапией и фагопрофилактикой.
Однако в течение двух последних десятилетий преобладало мнение, что изучение фагов уже не может дать науке ничего принципиально нового. В России в момент возникновения генной инженерии произошел резкий отход от изучения фагов в пользу лучше финансируемых исследований. Лишь несколько лабораторий в России продолжают до настоящего времени фундаментальные исследования фагов.
Исследования с использованием фагов позволили раскрыть механизмы таких фундаментальных биологических процессов, как репликация ДНК, рекомбинация, транскрипция и генная регуляция. Благодаря изучению фагов открылись также возможности разработки многих важных методов и направлений генной инженерии.
В наличии у лабораторий отсутствуют диагностические клебсиеллезные фаги. Следовательно, получение специфических фагов, активных в отношении бактерий данного рода, является актуальным.
Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ульяновской ГСХА им. П. А. Столыпина определила одно из приоритетных научных направлений - выделение и изучение бактериофагов. На кафедре в сотрудничестве с ведущими научными центрами страны (ВНИИВСГЭ, ВГНКИ, ВНИИЗЖ, ВНИИВиМ) более тридцати лет ведется научно-исследовательская работа по этой проблеме, в частности, изучение бактериофагов малоизученных в ветеринарии энтеробактерий. Выбор этого научного направления связан с тем, что в последние годы, благодаря работам отечественных и зарубежных исследователей, расширилось представление об этиологическом значении бактерий семейства Enterobacteriaceae в патологии животных и человека. Представители этого семейства широко распространены в природе и большинство из них является нормальной микрофлорой желудочно-кишечного тракта животных и человека. Однако среди этих микроорганизмов имеются патогенные рода, виды и варианты, способные вызывать у животных и людей как самостоятельные заболевания (эшерихиоз, сальмонеллез, иерсиниоз, клеб - сиеллез и др.), так и энтериты, нагноение ран, абсцессы, маститы, эндометриты, менингиты, пневмонии, сепсис и т. п., пищевые и кормовые токсикозы и токсикоин-фекции и др.
Имеющаяся на сегодняшний день схема выделения бактериофагов бактерий рода Klebsiella, признанная как классическая, имеет ряд недостатков, основным из которых является ее трудоемкость (большой расход сред, времени). Поэтому цель данного исследования заключалась в разработке оптимальной схемы выделения бактериофагов бактерий рода рода Klebsiella.
Материалы и методы исследования. Основным этапом наших исследований стало выделение бактериофагов из объектов внешней среды. Материалом служили следующие объекты: сточные воды и образцы земли фермерского хозяйства (Тереньгульский р-он, Ульяновской области), кровь МРС (больные свиньи), фекалии (куриные).
Все образцы (4 образца) фильтровали через бумажный фильтр для освобождения от механических примесей. В колбу, содержащую стерильный МПБ в количестве 50 миллилитров, вносили 20 мл фильтрата каждого образца и по 1 мл всех имеющихся у нас штаммов бактерий рода Klebsiella (13 музейных штаммов кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской ГСХА им. П. А. Столыпина). Таким образом, каждый образец испытывался на наличие фагов ко всем имеющимся культурам бактерий рода Klebsiella. Колбу помещали в термостат и инкубировали в течение 5 дней при 37 °С. После этого содержимое колбы разливали в стерильные пробирки, центрифугировали, одну из пробирок с супернатантом обрабатывали хлороформом (в разведении 1 : 10), а вторую прогревали в водяной бане при 58 - 60 °С в течение 30 минут. Такая обработка смеси позволяет выделить термоустойчивые фаги и фаги, устойчивые к воздействию хлороформа.
Результаты и выводы исследования. Полученные пробы исследовали методом "стекающей" капли. Для этого на 13 чашках с МПА были "разбиты" 8 секторов (4 по темературе и 4 по устойчивости к хлороформу). Чашки ставили в термостат на 18 - 24 часа при 37 °С. Наличие негативных колоний или зон лизиса на газоне роста индикаторной культуры свидетельствовало о присутствии в исследуемом материале бактериофага.
В результате проведенных исследований было установлено, что бактериофаг имелся лишь в образце с землей. Причем, данный фаг можно охарактеризовать как устойчив к обработке хлороформом и не термостабилен. Индикаторной культурой данного фага является штамм K. pneumonia №81/1
Разделение чашки с МПА на сектора, позволило нам одновременно происследовать 4 образца патологического материала всех 13 клебсиеллезных штаммов. Результаты были наглядно представлены в сравнении, что облегчило формулировку выводов.
Библиографический список
- 1. Габрилович И. М. Основы бактериофагии. // Минск: "Высшая школа", 1973. 2. Габрилович И. М., Азаматова А. Б., Хакешева Т. А. Об использовании бактериофагов для идентификации клебсиелл // Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. М., 1983. С. - 139 -140. 3. Ревенко И. П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. Киев: Урожай, 1978. - С. 88. 4. Kaur K., Kaul M., Chhiber S. Enterotoxigemicity, klebocinogeny and antibiotic resistance pattern of food isolated of Klebsiella pneumoniae // Folia Microbiol. 1988. - V. 3, № 6. - P. 500 - 506. 5. Podschun R., Penner I., Ullmann U. Interaction of Klebsiella capsule type 7 with human polymorphonuclear leucocytes // Microb. Pathog. 1992. - V. 13.-P. 371 -379.
Похожие статьи
-
Материал для исследования следует брать по возможности до начала химиотерапии и лучше во время вскрытия или дренирования гнойного очага. Особенно...
-
Специфика классического естествознания - Неклассическая наука и ее концептуальные основы
Постепенно в первой половине XX в. новая, неклассическая модель естествознания превратилась в целостную систему знания. Вес меньше места в ней оставалось...
-
Салициловая кислота Письменный контроль Дата изготовления: Номер рецепта: № 1 Rp: Ung. Ас. salicylici 2% - 10, 0 D. S Подпись изготовившего: Подпись...
-
Выделение и очистку ДНК проводили методом по (Current protocols in, 1994). Для проведении ПЦР культуры выращивали в пробирках на среде ВКМ №55 при...
-
В процессе производства раствора дезоксикортикостерона ацетата в масле 0,5% для инъекций химических превращений не происходит. Технологическая схема...
-
Основные задачи: - регулирование процессов возбуждения и торможения в ЦНС; - улучшение функции дыхания, кровообращения и пищеварения,...
-
Штаммы, используемые в работе, находились в лиафилизированном состоянии. Лиофилизация ? процесс высушивания под вакуумом из замороженного состояния....
-
Выделение ДНК из лейкоцитов венозной крови Выделение ДНК проводили стандартным методом с использованием фенол-хлороформной очистки [98, 120]. К 0.7 мл...
-
Клостридии ботулизма - Частная микробиология
Клостридии ботулизма (CI. botulinum) были выделены в 1895 г. ван Эрменгемом из остатков пищи и органов людей, умерших от ботулизма. Морфология и...
-
Генетические методы изучения биопленок - Использование микробных биопленок в промышленности
Для выявления генов, участвующих в генетическом контроле любого процесса, используются методы направленного и ненаправленного (инсерционного)...
-
Бактериофаг - Строгие постулаты Коха
Бактериофаг является умеренным фагом, т. е. он может либо переходить из клетки в клетку в процессе инфекции, либо передаваться от одного поколения к...
-
Объект исследования Объектом исследований In vitro Служили первичные диссоциированные культуры клеток гиппокампа, полученные от 18-дневных мышиных...
-
Пути поступления радионуклидов в организм. Радиоактивные вещества могут проникать в организм животных через легкие при вдыхании загрязненного воздуха;...
-
В фармацевтической практике используют высушенные, реже свежие подземные органы многолетних растений, собранные чаще осенью или ранней весной, очищенные...
-
У холерных вибрионов выделяют Термостабильные О- И термолабильные Н-Аг . О-антигены . По структуре О-антигены выделяют 139 серогрупп; Возбудители холеры...
-
Импринтинг как научение - Классические условные рефлексы
Лоренц (Lorenz, 1935 Lorenz, 1935, Der Kumpan in der Umwelt des Vogels.) считал, что импринтинг принципиально отличается от форм научения; однако в...
-
Ассоциативное научение - Классические условные рефлексы
Для рассмотрения гипотезы о том, что животные обладают механизмами обнаружения и узнавания причинных отношений, следует дать определение природы таких...
-
Инструментальное научение - Классические условные рефлексы
В то время как исследование классических условных рефлексов было начато в России, принципы инструментальных условных рефлексов были открыты и разработаны...
-
Привыкание - Классические условные рефлексы
Многократное применение стимула ведет к повышенной реактивности. Этот феномен, называется привыканием, представляет собой форму не ассоциативного...
-
"Классический" метод Сэнгера (ферментативный) - Секвенирование ДНК
В настоящее время "метод терминации цепи", или "дидезокси метод", разработанный в 70-х гг. прошлого века Фредериком Сэнгером, является самым...
-
Возможные последствия клонирования человека - Клонирование
Споры по поводу запрещения клонирования чуть было не привели к свертыванию проекта Уилмута, но ученым удалось отстоять результаты своей работы и...
-
Возбудитель чумы - Частная микробиология
Специфическая профилактика не разработана. Для лечения используют антибиотики широкого спектра действия. Таксономия. Y. enterocolitica относится к отделу...
-
Предмет генетической эпидемиологии, Генетическая эпидемиология - Генетические процессы в популяциях
Генетическая эпидемиология В середине 50-х годов 20 века оформилось новое научное направление - генетическая эпидемиология, которая реализуется при...
-
Диагноз и дифференциальный диагноз - Эпидемиологические особенности бешенства
Предварительный диагноз ставят с учетом эпизоотологических и клинических показателей. Принимают во внимание характер эпизоотической ситуации в данной...
-
Группа крови и интеллект - Взаимосвязь группы крови, темперамента и заболеваемости человека
Разумом именуют умение мозга так организовать собственную деятельность, что вся имеющая в наличие информация станет применяться с максимально...
-
Современные биотехнологии - Краткий очерк теории эволюции. Концепции современного естествознания
Биотехнологии основаны на использовании живых организмов и биологических процессов в промышленном производстве. На их базе освоено массовое производство...
-
Научное познание: структура и методы - Естествознание - единая наука о природе
Структура научного познания Понятие метода и методологии (и границы научного метода) Классификация методов научного познания Главное назначение научной...
-
Бруцеллез ( Brucellosis ) - инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением...
-
Научная анатомия - История анатомии человека
Если кого и можно называть отцом анатомии, так это, конечно же, Везалия. Андреас Везалий естествоиспытатель, основоположник и творец научной анатомии,...
-
Ветспециалистам, осуществляющим отбор проб для исследования в ветлабораторию, необходимо знать, что патологический материал от павшего и вынужденно...
-
Строгие постулаты Коха - Строгие постулаты Коха
Каковы же те основные положения, сформулированные Робертом Кохом (1843-1910), которых должен придерживаться микробиолог при каждом обнаружении...
-
Кроме вод мирового океана общим достоянием является околоземное и космическое пространство. 4 октября 1957 - запуск первого искусств. спутника в СССР. 12...
-
Развитие микробиологии определялось конкретными историческими условиями: развитием социально - экономической основы общества, обусловленным ростом...
-
Возможные последствия клонирования человека - Клонирование: достижения, перспективы, проблемы
Споры по поводу запрещения клонирования чуть было не привели к свертыванию проекта Вилмута, но ученым удалось отстоять результаты своей работы и...
-
ВВЕДЕНИЕ. - Насекомые-вредители сада и огорода
Интерес к насекомым зародился в глубокой древности. Человек издавна сталкивался с вредом, наносимым насекомыми, и использовал полезных насекомых. В...
-
Оказалось, что в глубинах океана существуют места, где жизнь в буквальном смысле бьет ключом. Удивительно богатые сообщества возникают там, где из...
-
Биоэтика - Этические принципы научных исследований
Эстетический биосинтез наследственность Биоэтика - система новых этических стандартов в сфере экспериментальной и теоретической деятельности, биологии и...
-
Тотипотентность клеток - Клеточная теория
Как же возникают разнообразные типы клеток в многоклеточных организмах? Известно, что организм человека, развившийся всего из одной исходной клетки,...
-
Система определения некоторых факторов персистенции энтеробактерий
В настоящее время для определения безопасности пищи для организма человека необходима экспертиза питьевой воды и пищевых продуктов, произвести которую...
-
В целях повышения эффективности стоматологического ортопедического лечения челюстно-лицевых больных стоит острая необходимость исследования микрофлоры...
Совершенствование классической схемы выделения клебсиеллезных бактериофагов