Методы исследования биопленок на разных видах материалов съемных протезов. Группы пациентов, причины исследования - Образование биопленок на съемных протезах

В целях повышения эффективности стоматологического ортопедического лечения челюстно-лицевых больных стоит острая необходимость исследования микрофлоры съемных протезов и полости рта пациентов с дефектами зубочелюстного аппарата. Для исследований могут быть отобраны различные группы пациентов (по полу, возрасту и т. д.), использующих различные съемные зубные протезы, изготовленные из различных материалов (гибкие и не гибкие протезы).

Важной причиной, обуславливающей необходимость данных исследований является то, что у пациентов, использующих съемные зубные протезы, нередко развиваются осложнения, обусловленные накоплением резидентной микрофлоры рта разной степени вирулентности. Нарушение микробиоценоза, развивающееся в процессе адаптации, приводит к воспалению слизистой оболочки протезного ложа и протезным стоматитам и т. д.

Несмотря на то, что происходит постоянное совершенствование методик изготовления съемных зубных протезов и применение новых конструкционных материалов, после наложения съемных зубочелюстных протезов, происходит изменение микрофлоры полости рта, что приводит к ряду воспалительных процессов. Тяжесть осложнений определяет медико-биологическую и социальную значимость исследований зубочелюстного протеза у пациентов.

Для исследования биопленок на разных видах материала съемных зубных протезов, а также полости рта используют бактериоскопический и бактериологический методы исследования. Савкина Н. И. Клинико-микробиологическое обоснование выбора материала зубочелюстного протеза. - М., 2004. - 141 с.

Бактериоскопический (микроскопический) метод исследования микрофлоры рта и зубных протезов представляет собой совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных свойств бактерий (микробов) в исследуемом материале с помощью микроскопии. Применяют для идентификации выделенной чистой культуры.

В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов:

    1) висячую каплю; 2) придавленную каплю; 3) тонкий мазок; 4) толстую каплю; 5) агар-микроскопию; 6) препарат-отпечаток; 7) фиксированный мазок.

Приготовление исследуемого материала состоит из нескольких этапов:

    1) забора материала для исследования; 2) приготовления препарата. Для этого исследуемый материал наносят на чистое, обезжиренное предметное стекло с помощью бактерицидной петли и распределяют по площади в 1 см2. Плотный (густой) материал вносят бактериальной петлей в каплю физ. раствора, тщательно размешивают и распределяют по стеклу на таком же пространстве, как и в предыдущем случае. Величина вносимого материала зависит от предполагаемого количества бактерий в нем. Препарат должен быть таким, чтобы наступило хорошее прокрашивание и обесцвечивание всех бактерий и чтобы была возможность наблюдать за единичными бактериями; 3) приготовленный мазок высушивают на открытом воздухе или в теплой струе воздуха (от газовой горелки или воздушного полотенца); 4) препарат фиксируют на стекле для обеспечения безопасности дальнейшей работы, прикрепления бактерий к стеклу, лучшего восприятия ими краски, поскольку структуры убитых бактерий легче и прочнее воспринимают красители; 5) фиксированные мазки окрашивают одним из простых или специальных методов крашения, погружая мазок в краситель или наливая его на препарат так, чтобы вся поверхность препарата была покрыта сплошным слоем красителя, и хорошо просушивают на воздухе. Плохо высушенный препарат дает мутное изображение при иммерсионной микроскопии из-за образования эмульсии; 6) микроскопии мазка. Ценность данного метода состоит в простоте, доступности методик и быстроте получения результатов (30 - 60 мин и менее). Однако специфичность его в связи с близостью морфологии разных видов мала, чувствительность ограничена (около 105 бактерий в 1 мл), информация, полученная с его помощью, невелика. Результаты, полученные при помощи этого метода обычно можно использовать как ориентировочные в основном для индикации высоких таксонов. Ценность такого метода резко возрастает при исследовании простейших, грибов и обработке препарата люминесцирующими красками. Etienne O. M., Taddei C. A. Use of bar-clip attachments to en-hance the retention of a maxillofacial prosthetic obturator: a clinical re-port //J. Oral Rehabil. - 2004. - Vol. 31, N 6. - P. 618-621.

Наряду с этим проводят оценку микробной колонизации полости рта и зубных протезов с применением культурального (бактериологического) метода.

Бактериологический (культуральный) метод - совокупность методик искусственного культивирования микроорганизмов на питательных средах в целях их идентификации и определения ряда физиологических свойств культуры и др. Современные методы изучения большинства биологических свойств бактерий возможны только при наличии чистой культуры. Контаминация культуры другим видом микробов, как правило, ведет к искажению результатов и неправильному заключению.

Поэтому первой задачей этого метода является получение чистой культуры какого-либо вида (вара) из микробной ассоциации и предупреждение контаминации посторонней микрофлорой материала для исследования и микробной культуры на всех этапах исследования. Это возможно при заборе материала в стерильных условиях в стерильную посуду, посеве материала в стерильные среды стерильным инструментом, предупреждении попадания микробов из воздуха в процессе доставки, хранения и инкубации материала и засеянных питательных сред.

Вторая задача данного метода - идентификация микробов выделенной чистой культуры, третья - определение дополнительных свойств, например, чувствительности к антибиотикам, вирулентности.

Этапы бактериологического метода:

    1) забор материала; 2) микроскопия исследуемого материала. Этот этап часто не выполняется, хотя, несмотря на меньшую чувствительность, предварительная микроскопия в ряде случаев дает ориентировочные сведения о возбудителе и позволяет выбрать необходимые для посева среды; 3) обработка исследуемого материала физическими или химическими факторами в целях удаления или уменьшения посторонней микрофлоры. Эта мера применяется, например, при выделении кислотоустойчивых и спорообразующих микробов; 4) посев исследуемого материала на питательные среды для получения изолированных колоний; 5) инкубация засеянных питательных сред. Сроки и температура инкубации зависят от предполагаемой видовой принадлежности культуры. Обычно посевы выдерживают в термостате при 37°С 1-2 дня. Если рост отсутствует, срок инкубации может быть продлен еще на 2 - 3 дня. При более длительной инкубации необходимо предупредить высыхание среды, для чего посевы помещают в эксикатор с водой или пробки пробирок заливают парафином; 6) исследование колоний. Для изучения выбирают однородные изолированные колонии, располагающиеся далеко от краев чашки и по штриху петли, окружают их чертой, нумеруют. Если исследование ведется ненаправленно (полиэтиологичный процесс и пр.), то на основании результатов визуального осмотра выбирают по 2 - 3 колонии всех имеющихся на чашке типов и делают с них мазки; 7) пересев с выбранных колоний на среды накопления. Для этого с остатка колонии, в мазке которой выявлены однородные по форме и окраске бактерии, петлей, стараясь не задеть соседние колонии, забирают часть культуры и засевают на скошенный в пробирке МПА или специальную среду штрихом; 8) инкубация посевов в термостате до появления сплошного роста (обычно 1 -2 дня); 9) определение чистоты выросшей на скошенных средах культуры путем макроскопического осмотра роста и микроскопии мазка из него; 10) идентификация выделенной чистой культуры и в случае необходимости определение различных биологических свойств; 11) заключение о видовой принадлежности выделенной культуры и ее свойствах. Заключение дается на официальном бланке со ссылкой на номер, под которым эта культура занесена в лабораторный журнал.

Этот метод является основным является основным в диагностике большинства бактерий микрофлоры полости рта и зубных протезов. Он, как правило, обладает высокой чувствительностью, позволяющей выделить из, исследуемого материала чистую культуру, даже если в посевной дозе материала содержалось несколько десятков особей.

Для этого метода характерна высокая специфичность. Этот метод отличается сложностью, трудоемкостью, длительностью. Достоверные данные о составе микрофлоры полости рта и съемных зубных протезов и ее свойствах можно получить только при исследовании выборки из 3 -10 культур.

Материал с поверхности протеза обычно берут с помощью адгезивной пленки на 1, 7 и 12-е сутки после его установки. Результаты исследования обрабатываются статистически с вычислением средней величины, ошибки средней величины и вероятности различий.

После припасовки и наложения протеза количественное исследование выполняют с помощью адгезивной пленки диплен стандартного размера (0,5 см2). Ее накладывают на поверхность пластины в разные сроки для стандартного и воспроизводимого количественного исследования флоры биопленки, покрывающей протез. На всех протезных конструкциях отпечаток получают в области резцового сосочка, с внешней стороны, спустя час после наложения протеза в первый день, а затем на 7-е и 14-е сутки. Гаврилов Е. И. Протез и протезное ложе. - М.: Медицина, 1979. - 264 с.

Похожие статьи




Методы исследования биопленок на разных видах материалов съемных протезов. Группы пациентов, причины исследования - Образование биопленок на съемных протезах

Предыдущая | Следующая