Патологоанатомические изменения, Диагноз - Ассоциативные болезни птиц

При вскрытии трупов цыплят, павших в возрасте от нескольких часов до 7-10 дней, обнаруживают изменения, свойственные септическим заболеваниям. У молодняка 11-120-дневного возраста наблюдаются отложения пленок фибрина на перикарде, эпикарде, капсуле печени, кишечника, воздухоносных мешков и реже на других внутренних органах.

У взрослых кур и уток эта инфекция часто сопровождается серозно-фибринозным перитонитом, сальпингитом, синовитом. Кроме того, отмечается истощение, полнокровие и гипертрофия печени, катаральное воспаление оболочки двенадцатиперстной кишки. Содержимое кишечника жидкое, серовато-белого цвета с примесью слизи, иногда крови.

Заболевание цыплят колибактериозом иногда приводит к атрофии фабрициевой сумки.

Диагноз

Диагноз на колибактериоз в птицеводческих хозяйствах устанавливают на основании анализа эпизоотологических данных (возраст заболевшей птицы, очаговость, массовость поражения, динамика гибели птиц, сезонность и т. д.) с учетом клинического проявления болезни, патологоанатомических изменений и результатов бактериологического исследования патматериала от павших птиц.

Бактериологическая диагностика колибактериоза основана на выделении возбудителя в чистой культуре, изучение его биологических свойств, определения серологической группы и патогенности для лабораторных животных (белых мышей, цыплят).

В лабораторию направляют кроме свежих трупов (4-5) не менее 5-6 больных птиц с клиническими признаками. Больную птицу убивают в лаборатории и подвергают бактериологическому исследованию. При необходимости патологический материал консервируют 30%-ным стерильным водным раствором глицерина или 10%-ным раствором хлористого натрия.

Патологический материал засевают на МПА, МПБ и на чашках с дифференциальной средой Эндо или Левина (агар с эозином и метиленовой синькой). Посев на МПА и МПБ проводят пастеровской пипеткой. Посев в чашках на агар Эндо или Левина из селезенки, печени, желчного пузыря, сердца и костного мозга проводят пастеровской пипеткой по общепринятой методике.

Через 18-24 часа инкубирования посевов в термостате, их просматривают и при отсутствии роста выдерживают еще сутки. В тех случаях, когда на среде Эндо роста нет, а в МПБ отмечается помутнения среды, проводят микроскопию культуры и пересевают колонии на средах.

Исследованию подвергают культуры, полученные не менее чем из 2-х органов. С агара Эндо или Левина отсевают 2 типичные для эшерихий колонии, имеющие S-форму в две пробирки МПА. Одну пробирку используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические среды; вторую - для приготовления автоклавирования антигена, если кипяченный не будет агглютинироваться с поливалентными колисыворотками.

Типичные колонии характеризуются круглой, гладкой со слегка приподнятой в центре поверхностью, ровными краями, розового, красного, малинового цвета с металлическим блеском и без него - на среде Эндо, фиолетового или черного цвета на среде Левина.

У агаровых культур изучают культурно-морфологические, тинкториальные и биохимические свойства с целью проведения их родовой дифференциации.

Для изучения морфологических свойств микробов мазки окрашивают по Граму, подвижность определяют по характеру роста в полужидком МПА. Культурально-биохимические свойства изучают на наборе сред, куда входят: среды с углеводами и индикатором Андраде (лактоза, глюкоза, сахароза, манит, дульцин, аденит, инозит), среда Кларка, цитратно-аммонийная среда, МПЖ среда с мочевиной, простой или Хоттингеровский бульон, глюкозный агар с сернокислым железом.

Патогенные свойства кишечной палочки определяют путем постановки биологической пробы на лабораторных животных.

С этой целью заражают трех белых мышей весом 14-17 г. внутри брюшинно смесью из смыва суточных агаровых культур, выделенных из двух внутренних органов, в дозе 500 млн. микробных тел (концентрация микробов устанавливается по бактерийному стандарту). Культуру бактерий признают патогенной для белых мышей в случае гибели одной и более мышей в первые 5 суток.

Патогенные свойства эшерихий, выделенных от птицы, могут быть определены также биопробой на цыплятах 4-5-недельного возраста. С этой целью смывом суточной агарой культуры в дозе 1 млрд. микробных тел заражают 3-х цыплят внутрибрюшинно. Культуру считают патогенной при гибели в первые 5 дней после заражения одного и более цыплят.

Одновременно с изучением морфологических, культурально-биохимических и патогенных свойств бактерий, проводят серологическую типизацию культур кишечной палочки, выделенных из патологического материала, с целью установления энзоотических серотипов, что имеет большое значение для установления диагноза, эпизоотологических данных и использования специфических средств борьбы с колибактериозом.

Кишечная палочка содержит 3 типа антигенов: О, К и Н.

О-антиген - соматический термостабильный, локализируется в основном в цитоплазме и цитоплазматической мембране. По О-антигену в настоящее время известна 151 серологическая группа эшерихий.

К-антиген включает группу поверхностных (оболочечных или капсульных антигенов, состоящую из 3-х видов, которые обозначаются как, В и А. и В-антигены термостабильные, находятся в оболочке бактерий: А-антиген более устойчив к прогреванию имеется у капсулообразующих разновидностей эшерихий.

В данной микробной клетке содержится только какой-нибудь один из трех поверхностных антигенов.

Н-антиген - жгутиковый, термостабильный, содержится у подвижных разновидностей эшерихий. Поверхностные К, В и А антигены препятствуют О-агглютинации. Поэтому их необходимо инактивировать кипячением в течении 2-х часов (для разрушения А-антигена). С этой целью каждую предназначенную для типирования культуру смывают с агара 4-5 мл стерильным физиологическим раствором хлористого натрия. Бактериальную суспензию переливают в сухие чистые пробирки, маркируют с помощью пергаментных этикеток (написанных простым карандашом), укрепляют этикетки ватными пробками и кипятят в водяной бане (вода должна полностью закрывать уровень культуры в пробирках). Нарушение режима кипячения может привести к неполному разрушению и В-антигена и, следовательно, к О-инагглютинабильности культуры. Если после кипячения взвеси бактерий образуются хлопья, то полученную взвесь-антиген для реакции не используют (R-форма).

Охлажденную после кипячения суспензию культур центрифугируют в течении 15 минут при 3-4 тыс. об./мин., надосадочную жидкость сливают, а осадок исследуют в капельной реакции агглютинации на стекле с комплексными О-сыворотками, разведенными стерильным физиологическим раствором хлористого натрия 1:5.

При отсутствии готовых комплексных коли-сывороток их можно приготовить в лаборатории путем смешивания отдельных типоспецифических О-сывороток. Для этого в стерильную пробирку наливают по 1 мл 5-6 разных О-сывороток, добавляют стерильный физиологический раствор хлористого натрия до объема 10 мл и тщательно перемешивают. Получается комплексная сыворотка в разведении 1:2. В этом разведении приготовленная агглютинирующая колисыворотка может долгое время сохранять свою активность при хранении в холодильнике при +40 С.

Энзоотические вспышки калибактериоза птиц наиболее часто вызывают энтеропатогенные серотипы эшерихий 02, 078, 018, 01, 08, 0115, 011, 026, 055, 0111, 0119. Возможны заболевания птиц, вызванных серотипами других О-групп.

Определение серологической группы эшерихий проводят при помощи набора типоспецифических агглютинирующих сывороток, выпускаемых биофабрикой.

На чистое обезжиренное предметное стекло наносят по капле поливалентной сыворотки, рядом приливают испытуемый антиген и хорошо перемешивают стеклянной палочкой или петлей. Реакцию учитывают в течении 2-3 минут при покачивании стекла.

Антигены, давшие четко выраженную агглютинацию на стекле с комплексной коли-сывороткой, исследуется в капельной РА с отдельными разведенными 1:10 типоспецифическими сыворотками, входящими в состав комплексной сыворотки.

Если антиген из исследуемой культуры реагирует в капельной РА с одной или двумя-тремя сыворотками, то реакцию ставят в пробирочной РА, так как реакция на стекле имеет лишь ориентировочное значение.

Если испытуемый антиген агглютинируется всеми поливалентными сыворотками, его испытывают с физ. раствором для исключения самоагглютинации. Самоагглютинирующие культуры серотипизации не подлежат.

Типоспецифические коли-сыворотки, давшие положительный результат РА на стекле с антигеном из испытуемой культуры, разводят физ. раствором методом последовательных разведений, начиная с 1:100 до предельного титра сыворотки, указанного на этикетке, затем во все пробирки добавляют по 2 капли антигена (концентрация - 5-6 млрд. бактериальных тел/мл по бактерийному стандарту), приготовленному из убитой нагреванием агаровой культуры изучаемых бактерий.

Одновременно ставят контроли на антиген: взвесь убитой культуры в физ. растворе и сывортки в ее наименьшем рабочем разведении (1:100) без антигена.

Штатив с пробирками встряхивают и ставят в термостат при температуре 370-380С (на 12-16 часов), затем выдерживают 18-24 час. при комнатной температуре. Учет реакции проводят с помощью лупы или агглютиноскопа. Принадлежность к О-группе определяют по наивысшему разведению типоспецифической агглютинирующей сыворотки, вызывающей агглютинацию антигена изучаемой культуры, которое должно быть не ниже половины предельного титра типоспецифической сыворотки. Сыворотка и антиген в контроле не должны образовывать хлопьев.

В случае отсутствия агглютинации в реакции с комплексными сыворотками, предназначенную для титрования агаровую культуру обрабатывают и подвергают автоклавированию в течении 2 часов при одной атмосфере (1200С) для разрушения А-антигена. Дальнейшее исследование этого антигена проводят по обычной методике, используя сыворотки против серотипов, в состав которых могут входить капсульные А-антигены (групп 08, 09 и 0101). Положительная реакция агглютинации указывает на принадлежность исследуемой культуры к той или иной серогруппе. Антигены из культур, не агглютинирующиеся имеющимся набором О-сывороток против энтеропатогенных серотипов кишечной палочки, относятся к непатогенным в этом случае, если исследуемые культуры не вызывают гибели белых мышей.

Положительный бактериологический диагноз при исследовании патологического материала ставится: а) при выделении энтеропатогенной культуры эшерихий из всех или большинства внутренних органов; б) не менее чем из двух органов: головного, костного мозга, селезенки, печени, желчного пузыря и установления патогенности для белых мышей или цыплят.

Результаты бактериологического исследования патологического материала формулируют из присланного патологического материала (указать какого) выделены возбудители колибактериоза. В случае установления серологической принадлежности указать серогруппу.

В случае отрицательного результата бактериологического исследования: "возбудителя колибактериоза из патологического материала не выделено".

При необходимости проводят повторные исследования патологического материала из доставленного из того же хозяйства (птицефермы). Общий срок бактериологического исследования - до 7 суток.

Иногда из патологического материала, наряду с патогенными штаммами эшерихий, выделяются также микробы Proteus, Staphilococcus, Streptococcus, реже Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa, которые осложняют течение болезни.

Для эффективного лечения колибактериоза необходимо определять чувствительность выделенных энтеропатогенных кишечных палочек к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам, руководствуясь соответствующими указаниями.

Результат исследования чувствительности к лекарственным препаратам сообщают вместе с результатами бактериологических исследований.

Похожие статьи




Патологоанатомические изменения, Диагноз - Ассоциативные болезни птиц

Предыдущая | Следующая