Секвенирование единичных молекул в реальном времени - Секвенирование ДНК

В 2009 г. был представлен метод секвенирования "Single Molecule RealTime" (SMRT), разрабо - танный компанией "Pacific Biosciences". Секвенатор этой компании позволяет "читать" каждый фрагмент ДНК десятки раз, при этом консенсусная точность определения его нуклеотидной последовательности достигает 99,9 %. Технология данного метода основана на секвенировании в реальном времени однонитевых фрагментов ДНК длиной до 10000 п. н. и более с помощью ДНК-полимеразы. На дно специальных ячеек, расположенных на прозрачном стекле, прикрепляются одиночные молекулы ДНК - полимеразы. Область вокруг закрепленного фермента просвечивается с помощью специального лазера. В каждую ячейку добавляют нуклеотиды всех четы - рех типов, помеченные разными светящимися маркерами. Область, которую анализирует лазер, столь мала, что меченые нуклеотиды не задерживаются в ней достаточно долго, чтобы их свечение было зафиксировано прибором. Если же ДНК-фрагмент удерживается полимеразой, то во время достройки его комплементарной цепи сигнал от каждого при - соединившегося нуклеотида фиксируется в сканируемой области. После присоединения очередного нуклеотида его светящаяся метка удаляется. Прибор "PacBio RS", основанный на этой технологии, имеет высокую собственную стоимость, но в то же время экспрессную пробоподготовку, высокую скорость и низкую стоимость секвенирования ДНК.

Похожие статьи




Секвенирование единичных молекул в реальном времени - Секвенирование ДНК

Предыдущая | Следующая