Принцип секвенирования ДНК по Максаму-Гилберту - Секвенирование ДНК
В основе метода секвенирования ДНК путем химической деградации лежит ограниченное расщепление меченого фрагмента ДНК под действием специфических реагентов. Непременным условием проведения секвенирования этим методом является наличие фрагмента ДНК, меченного только по одному концу. Разделение продуктов деградации по размеру с помощью высоковольтного электрофореза в полиакриламидном геле высокого разрешения, способного разделять фрагменты ДНК, различающиеся между собой по длине всего на один нуклеотид в достаточно широком диапазоне, и последующая радиоавтография геля позволяет определить нуклеотидную последовательность секвенированного участка ДНК.
Первым этапом при проведении реакции химической деградации является ограниченная модификация определенных нуклеотидов под действием различных химических агентов. Концентрация агента и продолжительность его воздействия на молекулы ДНК подбирается с таким расчетом, чтобы в каждой молекуле произошла модификация только одного нуклеотида, а поскольку в реакционной смеси присутствует огромное количество таких молекул, то, согласно теории вероятности, все основания данного типа в секвенируемом фрагменте ДНК окажутся модифицированными. Следующие этапы удаления модифицированных оснований и в-элиминации обоих фосфатов, окружающих дезоксирибозу, и разрыва цепи должны проходить уже количественно. Для каждого типа нуклеотидов или их комбинации проводят отдельные реакции ограниченной модификации и количественного расщепления. Таким образом, в результате четырех (или иногда трех, пяти или даже шести) типов реакций образуется смесь олигонуклеотидных молекул, различающихся по размеру на один нуклеотид и несущих на одном из концов метку, обычно радиоактивную. Следует отметить, что кроме меченых молекул в реакционной смеси будут представлены, и олигонуклеотидные фрагменты, не несущие метки, но на этапе радиоавтографии они окажутся невидимыми и поэтому для данного метода они как бы не существуют. После разделения продуктов реакции в соседних дорожках секвенирующего денатурирующего полиакриламидного геля и этапа радиоавтографии на рентгеновской пленке будет видна лестница из полос ДНК на соседних дорожках, "чтение" которой позволяет восстановить последовательность нуклеотидов секвенируемого фрагмента ДНК. На рис. в виде упрощенной схемы показан весь процесс определения последовательности нуклеотидов ДНК данным методом, из которого у читателя уже должно сложиться общее представление о секвенировании ДНК методом химической деградации.
Рис. 1. Схема секвенирования ДНК химической деградацией.
Похожие статьи
-
Метод Максама-Гилберта - Секвенирование ДНК
За 20 с лишним лет, прошедших с момента разработки метода определения нуклеотидной последовательности ДНК с помощью ограниченной химической модификации...
-
"Классический" метод Сэнгера (ферментативный) - Секвенирование ДНК
В настоящее время "метод терминации цепи", или "дидезокси метод", разработанный в 70-х гг. прошлого века Фредериком Сэнгером, является самым...
-
СОРТИРОВКА ХРОМОСОМ., СЕКВЕНИРОВАНИЕ ДНК. - Генная инженерия
Следующий метод - это метод сортировки хромосом при опмощи цитофлюрометрии. Этот метод может быть использован в двух разных целях: 1) Для идентификации и...
-
Весь процесс от отбора биологического материала до установления последовательности ДНК, включая стадию подготовки пробы, я разделил на четыре основных...
-
Методы расшифровки нуклеотидной последовательности нуклеиновых кислот в отечественной литературе принято называть методами секвенирования. молекулярный...
-
Биосинтез белка - Этические принципы научных исследований
Проходит в рибосоме, к которой подходит и-РНК, прикрепляется в функциональной зоне рибосомы. Одновременно в рибосоме помещается 2 триплета и-РНК. В...
-
Бактерии семейства Campylobacteriaceae Отдела Gracilicutes, Род Campylobacter, Вид С. jejuni, С. coli и С. Lari Кампилобактеры -- спиральные бактерии,...
-
Транскрипция и трансляция - Этические принципы научных исследований
ДНК - носитель генетической информации. Впервые понятие ген было сформулировано в 1941 году Д. Бидлом и Э. Татумом. В настоящее время геном называют...
-
Химический элемент - Этические принципы научных исследований
Теоретические представления о химических явлениях рассматривались в курсе философии в свете общих представлений о возникновении и исчезновении веществ....
-
Открытие Д. И. Менделеева - Этические принципы научных исследований
Примерно за 200 последующих лет, к моменту открытия Д. И. Менделеевым его знаменитой Периодической системы элементов, ученые владели знаниями о 63...
-
1. В рамках механистической картины мира сложилась дискретная (корпускулярная) модель реальности. Материя - вещественная субстанция, состоящая из атомов...
-
Принципы косметического ухода, Вещества, которыми мы сами себе вредим - С косметикой к красоте
Самым надежным путем к сохранению здоровья, свежести и красоты является длительное пребывание на свежем воздухе, рациональное питание и использование для...
-
Общие фундаментальные принципы и законы - Космос и биосфера Земли
Чтобы понять законы экологии и представить себе возможные последствия неудачного сосуществования человека с природой, необходимо понять, что такое жизнь,...
-
Для всех домашних животных характерны общие принципы построения тела, а именно: 1. Биполярность (одноосность)- это наличие двух полюсов тела: головного...
-
Таксономия: Семейства Brucellaceae класса Альфа-протобактерий Возбудители бруцеллеза B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. canis, B. ovis относятся к...
-
Сем. Campylobacteriaceae Род Helicobacter Виды: 1. H. pylori 2. H. fennelliae;H. cinae; - вызывает проктиты и проктоколиты у гомосексуалистов. 3. H....
-
К основным объектам изучения анатомии домашних животных относятся домашние млекопитающие: 1) лошадь домашняя (equus caballus); 2) крупный рогатый скот...
-
1) Идеалистический этап был характерен для эпохи Древнего Мира и связан с именами древнегреческих философов Платона (427-347 до н. э.) и Аристотеля...
-
Функциональная единица наследственности, его свойства - Этические принципы научных исследований
Ген - это элементарный материальный наследственный фактор, определяющий строение белковой полипептидной цепи. Это участок ДНК, кодирующий развитие...
-
Нуклеиновые кислоты - Этические принципы научных исследований
К ним относятся ДНК - и РНК. В 1953 г. Д. Уотсон и Ф. Крик открыли структуру ДНК состоящую из двух цепей, спирально закрученных относительно друг друга....
-
Заключение - Этические принципы научных исследований
Содержание нашей работы показывает, что естествознание представляет собой весьма разветвленную область научного знания, затрагивающего широкий спектр...
-
1) Провести анализ ассоциаций генотипов и аллелей исследованных полиморфизмов с гестозом в популяциях русских и якутов. 2) Оценить ассоциации...
-
1. Курс озонотерапии парентеральным способом в условиях влажных субтропиков в комплексе с традиционным санаторно-курортным лечением состоит из 3-6...
-
Актуальность темы. Санаторно-курортное лечение на этапе функциональных расстройств организма полностью отвечает профилактическому направлению...
-
Принципы биологической эволюции - Виды эволюции человека
Интенсивное проникновение эволюционной пирамиды в биологии начато в конце XVIII веке и благодаря этим работам известного французского биолога Ламарка....
-
Метод Сэнгера - Перспективная наука геномика
Второй метод, наиболее известный и популярный, разработанн Сэнгером и носящий его имя, основан не на химическом, а на ферментативном подходе. Cэнгер...
-
Представление о саморегуляции физиологических функций нашло наиболее полное отражение в теории функциональных систем, разработанной академиком П. К....
-
Гемодинамический мониторинг АД -- Артериальное давление мониторируют неинвазивным (метод Короткова и др.) и прямым (инвазивным) способом. Измерение АД...
-
Принципы лечения ЖДА. - Железодефицитная анемия. Диагностика и лечение
1. Возместить дефицит железа невозможно без железосодержащих препаратов. 2. Терапия должна проводиться преимущественно препаратами железа для...
-
Корь -- острая инфекционная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистых оболочек верхних дыхательных путей и глаз, а также...
-
Материал для исследования следует брать по возможности до начала химиотерапии и лучше во время вскрытия или дренирования гнойного очага. Особенно...
-
Таксономия: Порядок Chlamydiales, семейство Chlamydaceae, род Chlamydia. Род представлен видами С. trachomatis, C. psittaci, C.pneumoniae. Болезни,...
-
Туберкулез --хроническое заболевание человека, сопровождающееся поражением органов дыхания, лимфатических узлов, кишечника, костей и суставов, глаз,...
-
ПРИНЦИПЫ ЛЕЧЕНИЯ - Цирроз печени
Обязательным компонентом современной терапии больных с хроническими диффузными заболеваниями печени является лечебное питание. Лечебный стол №5 включает...
-
Биоэтика - Этические принципы научных исследований
Эстетический биосинтез наследственность Биоэтика - система новых этических стандартов в сфере экспериментальной и теоретической деятельности, биологии и...
-
В соответствии с задачами, которые ставятся перед анатомией, она подразделяется на следующие виды (направления анатомии): 1) Системная анатомия изучает...
-
Последствия и принципы терапии ИД - Характеристика иммунной системы
Патофизиологические последствия при первичных и вторичных ИД в 80-90% случаев проявляются в виде инфекционного синдрома. Гуморальный ИД проявляется...
-
Синдром уплотнения легочной ткани обусловлен множеством заболеваний. Поэтому главной задачей при его определении является качественная и своевременная...
-
Этические принципы научных исследований - Этические принципы научных исследований
Научная этика - это совокупность установленных и признанных научным сообществом норм поведения, правил морали научных работников, занятых в сфере...
-
Введение - Этические принципы научных исследований
Естествознание - раздел науки, основанный на воспроизводимой эмпирической проверке гипотез и создании теорий или обобщений, описывающих природные...
Принцип секвенирования ДНК по Максаму-Гилберту - Секвенирование ДНК