Специальные методы определения активности пепсина и папаина., Модификационный метод. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
Пепсин и папаин относятся к одной из наиболее многочисленных групп ферментов - протеолитические ферменты (протеазы). Они принадлежат к классу гидролаз, к подклассу пептидгидролаз и катализируют расщепление белков и полипептидов в соответствии с уравнением:
R1CONHR2 + H2O + R1COOH + H2NR2 , R1 и R2 - остатки аминокислот, ди - или полипептиды.
Т. е. протеазы катализируют расщепление пептидной связи ѕCOѕNHѕ
Методы определения активности протеолитических ферментов.
Модификационный метод.
Модификационный метод с применением субстрата казеина основан на определении скорости ферментативной реакции гидролиза субстрата под действием исследуемых протеолитических ферментов, содержащихся в материале, взятом на анализ. Скорость реакции определяют по количеству образовавшихся аминокислот - тирозина (-амино--оксифенилпропионовая кислота) и триптофана (-амино--индолилпропионовая кислота), которые устанавливают колориметрической реакцией с реактивом Фолина. Этим методом определяют указанные аминокислоты как в свободном, так и в связанном состоянии.
По количеству тирозина и триптофана, содержащемуся в гидролизате, определяют количество превращенного белка в процессе ферментативной реакции (из расчета содержания в белке 6% тирозина и 1.8% триптофана). В основу расчета активности протеолитических ферментов положена зависимость степени гидролиза белка от числа единиц активности фермента, введенных в ферментативную реакцию. На основе этой зависимости составляется график.
Поскольку в данном методе количество аминокислот, характеризующих количество превращаемого белка, определяется по интенсивности окраски реакционных сред - оптической плотности после реакции с реактивом, то в графике для простоты расчета вместо количества превращенного белка ставится пропорциональная ему оптическая плотность раствора. При составлении графика по оси абсцисс откладывают число единиц фермента, введенное в ферментативную реакцию, а по оси ординат - оптическую плотность, полученную после колориметрической реакции с реактивом Фолина.
- А) Содержание белка, мг б) Единицы активности А) Зависимость оптической плотности от количества превращенного в процессе ферментативной реакции белка. Б) Зависимость оптической плотности от числа единиц активности протеолитических ферментов.
Относя количество введенных в реакцию единиц активности фермента к действию 1 г препарата, определяют его активность. Для расчета прямой, изображенной на графике, составляет расчетное уравнение.
За единицу протеолитической активности принято такое количество фермента, которое катализирует за 30 минут гидролиз 1 г белка в принятых условиях до продуктов, не осаждающихся трихлоруксусной кислотой. 1г составляет 25% от взятого на ферментативную реакцию белка.
Протеолитическая активность характеризуется числом единиц активности фермента, содержащегося в 1 г препарата и твердых полупродуктов или в 100 мл жидких материалов. Метод предназначен для анализа очищенных ферментных препаратов грибного происхождения и всех полупродуктов, получающихся при их производстве.
Похожие статьи
-
Спектрофотометрические методы. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
Спектрофотометрические методы основаны на поглощении света в определенных участках спектра многими соединениями, являющимися активными группами...
-
Для целей определения ферментов могут быть использованы не только измерение поглощения света, но также измерения флюоресценции - спектрофлюорометрические...
-
Активность ферментов - способность в разной степени ускорять скорость реакции. Активность выражают в: 1)Международных единицах активности - (МЕ)...
-
Манометрические методы., Другие методы. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
Эти методы используются при определении активности фермента в тех случаях, когда в исследуемых реакциях один из компонентов находится в газообразном...
-
Введение. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
Ферменты, (от лат. fermentum - брожение, закваска) или энзимы, представляют собой высокоспециализированный класс веществ белковой природы, используемый...
-
Физиологическая роль белка, Структурная функция белка - Строение, функции и значение белков
Структурная функция белка Белки сложные органические соединения, построенные из аминокислот. В состав белковых молекул входят азот, углерод, водород и...
-
Методы и способы определения серы и ее соединений - Сера в природе и организме человека
1. Гравиметрический метод. Метод основан на реакции взаимодействия сульфат-ионов с катионами бария, сопровождающееся образованием малорастворимого...
-
Ферментативные методы, Микробиологические методы - Методы количественного определения витамина B6
Определение коферментных форм витамина В6 ферментативными методами основано на реакции взаимодействия фосфорилированных форм витамина -...
-
Аллостерическая регуляция. Фермент изменяет активность с помощью нековалентно связанного с ним эффектора. Связывание происходит в участке,...
-
Общий анализ крови (28.02.2015): Лейкоциты 12,0*109 Л-1 Эозинофилы 4 % Палочкоядерные нейтрофилы 8 % Сегментоядерные нейтрофилы 68 % Моноциты 3 %...
-
Витамины представляют собой группу веществ, которые необходимы для нормальной функции клеток, их роста и развития. Существует 13 основных витаминов,...
-
Транспорт питательных веществ в бактериальную клетку - Физиология микроорганизмов
Пассивный - облегченная диффузия, в следствии разности концентрации питательных веществ, без затрата энергии. Отвечает за транспорт цитоплазматическая...
-
Нарушение аминокислотного обмена - Строение, функции и значение белков
Наиболее часто встречающимися болезнями, связанными с нарушением аминокислотного обмена, являются фенилкетонурия и альбинизм. В норме аминокислота...
-
Азотистое равновесие - Строение, функции и значение белков
Азотистое равновесие - это соотношение между количеством азота, содержащегося в принятой пище, и количеством азота, выведенного из организма. Если обе...
-
Обмен белков в организме человека - Строение, функции и значение белков
Важный критерий пищевой ценности белков - доступность аминокислот. Аминокислоты большинства животных белков полностью высвобождаются в процессе...
-
В медицинской микробиологии все шире используются методы генной инженерии, с помощью которых "заставляют" микроорганизмы продуцировать нужные медицинской...
-
Спонтанную биоэлектрическую активность нейронов регистрировали с использованием мультиэлектродной системы MED64 и MEA60 при стандартных условиях...
-
Свойства ферментов - Питательные вещества
Важнейшим свойством ферментов является преимущественное одной из нескольких теоретически возможных реакций. В зависимости от условий ферменты способны...
-
Введение - Строение, функции и значение белков
Важнейшим компонентом питания являются белки. Белки представляют основу структурных элементов клетки и тканей. С белками связаны основные проявления...
-
Методы сбора и учетов численности беспозвоночных в кронах - Изучение лесных беспозвоночных
Среда обитания беспозвоночных, условно называемая нами "кроны", включает в себя ветви кустарников и деревьев, независимо от их размеров и высоты...
-
Полиморфные белки - Методы исследования популяции человека
Изучая генетическую структуру населения определенного региона проводятся исследования генетико-биохимического полиморфизма систем транспортных белков...
-
Роль витаминов в построении ферментов
Витамины - это низкомолекулярные органические вещества самого разнообразного строения, которые не синтезируются в организме, но являются жизненно...
-
Методы определения площади ожога - Сущность ожога
1). Правило ладони (метод И. И. Глумова) применяется для оценки небольших ожогов: площадь ладони человека = 1% площади его тела. 2). Правило "девяток"...
-
Ферменты используют различные вещества для создания нашего организма. Но они могут не только созидать, но и разрушать уже построенное. Ферменты --...
-
Получение бионаночастиц серебра методом химического восстановления в растворах Наночастицы серебра в водных растворах получают путем восстановления ионов...
-
Введение - Биологическая активность бионаночастиц серебра, полученных методом "Зеленого" синтеза
В последнее время интерес в развитии новых стратегий для формирования бионаночастиц серебра проистекает от их потенциального применения в различных...
-
Эффект, оказываемый N-ADA на восстановление рефлекторной деятельности в постгипоксическом периоде оценивалась по уровню поведенческой активности животных...
-
1. Полученные методом "зеленого" синтеза бионаночастиц серебра проявляли высокую биологическую активность, что показано с помощью тест-системы...
-
В последние годы интерес к бионаночастицам и материалам на их основе растет лавинообразно в основном из-за их необычных физических характеристик,...
-
Доброкачественность лекарственного растительного сырья - это соответствие лекарственного сырья, продуктов, лекарственных средств техническим требованиям...
-
Благодаря постоянному и беспорядочному броуновскому движению молекул воды [4] две идентичные по всем параметрам биомолекулы (БМ) способны не только...
-
Характеристика основных разделов элементарной биохимии - Элементарная биохимия
Белки В настоящее время установлено, что в живой природе не существует небелковых организмов. Белки - это высокомолекулярные полимерные соединения,...
-
Свойство белков - Основы генетики
Белки - высокомолекулярные соединения, построенные из аминокислот и являются одними из наиболее сложных по строению и составу среди всех органических...
-
Понятие о генах, аллелях. Аллелизм. Множественный аллелизм Ген - функциональная единица наследственного материала. Ген (от греч. genos -- род,...
-
Утрата инфекционности, Серологические методы - Строгие постулаты Коха
Как правило, чувствительность вирионов данного вируса к действию тех или иных инактивирующих веществ определяется специфическими свойствами его белков,...
-
Методы и организация исследования Анализ литературных источников проводился на всех этапах исследования. Анализ специальной научно-методической...
-
Клетка как таковая выполняет множество разнообразных функций. Часть из них -- общеклеточные, часть -- специальные, характерные для особых клеточных...
-
Данные лабораторных и инструментальных методов исследования - Бронхиальная астма
§ Клинический анализ крови Показатели Результаты Норма Ед. изм. Гемоглобин 138 120-160 Г/л Эритроциты 4,62*1012 4,2-5,4*1012 /л Цветовой показатель 0,9...
-
Не существует таких явлений природы, технических или социальных процессов, которые были бы предметом изучения математики, но при этом не относились бы к...
-
1. Самыми распространенными ферментативными препаратами являются комплексы ферментов желудочно-кишечного тракта (Фестал, Панзинорм форте, Мезим форте,...
Специальные методы определения активности пепсина и папаина., Модификационный метод. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов