Определение активности протеиназ по белковому субстрату. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
К 0.5 мл субстрата в соответствующем буферном растворе добавляют 0.5 мл пробы, содержащей фермент (экстракт, биологическую жидкость), инкубируют установленное опытным путем время, после чего белки в пробе осаждают 5 мл 10% трихлоруксусной кислотой. Отделяют осадок центрифугированием, а надосадочную жидкость (ТХУ-центрифугат) подвергают дальнейшей обработке. Контрольные пробы - пробы, где реактив добавлен в обратном порядке: к 3 мл 10% раствора ТХУ добавляют 0.5 мл раствора, содержащего фермент и 0.5 мл субстрата. Рекомендуется ставить пробу на автолиз субстрата: к 0.5 мл субстрата добавляют 0.5 мл прокипяченного раствора, содержащего фермент, инкубируют вместе с опытными пробами и осажденной ТХУ.
Определение содержания аргинина в ТХУ-центрифугантах по модифицированной реакции Сакагучи. К 0.5 мл ТХУ-центрифуганта добавляют 0.5 мл 2.5мМ раствора CuSO4 , 0.5 мл 5 Н. КОН, 0.5 мл раствора ДХН (2,4-дихлор-1-нафтол). Раствор встряхивают и вносят 0.5 мл гипобромита натрия, мгновенно возникает ярко-розовая окраска. Раствор встряхивают и через 20-30 секунд стабилизируют пробы добавлением 0.2 мл раствора 2-тиогликоля (чтобы предотвратить разрушение окрашенного продукта избытком гипобромита натрия. После добавления 2-тиодигликоля в пробы как опытные, так и контрольные, появляется желтоватое окрашивание за счет побочного продукта реакции между избыточной ТХУ и гипобромита натрия. Побочный продукт также стабилизируется 2-тиодигликолем. Оптическая плотность пробы измеряется спектрофотометром при 520 нм в кювете толщиной 1 см.
Похожие статьи
-
Метод основан на том, что содержащие - аминогруппу аминокислоты дают с нингидридом окрашенную производную - дикетогидриндилидендикетогидриндамин, а также...
-
Спектрофотометрические методы. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
Спектрофотометрические методы основаны на поглощении света в определенных участках спектра многими соединениями, являющимися активными группами...
-
Предлагаемый микрометод определения активности протеолитических ферментов основан на измерении содержания аргинина в пептидах, освобождающихся при...
-
Данный метод основан на следующих принципах. Гемоглобин подвергают воздействию пепсина, оставшийся гемоглобин осаждают трихлоруксусной кислотой....
-
Для целей определения ферментов могут быть использованы не только измерение поглощения света, но также измерения флюоресценции - спектрофлюорометрические...
-
Манометрические методы., Другие методы. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
Эти методы используются при определении активности фермента в тех случаях, когда в исследуемых реакциях один из компонентов находится в газообразном...
-
Активность ферментов - способность в разной степени ускорять скорость реакции. Активность выражают в: 1)Международных единицах активности - (МЕ)...
-
Пепсин и папаин относятся к одной из наиболее многочисленных групп ферментов - протеолитические ферменты (протеазы). Они принадлежат к классу гидролаз, к...
-
Введение. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов
Ферменты, (от лат. fermentum - брожение, закваска) или энзимы, представляют собой высокоспециализированный класс веществ белковой природы, используемый...
-
Эффект, оказываемый N-ADA на восстановление рефлекторной деятельности в постгипоксическом периоде оценивалась по уровню поведенческой активности животных...
-
Аллостерическая регуляция. Фермент изменяет активность с помощью нековалентно связанного с ним эффектора. Связывание происходит в участке,...
-
В зависимости от химической природы ферменты делятся на простые и сложные [11]: Простые ферменты состоят только из аминокислот - например, пепсин,...
-
Ферменты используют различные вещества для создания нашего организма. Но они могут не только созидать, но и разрушать уже построенное. Ферменты --...
-
Механизмы терморегуляции - Влияние температуры на жизненные процессы
Физиологические механизмы, обеспечивающие тепловой гомеостаз организма (его "ядра"), подразделяются на две функциональные группы: механизмы химической и...
-
На 21-й день in vitro в клетках гиппокампа наблюдалась синхронизованная спонтанная кальциевая активность. Частота возникновения кальциевых осцилляций в...
-
Пассивная устойчивость - Влияние температуры на жизненные процессы
Рассмотренные закономерности охватывают диапазон изменений температуры, в пределах которого сохраняется активная жизнедеятельность. За границами этого...
-
Методы и способы определения серы и ее соединений - Сера в природе и организме человека
1. Гравиметрический метод. Метод основан на реакции взаимодействия сульфат-ионов с катионами бария, сопровождающееся образованием малорастворимого...
-
Определение КМАФАнМ - Санитарно-микробиологический анализ мороженой рыбы
Исследуемую рыбу отбирают в количестве не более 3 штук. От каждого экземпляра из нескольких мест вырезают кусочка с кожей и мышцами, не затрагивая...
-
Способи вираження активності ферментів - Будова і властивості ферментів
У біологічних об'єктах ферменти знаходяться в дуже мізерних концентраціях, тому для оцінки ферментативних процесів визначають не вміст ферментів, що...
-
Получение бионаночастиц серебра методом химического восстановления в растворах Наночастицы серебра в водных растворах получают путем восстановления ионов...
-
Ферменты - Биология раневого процесса
Организм ведет постоянно борьбу с угрожающей ему интоксикацией ядовитыми продуктами распадающегося тканевого вещества посредством самых разнообразных...
-
Краткая фармакологическая характеристика - Ферменты в гастроэнтерологии
Ацидин-пепсин - препарат, содержащий протеолитический фермент. Получают из слизистой оболочки желудка свиней. Таблетки по 0,5 и 0,25 г содержат 1 часть...
-
Для изучения влияния Цп на процессы генерации АФК фагоцитами в условиях in vitro использовали цельную кровь здоровых людей - доноров крови, так как...
-
Брожение - процесс анаэробного расщепления органических веществ, преимущественно углеводов, происходящий под влиянием микроорганизмов или выделенных из...
-
По первой в истории изучения ферментов классификации их делили на две группы: Гидролазы , ускоряющие гидролитические реакции, и Десмолазы , ускоряющие...
-
Жизнь организма в целом, как и каждое проявление жизнедеятельности, необходимо связаны с расходованием энергии. Клеточное деление, рост, развитие и...
-
Человеческий организм - это большие часы. Каждый процесс в которых должен регултроваться и не выходить из под контроля. Незаменимой шестеренкой в этих...
-
Подвижность воздуха возникает вследствие разницы температур на различных участках поверхности Земли. В гигиенической практике движение воздуха...
-
Время лета и его продолжительность весьма разнообразны и ограничены теплым временем года в умеренных широтах. Наиболее ранними формами на юге средней...
-
Процесс митоза обеспечивает строго равномерное распределение хромосом между двумя дочерними ядрами, так что в многоклеточном организме все клетки имеют...
-
Жизненный цикл клетки отражает все закономерные структурно-функциональные изменения, происходящие с клеткой во времени. Жизненный цикл - это время...
-
Двигательная активность - Сущность и значение здоровья
Оптимальный двигательный режим - важнейшее условие для укрепления здоровья. Его основу составляют систематические занятия физическими упражнениями и...
-
Под влажностью сырья понимают потерю в массе за счет гигроскопической влаги и летучих веществ, которую определяют в сырье при высушивании до постоянной...
-
Витамины представляют собой группу веществ, которые необходимы для нормальной функции клеток, их роста и развития. Существует 13 основных витаминов,...
-
Влияние температуры на организм - Влияние температуры на организм
Температура -- важнейший из ограничивающих (лимитирующих) факторов. Пределами толерантности для любого вида являются максимальная и минимальная летальные...
-
Основные представления об адаптациях организмов - Влияние температуры на организм
Адаптация (лат. "приспособление") -- приспособление организмов к среде. Этот процесс охватывает строение и функции организмов (особей, видов, популяций)...
-
Понятие о среде обитания и экологических факторах - Влияние температуры на организм
Среда обитания организма -- это совокупность абиотических и биотических условий его жизни. Свойства среды постоянно меняются, и любое существо, чтобы...
-
Влияние среды - Значение и изучение генов
Главный фактор, детерминирующий любой фенотипический признак, - это генотип. Генотип организма определяется в момент оплодотворения, но степень...
-
Температура и развитие - Влияние температуры на жизненные процессы
В наиболее генерализованной форме влияние температуры на обменные процессы прослеживается при изучении онтогенетического развития пойкилотермных...
-
Введение - Влияние температуры на жизненные процессы
Организмы -- реальные носители жизни, дискретные единицы обмена веществ. В процессе обмена организм потребляет из окружающей среды необходимые вещества и...
Определение активности протеиназ по белковому субстрату. - Влияние значений рН и температуры на активность ферментов