СИНАПТОФИЗИН - Влияние холестаза на различные отделы мозга
Для изучения экспрессии синаптофизтина эксперименты проводились самцах крыс Wistar весом 200 ± 25 г. Все экспериментальные процедуры должны соответствовать Директиве Совета Европейского сообщества (86/609 / EEC) по уходу и использованию лабораторных животных. Это исследование было одобрено Комитетом по биомедицинской этике Гродненского государственного медицинского университета. Экспериментальных крыс анестезируют этиловым эфиром, а общий желчный проток лигируют на 3-5 мм ниже слияния лобарных протоков, применяя две лигатуры с последующим пересечением между ними. Животные контрольной группы подвергаются фиктивной операции. На 2-й, 5-й, 10-й, 20-й, 45-й и 90-й день животных из группы контроля и из группы с холестазом декапитировали, образцы их мозжечка собирали и фиксировали в цинк-этанол-формалине при 4 ° С (ночь), а затем залили в парафин.
Блоки парафина (7 мкм) разрезали LeicaRM2125 (микротомом RTS, Германия). Иммуногистохимическое обнаружение Syn проводили с использованием поликлонального первичного антитела кролика, Synaptophysin Antibody (PA5-27286, Thermo Scientific, США), разбавленного 1: 400 при 4 ° C, экспозиции в течение 20 часов во влажной камере. Связывание первичных антител было обнаружено с использованием Thermo Scientific Super Picture ™ Polymer Detection Kit. Глутаматдекарбоксилазу (GAD) детектировали с мышиными моноклональными первичными антителами против GAD 67, ab. 26116 (Abcam, UK), разбавленный 1: 2000 при 4 ° С, воздействие в течение 20 ч во влажной камере. Связывание первичных антител было обнаружено с использованием контейнера Expose Mouse и Rabbit Specific HRP / DAB IHC Kit ab. 80436 (Abcam, UK).
Для стандартизации исследования во всех образцах была исследована латеральная зона задней доли мозжечковых полушарий. Кора головного мозга этой области двусторонне связана с сенсомоторной корой головного мозга, что позволяет планировать и координировать быстрые движения тела, следующие один за другим. Определены уровни экспрессии Syn и GAD в структурах коры головного мозга. Гистохимические препараты были исследованы, сфотографированы и изучены морфометрически с использованием микроскопа Axioscop 2 plus (Zeiss, Германия) с цифровой видеокамерой LeicaDFC 320 (Leica, Германия) и программой анализа изображений ImageWarp (Bitflow, США)[15].
Средние значения, полученные у животных каждой экспериментальной группы, анализировались непараметрической статистикой (из-за небольшого числа животных в группах) в Statistica 10.0 для Windows (StatSoft, США). Описательная статистика для каждого параметра включала определение медианного (Me) и межквартильного диапазона (IQR). Различия между значениями в контрольной и экспериментальной группах считались значимыми при p <0,05 с использованием U-теста Манна-Уитни[16].
У контрольных животных экспрессия синаптофизина была обнаружена в многочисленных пресинаптических мембранах на дендритах клеток Пуркинье в молекулярном слое мозжечка, а также в аксональных синапсах и вокруг тел клеток Пуркинье. Экспрессия Syn была особенно высокой в гранулярных слоях клубочков мозжечка (рисунок 2.1 B, C). Интенсивность экспрессии синаптофизина у контрольных животных существенно не
Рисунок 2.1 - Экспрессия синаптофизина в коре мозжечка крыс[15]:
Рисунок 2.1 A, C-контроль (через 10 дней после фиктивных операций);
Рисунок 2.1 B, D - 10 дней холестаза.
B-в молекулярном слое (показанном стрелками) увеличение экспрессии синаптофизина; С-стрелки показывают гранулированные слоистые клубочки. Цифровая микрофотография. Масштабные бруски - 20 мкм. Увеличение: А, B-x200; C, D-x400.
Таблица 2.1 - Экспрессия синаптофизина в молекулярном слое коры мозжечка крыс (единица оптической плотности Ч 103[15])
День |
Контрольная группа |
Экспериментальная группа |
2 |
187.03 ± 7.5 |
182.27 ± 12.7 |
5 |
182.77 ± 19.0 |
211.47 ± 5.62 *** |
10 |
189.43 ± 15.4 |
261.18 ± 19.9 *** |
20 |
187.54 ± 19.1 |
188.74 ± 17.6 |
45 |
186.77 ± 27.2 |
184.46 ± 5.6 |
90 |
180.0 ± 12.3 |
182.07 ± 14.0 |
На 2-й день после лигирования общего желчного протока в молекулярном слое коры мозжечка экспрессия синаптофизина не различалась, на 5-й день он увеличивался на 16%, а на 10-й день - на 38%, по сравнению с контрольной группой. На последующих временных интервалах исследования он не отличался от контрольной группы (рисунок 2.2 B, C, таблица 2.1)
Экспрессия глутаматдекарбоксилазы (GAD67) в цитоплазме клеток Пуркинье была обнаружена (как в телах, так и дендритах), а также вокруг тел клеток Пуркинье. В молекулярном слое также были видны глутаматдекарбоксилаза-иммуноположительные звездчатые и корзиночные клетки, образующие многочисленные аксональные и аксодендритные синапсы на клетках Пуркинье (рисунок 2.2 A, C). В гранулированном слое были обнаружены глутаматдекарбоксилаза-иммуноположительные нейроны, а также терминалы на периферии мозжечковых клубочков (рисунок 2.2 А, В).
На второй день после лигирования общего желчного протока в цитоплазме клеток Пуркинье экспрессия глутаматдекарбоксилазы уменьшилась на 10% (таблица 2.2). На 5-й день холестаза экспрессия глутаматдекарбоксилазы в цитоплазме остальных клеток Пуркинье увеличилась на 28%. Корзины вокруг перикариона стали более заметными, вытянутыми, удлиненными в направлении гранулированного слоя и проявляли более темное окрашивание из-за увеличения глутаматдекарбоксилазы-иммунореактивности на 11%. На 10-й день холестаза экспрессия глутаматдекарбоксилазы в цитоплазме выживших клеток Пуркинье увеличилась на 41% и в их корзинах на 39%, соответственно, по сравнению с контролем (рисунок 2.2 В, таблица 2.2). Холестаз в течение 20 дней приводил к увеличению экспрессии глутаматдекарбоксилазы в цитоплазме выживших клеток Пуркинье на 61% и увеличению их корзин на 33% по сравнению с контролем (рисунок 2.2 D, таблица 2.2). Однако на 45-й и 90-й день после лигирования общего желчного протока иммуногистохимические различия не определялись по сравнению с контрольными (таблица 2.2)[15].
Рисунок 2.2 - Экспрессия GAD67 в коре мозжечка крыс[15]:
Рисунок 2.2 А, С - контроль (10 дней и 20 дней после фиктивных операций, соответственно);
Рисунок 2.2 B - 10 дней;
Рисунок 2.2 D - 20 дней холестаза.
B, D-стрелки показывают увеличенные корзины с повышенной иммунореактивностью вокруг тел клеток Пуркинье. Цифровая микрофотография. Шкала шкалы -20 мкм Увеличение x400.
Таблица 2.2 - Экспрессия глутаматдекарбоксилазы в коре головного мозга крыс (единица оптической плотности Ч 103[15])
День |
Тела клеток Пуркинье |
Область вокруг клеток Пуркинье | ||
Контроль |
Экспериментальная группа |
Контроль |
Экспериментальная группа | |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
2 |
182.12 ± 2.48 |
163.81 ± 4.85 ** |
197.27 ± 11.0 |
188.02 ± 14.42 |
5 |
160.54 ± 2.85 |
205.11 ± 5.37 *** |
189.73 ± 16.09 |
211.18 ± 8.75 *** |
10 |
166.37 ± 3.92 |
235.04 ± 4.27 *** |
189.72 ± 12.88 |
264.26 ± 18,64 *** |
20 |
155.51 ± 3.86 |
250.26 ± 3.88 *** |
189.27 ± 10.12 |
251.16 ± 17.40 *** |
45 |
166.37 ± 3.79 |
168.13 ± 4.44 |
188.22 ± 8.70 |
190.02 ± 14.29 |
90 |
166.36 ± 3.05 |
165.43 ± 4.13 |
189.73 ± 11.27 |
184.44 ± 16.81 |
Временное увеличение синаптофизина в молекулярном слое мозжечка может отражать усиленный синаптогенез, увеличение количества синаптических пузырьков в синапсах, что является компенсаторной реакцией.
Увеличение экспрессии глутаматдекарбоксилазы вокруг их тел указывает на активацию клеток ГАМК-эргической области, которые могут компенсировать гиперрезистентные клетки Пуркинье, возможно, для поддержки функций мозжечка[8].
Похожие статьи
-
ВВЕДЕНИЕ - Влияние холестаза на различные отделы мозга
Желчь - секрет, выделяемый печеночными клетками, содержащий конъюгированный билирубин, соли желчных кислот, холестерин, фосфолипиды, белки, электролиты,...
-
Изотипы иммуноглобулинов - Влияние холестаза на различные отделы мозга
Изотипы иммуноглобулинов - молекулы иммуноглобулинов, у которых константные (С) домены тяжелых цепей генетически и структурно различаются. Примером...
-
АНТИТЕЛА, СТРОЕНИЕ АНТИТЕЛ - Влияние холестаза на различные отделы мозга
Антитела - омолекулы иммуноглобулинов, синтезируемые и продуцируемые В-лимфоцитами (плазматическими клетками) в процессе развития гуморального иммунного...
-
Субклассы иммуноглобулинов - Влияние холестаза на различные отделы мозга
Субклассы иммуноглобулинов - подразделение иммуноглобулинов классов G и A на субклассы IgG1-IgG4, IgA1 и IgA2, основанное на различиях в них...
-
Б. Т. Кадралиева, Б. Тулебаев отмечают, что воспроизводительная способность КРС тесно связана с молочной продуктивностью, поэтому в значительной степени...
-
Основными компонентами выхлопных газов, оказывающими влияние на рост и развитие растений, являются фенолы. Фенолы используются растениями как...
-
Резюме - Влияние Гувитана-С на состояние иммунного статуса хряков
Для коррекции иммунобиохимических процессов в организме сельскохозяйственных животных и птиц в последние годы нашли применение препараты гуминовой...
-
Сроки наблюдений Группы До начала скармливания гувитана-С Через 7 дней после скармливания гувитана-С БАСК, % Контроль 60,25±0,24 60,24±0,19 Первая...
-
В целях морфологического контроля влияния препарата "Ферсел" на организм индеек проведены гистологические исследования следующих внутренних органов:...
-
Введение - Влияние Гувитана-С на состояние иммунного статуса хряков
При промышленной технологии ведения животноводства организм животных испытывает значительные функциональные нагрузки, которые значительно снижают...
-
Использование в рационах кормовой добавки "Нутовит" и ее влияние на физиологические процессы организма молодняка кур Добавка кормовой нут птица Введение....
-
Культура клеток - это клетки многоклеточного организма, живущие и размножающиеся в искусственных условиях вне организма (in vitro). В 1952 г. Дульбекко и...
-
Экономическую эффективность определяли за период откорма равный промежуток времени 150 дней. Первоначально рассчитали количество кормов за период:...
-
Группы Сроки наблюдений До начала скармливания гувитана-С Через 7 дней после скармливания гувитана-С Фагоцитарная активность нейтрофилов крови, %...
-
Получить достаточно полное представление о развитии индеек только на основании измерений их массы тела невозможно, так как растущий организм при...
-
Таблица 1. Продуктивность поросят-сосунов в зависимости от способа локального обогрева Показатель Группа Контрольная 1-я опытная 2-я опытная...
-
Влияние кормления на здоровье и работоспособность лошадей - Кормление рабочих лошадей
Процесс планирования рациона лошадей, является задачей не из легких, так как нужно знать в каких веществах нуждается лошадь, в каком количестве их можно...
-
Одной из основных причин снижения жизнеспособности молодняка является низкий уровень естественной резистентности их организма, обусловленный прежде всего...
-
Введение - Использование различных способов обогрева в промышленном свиноводстве
Ключевой задачей животноводства является интенсификация, предполагающая рост продуктивности и Г экономической эффективности производства за счет...
-
Объект и предмет исследования В качестве Объекта исследования была выбраны сельскохозяйственные культуры: горох (( Pisum sativum L.), сорта...
-
Сравнение различных схем диспансеризации новотельных коров молочного направления
Введение Бесплодие антибактериальный молоко Для обеспечения положительных экономических результатов в животноводческом предприятии должен быть налажен...
-
Введение Ускорение темпов индивидуального развития сельскохозяйственных животных и птиц, сопровождающееся повышением их скороспелости, является...
-
Засуха характеризуется комплексом неблагоприятных условий, приводящих к глубокому дефициту воды в почве и в растении [ Третьяков С. 243-244]. Угнетающее...
-
Мастит сухостойных коров - Заболеваемость маститом у коров при различных технологиях доения
Из болезней незаразной этиологии актуальную проблему представляет мастит у коров, широко распространенный при запуске, в сухостое и послеродовом периоде....
-
Причиной возникновения дисфункции молочной железы являются колебания вакуума при машинном доении, передержка доильных стаканов после опорожнения вымени,...
-
Влияние право - и левовращающегося излучения лазера на семена редиса и горчицы
Актуальность Известно, что жизнь на Земле асимметрична. Большинство б-аминокислот природного происхождения, входящих в состав белков, имеют...
-
Значение микроструктуры зерна пшеницы при созревании в различных условиях
Рассматриваются некоторые особенности структуры строения зерна пшеницы, изменения в зерне под влиянием условий внешней среды и технологических факторов...
-
Влияние перлита на количественный и качественный показатель силы роста семян
Влияние перлита на количественный и качественный показатель силы роста семян Актуальность. Значение удобрений для сельского хозяйства очень велико. Они...
-
Резюме - Использование различных способов обогрева в промышленном свиноводстве
Наибольшая масса гнезда в трехнедельном возрасте была в группе, выращиваемой с применением нашего обогревателя (64,2 кг). Среднесуточный прирост поросят...
-
В состав защитной антиоксидантной системы организма входят ферменты, в частности, каталаза, неферментативные, низкомолекулярные соединения,...
-
Исследования по ГОСТам 7269-79 и ГОСТ Р 53853-2010 (бактериоскопия, определение содержания амино-аммиачного азота, летучих жирных кислот, продуктов...
-
Влияние препарата "Ферсел" на мясную продуктивность - Применение препарата "Ферсел" в птицеводстве
Анатомо-морфологический анализ тушек проводили путем контрольного убоя молодняка по пять голов из каждой группы в возрасте 152-х дней. Разделку...
-
В последние три десятилетия селекция позволила существенно улучшить продуктивность индеек. Достигнуты высокие показатели интенсивности роста, лучшая...
-
Большая часть инородных тел из желудка попадает в тонкий кишечник, который состоит из трех отделов: двенадцатиперстная кишка, тощая кишка и подвздошная...
-
В основу данных исследований положены результаты кадастровой оценки земель города Тутаева. Результатом оценки является стоимость кадастровых кварталов по...
-
В послеотельный период у животных как опытной, так и контрольной группы не было выявлено тяжелых послеродовых осложнений (послеродовый парез, выпадение...
-
Введение - Характеристика района, влияние абиотических и биотических факторов
Общие потери сельскохозяйственных культур от вредителей, болезней растений и сорняков в экономические развитых странах составляют ежегодно около 25%...
-
Шерсть является основной продукцией, получаемой от овец тонкорунных пород, и обладает уникальными технологическими свойствами, по которым с ней не...
-
Для удержания побегов малины от полегания под тяжестью урожая есть различные способы подвязки. При выращивании малины практикуют веерную подвязку, так...
-
Причины мастита - Заболеваемость маститом у коров при различных технологиях доения
Эффективная борьба с маститом коров возможна только при определении истинных причин его возникновения. Однако этиология этой болезни до настоящего...
СИНАПТОФИЗИН - Влияние холестаза на различные отделы мозга