Подготовка материала для вирусологического исследования - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят

Присланный в лабораторию материал принимают и, по возможности, сразу же начинают исследовать, а, если это невозможно, то материал хранят до исследования в холодильнике при -20?С (в морозилке). Подготовка материала к вирусологическим исследованиям заключается в следующем. После осмотра органов, их отмывают стерильным физраствором от консерванта. инфекционный паралич ветеринарный экспертиза

Если труп поступил целый, его осматривают и затем проводят вскрытие, извлекают в стерильные баночки или чашки Петри. Жидкий материал проверяют на бактериальную загрязненность микроскопией мазков и посев на среды (МПБ, МПА, среду Китта-Тароцци и среду Сабуро) и при необходимости обрабатывают антибиотиками(пенициллин и стрептомицин по 500-2000 ЕД на мл среды в зависимости от степени загрязненности)

Из кусочков органов готовят суспензию. Для этого из присланных органов и тканей берут небольшие кусочки(1,0-1,5г) и помещают в стерильную ступку, где после измельчения ножницами тщательно растирают до кашицеобразной массы со стерильным песком или стеклом. Затем добавляют стерильный физраствор в соотношении 1:10 или 1:5 и получается суспензия. Ее переносят в центрифужные пробирки и туда же вносят вышеуказанные антибиотики в дозе по 500-2000 ЕД на 1 мл суспензии. Суспензию в пробирках 2-3 раза замораживают (при -20-50С) и оттаивают при комнатной температуре или в термостате при 37?С. При этом происходит дополнительное разрушение клеток и освобождение вируса. Затем пробирки с суспензией центрифугируют 15-20 мин при 3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость проверяют на стерильность посевом на среды в аэробные и анаэробные условия и затем используют как вируссодержащий материал для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов или культур тканей и для постановки серологических реакций в качестве антигена. Одновременно из исходного патологического материала готовят мазки или мазки-отпечатки, которые исследует на наличие телец-включений и вируса в клетках после специальной окраски под обычным микроскопом или применяют люминесцентную микроскопию с использованием иммунофлуоресценции (флуоресцирующие антитела).

Подготовка крови:

Для выделения вируса может быть использована либо цельная дефибринированная, либо "лаковая" кровь, либо кровь с антикоагулянтом. В последующем случае берут 5 мл крови в пробирку с 5-6 каплями гепарин и замораживают. После оттаивания гемолизированную кровь центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 15 минут, добавляют пенициллин и стрептомицин из расчета 100-200 ЕД/мл и после проверки на стерильность используют для заражения. Для этих целей пригодна и свернувшаяся кровь. Ее растирают в ступке и добавляют небольшое количество раствора Хенкса(1:1 или 1:2) [ 3,7]

Похожие статьи




Подготовка материала для вирусологического исследования - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят

Предыдущая | Следующая