Лабораторная диагностика - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
Основная схема лабораторной диагностики вирусных болезней включает:
I.Вирусологический метод
- 1. Обнаружение вируса 1)микроскопией мазков (лучше отпечатков) на тельца-включения (ТВ) А)Обычная Б) Люминесцентная -метод флуорохромирования (МФ) -методы флуоресцирующих антител (МФА) В) электронная 2) индикация вирусов - РГА, РГАд 2.Выделение Вируса заражением чувствительных (3-5пассажей) А)лаб. животных Б) куриных эмбрионов (КЭ) В)культур тканей (КТ) 3.Идентификация Вируса (определение вида),типизация (определения типа, варианта) и дифференциация
II.Серологический метод (испытуемые сыворотки на наличие антител-Ат),постановкой реакций с известными биофабричными вирусными антителами: РН, РСК, РИД(РДП), РИЭОФ, МФА, ИФА, РЗГА (РТГА), РНГА, РЗГАд. [7]
Вирусоскопия. Не проводится.
Электронно-микроскопическая диагностика. Метод электронной микроскопии позволяет обнаружить вирус болезни Ауески через сутки после экспериментального заражения в мазках-отпечатках, которые готовят непосредственно на электронно-микроскопических сеточках со слизистой оболочки глаза, носа, ротовой полости и из мочи.[7]
ГОСТ 25753-83 устанавливает методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Рассмотрим метод биологической пробы, сущность которого заключается в воспроизведении болезни у здоровых кроликов путем инокуляции патологического материала. Для проведения биологической пробы используют кроликов массой 2-2,5 кг. Подготовленный материал, надосадочную жидкость вводят двум кроликам внутримышечно в дозе 1-2см2. Биопробу считают положительной, если животные погибают с клиническими признаками болезни Ауески (нервная клиника, зуд, расчесы)через 2-10 сут после инокулирования суспензии патологического материала. Если животные погибают без признаков болезни Ауески, биопробу повторяют, используя патологический материал первого пассажа. Гибель кроликов после введения суспензии патологического материала от свиней без признаков зуда и расчесов может свидетельствовать о выделенных вакцинных штаммов вируса болезни Ауески.
Так же для индикацию вируса в патологическом материале можно проводить с помощью экспресс-методов(ПЦР, РИФ, РНГА, ИФА).
Серологическая идентификация. Для идентификации вируса болезни Ауески используют в основном РН в культуре клеток или на кроликах, метод флюоресцирующих антител, РДП, РНГА, ELISA-метод и др.
РН.Удобный и надежный метод идентификации выделенного вируса. Используют культуру клеток того же вида, на который был изолирован вирус. Реакцию ставят по общепринятой методике, чаще используют вариант: различные разведения сывороткиЙ (10-1-10-7) и постоянную дозу сыворотки. Перед постановкой реакции культуральный вирус размораживают, центрифугируют в течение 30 мин при 2-3 тыс. об/мин и в реакции используют надосадочную жидкость. Положительную и отрицательную сыворотку разводят 1:10 питательной средой для культуры клеток, содержащей антибиотики и прогревают при 56?С 30 мин. Результаты РН учитывают по ЦПД через 2-3 сут.
Готовят двукратное разведение в испытуемых сывороток от 1:2 до 1:16 на питательной среде для культуры клеток с антибиотиками. Затем готовят необходимый объем вируса, содержащего 1000ТЦД50/0,1см3 и добавляют равный объем его в каждую пробирку с последовательными разведениями сывороток. Смесь сывороток и вируса встряхивают, выдерживают при температуре 37?С в течение 30мин. По истечении указанного срока в пробирки вносят по 1,8 см3 поддерживающей питательной среды. Одновременно ставят следующие контроли:
- -контроль незараженных культур клеток в 3-4 пробирках, в которых проводят смену питательной среды; -контроль дозы вируса. Для контроля точности дозы вируса, взятой в реакцию, из рабочего разведения вируса (1000ТЦД50/0,1см3) готовят разведения до 10-4. Для каждого разведения вируса используют 3-4 пробирки с культурой клеток. В пробирки с культурой клеток вносят рабочие разведение вируса и последовательные его разведения в объеме по 0,1 см3.После контакта при температуре 37?С в течение 30 мин в пробирки с культурой клеток добавляют 1,9 см3 поддерживающей питательной среды; -контроль токсичности сыворотки. Для определения токсичности сыворотки в пробирочные культуры вносят по 0,1см3 разведения сыворотки и по 1,9см3 поддерживающей питательной среды (3-4 пробирки); -контроль специфичности вируса. Пробирки с культурой клеток инфицируют смесью вируса в рабочей дозе с двухкратном разведением специфической сыворотки до ее титра.
Результат серологического исследования испытуемых сывороток считают положительной при отсутствии цитопатического действия в разведениях сыворотки 1:2 и выше при наличии следующих результатов в контролях:
- -в контроле культуры клеток не должно быть изменений монослоя клеток; -в контроле дозы вируса цитопатическое действие должно быть в рабочем разведении вируса и в разведениях 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 ( в последнем разведении не менее двух пробирок); -в контроле токсичности сывороток в случае положительной сыворотки (переболевшее животное) отсутствует цитопатический эффект, начиная с разведения сыворотки 1:2,при отрицательной сыворотке(отсутствуют специфические антитела) должен быть ципопатический эффект, как и в культурах с контролем дозы вируса(рабочее разведение); -в контроле специфически вируса отсутствует цитопатический эффект в культурах, инокулированных смесью специфической сыворотки и вируса.
Наличие специфических антител в испытуемых сыворотках крови свидетельствует об инфицировании данной особи, группы животных возбудителем болезни Ауески или возможной вакцинации животных против болезни Ауески. Положительный результат серологического метода исследования сывороток крови невакцинированных животных свидетельствует о подозрении на заболевание, которое подтверждают постановкой биологической пробы.[4,7]
Для обнаружения и титрования антитела, кроме РН, используется РДП. Сущность реакции заключается в том, что специфические антиген и антитело, помещенные на определенном расстоянии друг от друга в агаровом геле, диффундируют в среду и в местах их встречи образуют полосы преципитации, хорошо видимые при нижнем боковом освещении на темном фоне. В РДП участвуют два компонента - антиген и сыворотка(антитело),проходит реакция в агаровом геле в присутствии в качестве электролита физиологического раствора хлористого натра. Ставят реакцию в чашках Петри или на предметных стенках в микромодификации. При постановки реакции в чашках Петри отбирают чистые, хорошо мытые чашки с ровным дном. В чашку вносят расплавленный в кипящей бане 1%-ный агаровый гель в количестве 25-30 мл с таким расчетом, чтобы слой был 3-4 мм. После застывания агара в нем делают лунки, форма, количество и расположение которых в агаре может быть различное в зависимости от объема и цели исследования. В приготовленные лунки вносят антигены и сыворотки, каждый компанент соответственно в свою лунку по 3-4 капли. После заполнения лунок чашку ставят в термостат при 37?С и, чтобы не было высыхания агара, в чашку кладут кусочек ваты, смоченной водой. Учет реакции проводят через 24-48 и 72 часа. Для этого чашки вынимают из термостата и просматривают на темном фоне при нижнем боковом освещении с помощью осветителя к микроскопу. В положительном случае между лунками со специфическими компанентами появляется за счет образования преципитата серо-белая полоса преципитации. С целью усиления видимости полос, иногда проводят обработку агара с прошедшей реакцией 0,065%-ным раствором серно-кислого кадмия.
РИФ дает возможность видеть при малом увеличении широкие полоски флуоресцирующих нейронов коры головного мозга с отдельными флуоресцирующими клетками. На препараты-отпечатки из патологического материала наносят сыворотку крови, содержащую специфические антитела к данному вирусу и обработанную флуорохромом (веществом, способным светиться при облучении). Если вирусный антиген и меченая сыворотка, содержащая специфические к данному вирусу антитела, соответствуют друг другу, то происходит образование комплекса "антиген + антитело", которое можно обнаружить с помощью люминесцентного микроскопа по специфическому свечению. [3]
В РНГА при использовании эритроцитарного иммуноглобулинового диагностикума обнаруживают вирусный антиген. ИФА прямым иммунопероксидазным методом обнаруживает антиген вируса болезни Ауески в мазках-отпечатках из мозга и слизистой оболочки гортани.[1]
Похожие статьи
-
Характеристика вируса-возбудителя - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
Вирус относится к семейству Herpesviridae, содержит двуспиральный линейный ДНК-нуклеоид. Нуклеоид окружен икосаэдрическим капсидом диаметром 100--110 нм,...
-
Присланный в лабораторию материал принимают и, по возможности, сразу же начинают исследовать, а, если это невозможно, то материал хранят до исследования...
-
Лечение - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
Что касается лечения, то эффективных средств лечения при болезни Ауески нет. Неэффективным оказалось применение антибиотиков, в том числе в сочетании с...
-
Дифференциальная диагностика болезни - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
Болезнь Ауески у свиней следует дифференцировать от болезни Тешена и бешенства. Болезнь Тешена (энтеровирусный энцефаломиелит свиней) -...
-
Ретроспективная диагностика - преследует цель обнаружить динамику прироста АТ, основана на исследовании парных сывороток, которые берут дважды, в начале...
-
Смотри вопрос №7 Общие принципы серологических реакций и их использование в диагностике вирусных болезней В целях определения вида данного вируса при...
-
Диагностика, Лечение, Профилактика - Гаффская болезнь
Гаффский болезнь кошка рыба Токсичность рыбы проверяют в биопробах на кошках. Так описано клиническое течение Сартланской болезни у подопытных животных:...
-
"ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ" - Методы диагностики болезней рыб
Цель занятия : научить правила взятия и пересылки больных рыб и патологического материала для лабораторных исследований. Задания для практической работы:...
-
Дополнительные сведения о признаках болезни - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
Перенесшие заболевание свиньи приобретают невосприимчивость на два года и более. Появившиеся от перенесших заболевание свиноматок поросята, приобретают...
-
Коронавирус размножается в чувствительных к нему первичных и перевиваемых культурах клеток с выраженным ЦПД (цитопатическием действием) на 3-7 сутки....
-
В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более; будучи типичными гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают...
-
Данные - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
Эпизоотические данные, позволяющие предположить наличие болезни Ауески, болеющие животные - поросята, распространение по всей свиноферме, выявлен падеж в...
-
Туши и продукты убоя от животных, больных и подозрительных по заболеванию болезнью Ауески, выпускать в сыром виде запрещается. При наличии дегенеративных...
-
При выборе материала учитывают тропизм вирусов и клиническое проявление болезни, вид и возраст животного, стадию болезни, наличие видимых изменений в...
-
Этиология болезни - Диагностика и лечение цистита у животного
Патология мочевыводящей системы, а в первую очередь мочекаменная болезнь (МКБ), занимет одно из первых мест по частоте обращений в ветеринарные клиники....
-
Введение, Краткое определение болезни - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
На свиноферме заболели поросята-сосуны и отъемыши. Клинические признаки: угнетение, сонливость, повышение температуры тела до41-42С, слизистые истечения...
-
Схема лабораторной диагностики вирусных инфекций - Ветеринарная вирусология
Лабораторная диагностика - это система мер по обнаружению, индикации вируса. В нее входят: получение посланного патологического материла, исследование...
-
Клинические признаки болезни - Диагностика и лечение цистита у животного
Очень важно своевременно распознать типичные признаки заболевания: 1. ненормальное мочеиспускание, включая кровь в моче, ненормальный цвет мочи,...
-
Лабораторная диагностика - Лейкоз крупного рогатого скота
Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патанатомических изменений и результатов лабораторных...
-
Гиподерматоз необходимо дифференцировать от фурункулеза, при котором в центре созревшего фурункула возвышается небольшой флюктуирующий гнойничок,...
-
Клинико-эпизоотологическая или до-лабораторная диагностика - проводится в хозяйствах и позволяет поставить лишь предварительный диагноз, проводится...
-
КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА БОЛЕЗНИ, ОБОСНОВАНИЕ ЛЕЧЕНИЯ - Проведение плановой кастрации животного
Возникло осложнение, мошонка увеличена, припухлость распространяется за пределы мошонки. Температура тела повышена. Кастрационная рана покрыта сгустками...
-
Лептоспиры - хемоорганотрофы с дыхательным типом метаболизма. Повышенная чувствительность к солям синильной кислоты, а также результаты...
-
Значительное увеличение производства и применения минеральных удобрений, особенно азотных (аммиачной, натриевой и калиевой селитр, мочевины, аммиака), с...
-
Клинические проявления гепатопатий, Диагностика, Лечение - Гепатопатии собак
Могут быть самыми разнообразными - анорексия, истощение, полидипсия, ожирение, кожные болезни (экзема, пиодермия, алопеция), рвота желчью, асцит,...
-
Особенности взятия и пересылки патологического материала Материалом для прижизненной диагностики служат кровь и моча, для посмертной - трупы мелких...
-
Ежемесячно коров обследуют на мастит димастином или мастидином. Димастин - желто-оранжевый порошок. Применяется 5%-ный раствор на дистиллированной воде....
-
Причиной возникновения дисфункции молочной железы являются колебания вакуума при машинном доении, передержка доильных стаканов после опорожнения вымени,...
-
Патологоанатомические изменения, Диагностика, Лечение - Псороптоз крупного и мелкого рогатого скота
При генерализованной форме (при поражении 50% и более кожного покрова) развиваются гипоксия и токсемия, сопровождающиеся эозинофилией, эндартериитами,...
-
Диагноз. Аллергическая диагностика - Лечение туберкулеза у животных
Основным методом прижизненной диагностики туберкулеза животных является аллергическое исследование туберкулиновой пробой. С этой целью используют (кроме...
-
Неспецифическая стимулирующая терапия - Внутренние болезни животных
Стимулирующая терапия - регуляция реактивности организма посредством влияния на иммунную, нервную и эндокринную системы. Средства, вызывающие такую...
-
РСК. Иммунологическая основа и характеристика компонентов реакции - Ветеринарная вирусология
Реакция связывания комплемента (РСК) -- одна из традиционных серологических реакций, применяемых для диагностики многих вирусных болезней. Само название...
-
Патогенез - Диагностика и лечение цистита у животного
До возникновения закупорки мочевыводящих путей болезнь протекает без явно выраженных клинических признаков, но результаты лабораторных исследований мочи...
-
Существующие методы лечения и профилактики - Болезни пищеварительного аппарата жвачных
В последние годы накопилось большое количество данных о лечении ацидоза рубца, так например Г. Г. Щербаков, А. В. Коробов и др, (2002) для лечения...
-
Наружный осмотр рыбы - Методы диагностики болезней рыб
До начала наружного осмотра рыбы следует точно определить видовую принадлежность исследуемого экземпляра, его размеры (длину, высоту и обхват) и вес....
-
Паразитарные болезни лабораторных грызунов
За последние два десятилетия у людей во многих странах мира существенно возрос интерес к содержанию мелких и экзотических животных, таких как морские...
-
Диагностика рахита с выраженными клиническими проявлениями не является затруднительной. В остальных случаях диагностируют комплексно на основании...
-
Лечение - Этиология, диагностика, лечение и профилактика тимпании рубца
При хронической тимпании . Лечение симптоматическое, направлено на улучшение моторной деятельности преджелудков, восстановление рубцового пищеварения....
-
Клинические признаки болезни - Гастроэнтерит поросят
Клинические признаки гастроэнтерита зависят от силы и продолжительности действия этиологических факторов. Заболевания поросят возникает в отдельных...
-
Патогенез симптомы и диагностика гастроэнтерита поросят - Гастроэнтерит поросят
Патогенез гастроэнтерита сложный и неодинаковый при отдельных формах заболевания. В зависимости от степени поражения различают фибринозный крупозная и...
Лабораторная диагностика - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят