"ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ" - Методы диагностики болезней рыб

Цель занятия: научить правила взятия и пересылки больных рыб и патологического материала для лабораторных исследований.

Задания для практической работы: взять материал от больных для лабораторного исследования и оформить сопроводительную на исследуемый материал.

Больных или подозрительных рыб доставляют в ветеринарную лабораторию живыми. Для исследования берут 10--15 рыб (старшего возраста -- 5) на различных стадиях болезни с явно выраженными клиническими признаками.

Рыб перевозят в молочных бидонах или других емкостях, заполненных на 3/4 объема водой из того же водоема, откуда они взяты, или водой из артезианской скважины.

Летом при длительной транспортировке воду с рыбой постепенно охлаждают до температуры 12--15 °С, добавляя мелкие кусочки льда. Чтобы не вызвать у рыб температурного шока, нальзя допускать перепад температуры воды исходного водоема и транспортной емкости более 5--7 °С.

Если доставить в лабораторию живую рыбу невозможно, для бактериологического исследования берут кусочки органов и тканей рыб, помешают их в стерильную стеклянную посуду с 40%-ным водным раствором глицерина, закрывают пробкой, заливают парафином и направляют с нарочным.

Кровь, экссудат и другой жидкий патологический материал доставляют в стерильных запаянных пастеровских пипетках. Для микроскопического исследования эти же материалы посылают в лабораторию в виде мазков и препаратов-отпечатков (кляч-препаратов).

Для обнаружения бактерий исследуют выделения, органы и ткани рыб, а также кровь, экссудат, содержимое абсцессов, опухолей, инфильтратов, выделения из язв, паренхиматозные органы, содержимое кишечника, слизь с жабр и поверхности тела.

Летом бактериологические исследования патологического материала проводят не позднее чем через 2 часа после взятия. В исключительных случаях в лаборатории рыбоводного хозяйства делают бактериологические посевы на мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар.

Для вирусологического исследования берут кусочки пораженных органов и тканей массой не более 3--5 г, замораживают или консервируют в 50%-ном растворе химически чистого глицерина (рН 7,2--7,4) в соотношении 1:5--1:10, помещают в стерильные флаконы, закрывают пробкой и заливают парафином.

Материал для гистологических исследований берут от погибших и вынужденно убитых рыб. Мелких рыб (мальки и сеголетки) после вскрытия брюшной полости фиксируют целиком, а от крупных берут органы или кусочки органов размером 2x3 см и толщиной 0,5-- 1,0 см. Кусочки из пораженных органов и тканей вырезают так, чтобы были захвачены нормальные и измененные участки. Независимо от степени поражения берут кусочки кожи с подлежащей мускулатурой, жабр, печени, почек, селезенки, сердца, кишечника, плавательного пузыря, головного мозга. Кишечник перед фиксацией осторожно вскрывают или делают на нем несколько надрезов, чтобы фиксирующая жидкость проникла в его полость. Головной мозг осторожно извлекают после вскрытия черепной коробки. Подлежащий исследованию материал помещают в широкогорлую стеклянную банку и фиксируют 10%-ным формалином в объеме, в 10 раз превышающем объем взятого материала.

Для гистохимических исследований патологического материала в качестве фиксатора используют жидкость Карнау (спирт абсолютный -- 60 мл, хлороформ -- 30 мл и ледяная уксусная кислота -- 10 мл) или жидкость Буэна (насыщенный раствор пикриновой кислоты -- 75 мл, концентрированный формалин -- 25 мл, ледяная уксусная кислота -- 5 мл). Так как выбор фиксатора зависит от цели дальнейшей обработки материала, на этикетке указывают фиксирующий раствор.

Взятую кровь используют для посева, приготовления мазков, гематологических и биохимических исследований. Цельную кровь стабилизируют гепарином (1000 ЕД/мл) или лимоннокислым натрием. Сыворотку крови получают общепринятым методом, помещают в стерильные запаянные ампулы, а летом консервируют 5%-ным раствором фенола (1--2 капли на 1 мл сыворотки) или тиомерсалом из расчета 10 мг препарата на 10 мл сыворотки. Отобранные жидкие материалы перевозят в термосе со льдом.

Мазки крови для исследования на кровепаразитов, выведения лейкоцитарной формулы готовят обычным способом, высушивают, нумеруют, завертывают каждый в чистую бумагу и направляют в лабораторию.

Для биохимических исследований берут цельную кровь в пробирки, добавляют к ней лимоннокислый или щавелевокислый натрий (на 1 мл 2 мг), раствор гепарина (1000 ЕД/мл), наклеивают этикетку и направляют в ветеринарную лабораторию.

Сыворотку крови для биохимических и серологических исследований получают следующим образом. Кровь собирают в небольшие пробирки и оставляют при комнатной температуре для свертывания. Отделившуюся от кровяного сгустка сыворотку отсасывают стерильной пастеровской пипеткой и отправляют в лабораторию в запаянных ампулах. Сыворотку, предназначенную для серологических исследовваний, консервируют 2%-ной борной кислотой, или 0,05%-ным фенолом (1--2 капли 5%-ного фенола на 1 мл сыворотки), или тиомерсалом 1:10000. Цельную кровь и сыворотку транспортируют в термосе со льдом. Материал должен быть доставлен в течение суток после взятия.

У крупных рыб извлекают пораженные паразитами органы (жабры, кишечник, печень и другие ткани) и помещают в банки с консервирующей жидкостью (70%-ный этиловый спирт или 4%-ный раствор формалина). Паразитические организмы, а также кусочки органов и тканей, где обнаружены паразиты, помещают в пробирки или флаконы с консервирующей жидкостью. При подозрении на протозойные болезни из исследуемого материала делают мазок и сразу опускают его на 15-- 20 мин. в жидкость Шаудина (50 мл насыщенного раствора сулемы и 25 мл абсолютного спирта). Маленькие кусочки тканей и органов, пораженных паразитическими простейшими, фиксируют в указанной смеси 30--120 мин. Затем стекла промывают водой и спиртами возрастающей крепости (50--60--70%) и сохраняют в 70%-ном спирте до исследования. Влажные мазки, кусочки органов и тканей с паразитами можно фиксировать также в жидкости Буэна. Фиксация мазков 1--20 мин., кусочков 1--12 час.

Перед консервированием гельминтов тщательно промывают в физиологическом растворе и выдерживают в нем до гибели паразитов.

Моногенетических сосальщиков (дактилогирусы, гиродакгилюсы и др.) консервируют в 4%-ном растворе формалина или глицерин-желатине (под покровным стеклом). Трематод и мелких цестод кладут на предметные стекла, накрывают покровным стеклом и помещают на несколько часов в бактериологическую чашку с 70%-ным спиртом. Затем при помощи кисточки гельминтов перекладывают в пробирку с 70%-ным спиртом.

Нематод и личиночные стадии цестод консервируют в жидкости Барбагалло (3%-ный раствор формалина на изотоническом растворе поваренной соли: 30 мл формалина, 9 г поваренной соли, 1000 мл дистиллированной воды). Для изготовления постоянных препаратов в канадском бальзаме живых нематод лучше консервировать в 70%-ном горячем спирте.

Крупных ленточных гельминтов после умерщвления в физиологическом растворе помещают в 70%-ный спирт.

При консервировании скребней в 70%-ном спирте осторожно выдавливают хоботок из влагалища путем слабого прессования переднего конца скребней под покровным стеклом.

Паразитических рачков консервируют в 3%-ном растворе формалина и сразу же переносят для хранения в 70%-ный спирт.

Пиявок фиксируют в 4%-ном растворе формалина. При этом у них сохраняется пигментация, что облегчает диагностику вида.

Патологический материал, предназначенный для бактериологического, паразитологического и других исследований, снабжают этикеткой, где указывают вид и возраст рыбы, название органа, из которого взят материал. Если в одну посуду помешают несколько объектов исследования, этикетку прикрепляют к каждой рыбе или органу или отдельные кусочки органа завязывают вместе с этикеткой в марлю. Этикетки надписывают простым карандашом и опускают в посуду с материалом таким образом, чтобы можно было легко прочесть надпись.

Пробы воды берут в нескольких точках водоема с таким расчетом, чтобы собранные образцы отражали гидрохимическое состояние водоема или загрязненность его отдельного участка (зоны гибели рыб, места впадения ручья или сбросного канала, района интенсивного поверхностного стока и т. д.), а также в незагрязненном участке (выше по течению). В прудах и других проточных емкостях берут пробы на вытоке воды.

Пробы воды (не менее 2 л) отбирают батометром из поверхностных (на глубине 50 см) и придонных слоев в чистые стеклянные или полиэтиленовые бутылки. Перед заполнением посуду ополаскивают 2--3 раза исследуемой водой. В тех случаях, когда время транспортирования пробы составляет более 1 сут, их рекомендуется фиксировать различными консервантами в зависимости от целей исследования. Зимой воду при транспортировании следует утеплять, чтобы исключить ее замерзание.

Пробы грунта (массой 2 кг) берут также из разных зон водоема дночерпателем Экмана или Кирпичникова. Грунт сушат на воздухе и упаковывают в широкогорлые банки или полиэтиленовые мешки (рис. 2).

Рис. 2. Приспособления для взятия проб грунта и планктона: А -- скребок; Б -- дночерпатель; В -- планктонная сетка

Планктон собирают планктонной сеткой, фильтруя такое количество воды, которое необходимо для получения около 50 г живой массы планктона.

Отобранные материалы подробно описывают, этикетируют, упаковывают в водонепроницаемую тару, опечатывают и высылают с нарочным в ветеринарную лабораторию или другое учреждение, где имеются возможности для исследования. В сопроводительном письме сообщают данные обследования водоема, указывают предполагаемый диагноз и какие лабораторные исследования необходимо провести.

Похожие статьи




"ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ" - Методы диагностики болезней рыб

Предыдущая | Следующая