Этапы проведения бактериологического исследования - Ассоциативные болезни птиц
1 день- |
Вскрытие трупов, посевы из внутренних органов на МПБ и МПА |
2 день - |
При росте типичных для эшерихий колоний, снятие 2-3 характерных колоний и пересев их на среды Эндо или Левина - 2 чашки на каждую колонию. |
3 день- |
Приготовление мазков, окраска, микроскопия их. Посев на пестрый ряд и бульон Хоттингера. Приготовление суспензии культуры и заражение белых мышей и цыплят. Приготовление антигена для серологической типизациипо О-антигену. |
4 день- |
Предварительный учет биохимических свойств культур, серологическая типизация (капельная и развернутая РА). Определение чувствительности культур к антибиотикам. |
5 день - |
Учет РА (предварительный). Окончательный учет биохимических свойств. Учет чувствительности к антибиотикам. |
6-7 день- |
Окончательный учет РА. Завершение учета биохимических свойств культуры. Учет биологической пробы. |
1. Глицериновый раствор для консервирования органов и тканей.
Глицерин - 250 мл.
Хлористый натрий - 5 г.
Дистиллированная вода - 750 мл.
Раствор стерилизуют в автоклаве при 1 атм. (1200С) 20 минут или кипятят в течении 30 минут.
- 2. Для изучения ферментативной активности культур можно использовать 0,3% полужидкий агар с углеводами и индикатором Андрадэ. На той же среде, но без углеводов и индикатора, определяют подвижность. Посев проводят с МПА уколом в столбик среды. подвижные штаммы растут по всему столбику среды с ее помутнением, а не подвижные - только по уколу, среда остается прозрачной. 3. Реакция с метилротом. Для проведения реакции готовят среду Кларка, в состав которой входят: пептон - 5г. двуосновной фосфорнокислый калий (К2НРО4) -5г. дистиллированная вода - 100 мл.
Смесь подогревают, периодически помешивая ее для быстрейшего растворения компонентов, затем холаждают и фильтруют через бумажный фильтр, рН не устанавливают. Среду разливают в пробирки по 5 мл. и стерилизуют при 0,5 атм. (1100С) 15 минут или текучим паром (дробно) ежедневно по 20 минут в течении 3-х дней.
Приготовление раствора индикатора: 0,01 г. метилрота растворяют в 30 мл 960 спирта-ректификата, после чего добавляют 20 мл. дистиллированной воды. Раствор сохраняется долго в темном месте.
Техника проведения реакции: в пробирку 2-х суточной культурой изучаемых бактерий в среде Кларка добавляют 5 капель индикатора метилрота и встряхивают пробирку.
Учет реакции проводится сразу после добавления индикатора. В зависимости от величины рН, цвет культуры изменяетсярозовое окрашивание (рН ниже 5,0) положительная реакция (+), желтое окрашивание (рН выше 5,0) - отрицательная реакция (-). Желтовато-оранжевый цвет культуры указывает на сомнительную реакцию (+).
4. Реакция Фогес-Проскауэра (на образование ацетилметилкарбинола из глюкозы).
К 1 мл 2-суточной культуры бактерий в среде Кларка добавляют 0,2 мл 40%-ного водного раствора едкого калия (КОН) и 0,5 мл 6%-ного спиртового раствора альфа-нафтола. Через 3-5 минут проводят учет реакции. При наличии в культуре ацетилметилкарбинола появляется розовое окрашивание (положительная реакция), при отрицательной реакции культура окрашивается в желтый цвет. Окраска культуры в желтовато-оранжевый цвет свидетельствует о сомнительной реакции.
5. Определение способности бактерий усваивать цитратные и аммонийные соли.
Определение указанных свойств бактерий проводят на среде:
- А) Козера, в состав которой входят - кислый фосфорнокислый натрий аммоний ( NaNH4 HPO4 . 4H2O) -1,5г. однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2РО4)-1г., сернокислый магний(МоО47Н2О) - 0,2г., лимоннокислый натрий (Na3C6H5O7 . 2H2O)- 3г., дистиллированная вода - 100 мл. Смесь фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки и стерилизуют при 1200 15-20 минут. Готовая среда бесцветная. Засеянные изучаемым микроорганизмом пробирки, инкубируют при 370С в течение 2-4 суток. Бактерии, усваивающие цитратные и аммонийные соли, хорошо растут, вызывая помутнение среды. Отсутствие роста бактерий в среде Козера, указывает на неспособность усвоения цитратных и аммонийных солей (среда остается прозрачной). Б) на среде Симмонса - дистиллированная вода - 1000 мл., двузамещенный фосфорнокислый аммоний - (NH4HPO4) -1,5 г., однозамещенный фосфорный калий - КН2РО4 - 1г. сернокислый магний - MgSO4 . 7H2O -0,2г., трехзамещенный лимоннокислый натрий -0,2 г., агар - 20,0г. устанавливаемый рН - 7,2 (добавляя 10%-ный раствор NaOH и затем добавляют 10 мл 0,2% раствора бромтимолблау, и разливают по стерильным пробиркам ( по 0,5 мл.). Стерилизуют автоклавированием 15 минут при 1120С. Перед употреблением столбик среды окрашивают. Пересев культуры проводят с МПА, беря ее так, чтобы не захватить среду. Бульонная культура не используется. кишечная палочка на среде Симмонса не растет.
Приготовление индикатора бромтимолблау: бромтимолблау - 1г., 0,1N раствора NaOH -25 мл. дистиллированная вода - 475 мл. Цитратно-аммонийно позитивные бактерии дают рост с изменением среды в ярко-синий цвет. Микробы, не способные усваивать цитратные и аммонийные соли, на данной среде не растут и цвет среды не изменяется.
6. Определение способности бактерий расщеплять мочевину.
Рецепт среды: стерильный 1,7% питательный агар на мартеновском бульоне, рН -7,3 - 1000 мл. глюкозы -5г., 50%-ный раствор мочевины -20мл. 0,2%-ный раствор бромтимолблау -12 мл. Разливают в стерильные пробирки по 5 мл и стерилизуют один раз текучим паром 15 минут. Среду перед употреблением скашивают. Расщепление мочевины сопровождается изменением цвета среды с зеленоватого в ярко-синий, при отрицательной реакции среда становится желтой.
7. Обнаружение индола. Может быть проведено различными методами. Наиболее доступным и удобным способом обнаружения индола является метод с использованием индикаторных бумажек, приготовленных по одному из следующих рецептов: а) фильтровальную бумагу пропитывают насыщенным (12%) водным раствором щавелевой кислоты, затем бумагу высушивают на воздухе и разрезают на полоски размером 10 х 0,5 см. Хранят бумажки с щавелевой кислотой в стеклянной банке с притертой пробкой.
Для обнаружения индола засевают пробирки с МПБ или бульоном Хоттингера изучаемой культурой бактерий, вставляют в пробирку индикаторную бумажку, прижимая верхний конец ватно-марлевой пробкой (нижний край бумаги не должен касаться питательной среды). Инкубирование пробирок проводится при 370С 1-3 дня. При наличии индолообразования нижняя часть индикаторной бумажки окрашивается в розовый цвет (просматривать при проходящем свете). б) Фильтровальную бумагу пропитывают теплой смесью, состоящей из пара-диметил-амидобензальтегида -3-5г., 960 спирта-ректификата -50 мл. фосфатной кислоты (очищенной, концентрированной) - 10 мл. Бумагу высушивают на воздухе и разрезают на полоски. Цвет готовых бумажек желтый. Хранить следует в стеклянной банке с притертой пробкой.
Обнаружение индола проводят также, как и с бумажками, пропитанными щавелевой кислотой. При наличии нидола нижний край бумажки изменяет цвет, становится от сиренево-розового до интенсивно-малинового оттенка. Окрашивание индикаторами бумажки в другие цвета не учитывается.
- 8. Обнаружение сероводорода. Проводят на плотной среде следующего состава, которую готовят в два этапа. 1 день - готовят агаровую основу - 10,7%-2% агара - 100 мл. Стерилизуют в автоклаве при 1200 30 минут, предварительно профильтровывая его. 2 день - добавляют сернокислое железо FeSO4 -0,2 г. гипосульфит -0,3 г., глюкозу -1г. индикатор фенолрот 0,3%-ный -12 мл.
Стерилизация текучим паром -20 минут. Посев проводят на окрашенный агар, проколов нижнюю часть столбика среды. При положительной реакции покрасневший столбик среды дает черную окраску в своей нижней части. При отрицательном результате почернения среды не наступает.
Похожие статьи
-
Патологоанатомические изменения, Диагноз - Ассоциативные болезни птиц
При вскрытии трупов цыплят, павших в возрасте от нескольких часов до 7-10 дней, обнаруживают изменения, свойственные септическим заболеваниям. У...
-
Источники и пути заражения, Симптоматика - Ассоциативные болезни птиц
Внешнюю среду ооцитами загрязняют больные эймериозом цыплята и взрослые птицы, переболевшие бессимптомно. Распространяются ооциты механическим путем...
-
1. Общие положения. 1.1 Жидкая инактивированная ГОА-формол против колибактериоза птиц предназначена для профилактики колибактериоза птиц. 1.2 Вакцина...
-
Восприимчивость - Ассоциативные болезни птиц
Восприимчивость кокцидий строго специфична, т. е. определенный вид паразитов может заражать только один вид птиц. Исключением являются кокцидии диких и...
-
Эймериозы (кокцидиозы), Возбудитель - Ассоциативные болезни птиц
Общие сведения. Кокцидиозы или эймериозы - широко распространенные протозайные заболевания, протекающие в виде энзоотии, характеризующиеся поражением...
-
Чувствительность кишечной палочки к антибиотикам - Ассоциативные болезни птиц
Чувствительность выделенных штаммов кишечных палочек определяют общепринятым методом - методом диффузии в агар с использованием бумажных дисков. Этот...
-
Патогенез, Диагностика - Ассоциативные болезни птиц
Эндогенные стадии развития эймерий вызывают массовую гибель эпителиальных клеток и некроз слизистой оболочки кишечника. Это приводит к расстройству...
-
Дифференциальная диагностика - Ассоциативные болезни птиц
При постановке диагноза на колибактериоз необходимо его дифферинцировать от ниже следующих болезней (Таблица 1). Таблица 1. Дифференциальная диагностика...
-
Материал для исследования следует брать по возможности до начала химиотерапии и лучше во время вскрытия или дренирования гнойного очага. Особенно...
-
Литература - Ассоциативные болезни птиц
1. Роль Escheria coli в эпизоотологии колибактериоза птиц. Вестник аграрной науки Узбекистана. Ташкент, 2002 г., №1 (7) - с.76-77. 2. Гюров В.,...
-
Одновременное заболевание птиц кокцидиозом и колибактериозом - Ассоциативные болезни птиц
Высокая концентрация поголовья птиц на ограниченных площадях при современном ведении птицеводства на промышленной основе создает предпосылки для...
-
Эпизоотология болезни - Ассоциативные болезни птиц
В Узбекистане колибактериоз птиц имеет значительное распространение. Он наблюдается в птицеводческих хозяйствах Самаркандской, Кашкадарьинской,...
-
Возбудитель скарлатины. Хар-ка - Частная микробиология
Семейство-Sreptococacea включает 6 родов опасных для человека: Streptococcus, Aerococcus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus. Стрептококки....
-
Посев проводили по ГОЛЬДу на кровяной агар. Диагностически значимым считаем содержание микроорганизмов 105, а у детей 104 в одном мл мочи, в монокультуре...
-
Посев проводили по Роттераму на кровяной агар и среду Сабуро. Диагностически значимые микроорганизмы определяли по комплексу критериев: Количество в 1 мл...
-
Значительный удельный вес среди обследованных составляют дети и в связи с этим основными в этиологической структуре заболеваний, вызванных УПМ, являются...
-
Колибактериоз птиц - Ассоциативные болезни птиц
Кокцидиоз колибактериоз птица болезнь Перевод птицеводства на промышленную основу в масштабах Республики Узбекистан остро поставил перед ветеринарными...
-
Микроскопический метод исследования предусматривает наблюдение за живыми и убитыми микробами в окрашенном и неокрашенном состоянии. Различают простые и...
-
Объект и предмет исследования В качестве Объекта исследования была выбраны сельскохозяйственные культуры: горох (( Pisum sativum L.), сорта...
-
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и химиопрепаратам - это свойство микроорганизмов реагировать на действие данных препаратов приостановкой...
-
- Оценить распространенность и интенсивность основных стоматологических заболеваний. - Выявить потребность в их профилактике и лечении. - Определить...
-
Исследования полостных или трубчатых органов, заключающиеся в непосредственном осмотре их внутренней поверхности с помощью особых приборов - Эндоскопов...
-
Основные задачи: - регулирование процессов возбуждения и торможения в ЦНС; - улучшение функции дыхания, кровообращения и пищеварения,...
-
Этот раздел работы лаборатории предусматривает контроль: А. Внутрилабораторный. Б. Межлабораторный. А. Внутрилабораторный контроль: Бактериологический и...
-
Дифтерия Исследования проводили в соответствии с приказом № 450 от 02.04.86 г. и МУ 4.2.589-96 с диагностической целью. В качестве питательной среды...
-
В обычных (не осложненных) случаях достаточно провести небольшое количество исследований, позволяющие исключить симптоматическую артериальную...
-
Анализ крови 27.04.06 Эритроциты - 4,46 * 10№Іл Лейкоциты - 9,6 * 109Л Hb - 148 г/л СОЭ - 10 мм/ч Базофилы Эозинофилы Юные Палочкоядерные 2...
-
Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам подразделяют на две группы: 1. Диффузные...
-
ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ - История болезни: миома матки; субмукозный узел
Мазок из уретры 18.04.00. Лейкоциты -- 12 в п/ з; бактериальная флора -- смешанная; трихомонады, гонококки -- не обнаружены. 4.05.00. Лейкоциты -- 8 -10...
-
Озонотерапия стенокардия напряжение Одним из важных достижений медицины второй половины XX века явилось открытие факторов риска (ФР), влияющих на...
-
Анаэробные микроорганизмы, являясь представителями нормальной микрофлоры, в то же время они имеют потенциальные способности для развития инфекционного...
-
Ситуация по сальмонеллам в 1998 году заметно улучшилась: заболеваемость снизилась в 2,7 раза. Соответственно, число исследований уменьшилось на 16,5 %,...
-
Данные лабораторных и специальных исследований - Язвенная болезнь
Общий анализ крови: Показатели Гемоглобин 169 г/л Эритроциты 3.6 х1012/л Цветной показатель 1,0 Тромбоциты 220 Ретикулоциты 3% Лейкоциты 7,6х10*9/л СОЭ 6...
-
Осмотр Конфигурация суставов: Наблюдается незначительная припухлость обоих коленных суставов Величина окружности сустава: 40см Окраска кожи над суставом:...
-
Таксономия: отдел Gracilicutes, род Francisella. Возбудитель - Francisella tularensis. Морфология: мелкие кокковидные полиморфные палочки, неподвижные,...
-
ЛЕЧЕНИЕ - История болезни: миома матки; субмукозный узел
Консервативное лечение миомы не целесообразно, т. к. оно не приведет к радикальному излечению и у пациентки существуют показания к оперативному лечению...
-
Материал и методы исследования - Фауна рыб нижнего течения реки Гайва
Материал для данной работы был собран на р. Гайва Пермского края в весеннее-летне-осенний период с 6 мая по 11 сентября 2015 года, как во время...
-
Серологические Не проводились Аллергические Не проводились Другие исследования Не проводились РЕЗУЛЬТАТЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследование крови...
-
Математика и окружающая среда - Методология научного исследования в естествознании
Повсюду нас окружают движение, переменные величины и их взаимо-связи. Различные виды движения и их закономерности составляют основной объект изучения...
-
Законы наследственности, Достижения современной цитологии - Цитологические исследования
Второй этап в развитии цитологии как науки охватывает 1900-1935. Он наступил после того, как в 1900 были вторично открыты основные законы...
Этапы проведения бактериологического исследования - Ассоциативные болезни птиц