МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, Материал исследования, Выделение ДНК - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
Материал исследования
Исследование проводилось в 2014 году в период с 17.06.14 по 27.07.14 и с 02.09.14 по 12.10.14. В лаборатории биотехнологии генотипировано 100 голов быков - производителей голштинской черно-пестрой породы, принадлежащих различным племенным предприятиям: ОАО "ГЦВ", ОАО "Московское" по племенной работе, ОАО "Краснодарское" по племенной работе, ГУПП РК "Карелиягосплем", ОАО "Невское" по племенной работе и ОАО "Племпредприятие "Череповецкое", рожденные во временном интервале с 1982 по 2012 года.
В качестве материала для выделения ДНК служила сперма быков-производителей.
Источниками информации о происхождении и оценке быков-производителей стали их племенные свидетельства и данные каталогов племпредприятий.
Выделение ДНК
При выделении ДНК из спермы нами использовались наборы реагентов Diatom™ DNA Prep 100 ООО Лаборатория "Изоген" г. Москва.
- 1. Первичная обработка образцов. - Семя размораживаем. 100 мкл переносим в чистую пробирку, добавляем 240 мкл лизирующего раствора (Lysisreagent), 20 мкл ДТТ на каждые 10 проб, термостатируем смесь при 65 ?С 40 мин. Центрифугируем десять секунд при 5000 об/мин. Переносим супернатант в чистую пробирку. - К 100 мкл крови добавляем 400 мкл лизирующего раствора (Lysisreagent). Приступаем к выделению без термостатирования. 2. В пробирку с лизатом добавляем 20 мкл суспензии сорбента (диатомовые водоросли). Перед этим сорбент встряхиваем на вортексе. Ротируем 10 мин. 3. Центрифугируем десять секунд при 5000 об/мин. 4. Осторожно, не задевая осадка, удаляем супернатант с помощью водоструйного насоса. К осадку прибавляем 200 мкл лизирующего раствора. 5. Центрифугируем десять секунд при 5000 об/мин. 6. Удаляем супернатант. К осадку добавляем 1 мл рабочего однократного раствора солевого буфера (десятикратный солевой буфер (1М хлорид натрия (NaCl) и 1M хлорид калия (KCl)) разводим водой до 100 мл, а затем 96% этиловым спиртом до 300 мл и перемешиваем). 7. Центрифугируем десять секунд при 5000 об/мин. 8. Удаляем супернатант, к осадку добавляем 1 мл рабочего раствора солевого буфера, перемешиваем, центрифугируем десять секунд при 5000 об. 9. Удаляем супернатант. Убираем полосками фильтровальной бумаги остатки жидкости над сорбентом, меняя полоски от пробы к пробе. 10. Осадок сушим в термостате при 65 ?С пять минут. 11. К осадку добавляем 100 мкл ЭкстраГена (10% смесь ионообменников (типа Chelex), и 0,01% тритон X-100). Пробирку с ЭкстраГеном хорошо перемешать. Затем ресуспендируем на вортексе и термостатируем пять минут при 65 ?С. 12. Центрифугируем при 12000 об/мин 13. Перенести содержащую ДНК надосадочную жидкость (80 мкл) в чистую пробирку.
Выход ДНК составлял 3-5 мгк/100 мкл с OD 260/280 от 1,6 до 2,0.
Похожие статьи
-
Молекулярный вес продуктов ПЦР и их фрагментов, полученных после рестрикции, определяли с помощью электрофореза в агарозном (1,5-2,5 процентном) геле, с...
-
Установлено, что локализация гена BoLA-DRB3 на 23 хромосоме в непосредственной близости от генов, детерминирующих хозяйственно-ценные признаки,...
-
Как было отмечено выше, ген BoLA-DRB3 обладает выраженным естественным полиморфизмом. Локус считается полиморфным, если в популяции существуют два или...
-
Выборка быков - производителей голштинской породы черно - пестрой масти включала 100 животных, рожденных в течение 23 лет в период с 1986 по 2009 год и...
-
В современной сельскохозяйственной биотехнологии все большее значение приобретают молекулярно-биологические методы, позволяющие тонко регулировать...
-
ВВЕДЕНИЕ - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
Мировая тенденция индустриализации сельского хозяйства несет в себе множество рисков. Один из них - это сокращение национальных генетических ресурсов...
-
Большинство разновидностей генов имеет довольно консервативный характер. Однако, существует несколько групп генов, в которых эволюционно закрепился...
-
Ген BoLA-DRB3: структура, функции - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
На молекулярно-биологическом уровне трансляция BoLA-DRB3 обеспечивает синтез белкового антигена, расположенного на внешней стороне мембраны В-лимфоцитов...
-
ЗАКЛЮЧЕНИЕ - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
По результатам исследования были сделаны следующие выводы: 1. В выборке из 100 быков принадлежащих к голштинской черно-пестрой породе, из 54 ПДРФ...
-
Исследования проводились в 2015-2016 учебных годах на базе кафедры незаразной патологии Бел ГАУ, в испытательной лаборатории Бел ГАУ и колхозе им Горина....
-
Проблема биоразнообразия доместицированных животных Формирование вида (как единицы естественного отбора), в ходе эво-люции занимало значительные...
-
Характеристика частот встречаемости аллелей BoLA-DRB3 Полиморфность аллеля BoLA-DRB3 эволюционно возникла в связи с необходимостью вариабельного строения...
-
Если учитывать весь спектр получаемой от крупного рогатого скота продукции, то он, без сомнения, является одним из самых ценных животных, когда либо...
-
Амплификация фрагмента гена BoLA-DRB3 методом ПЦР Для последующего анализа методом гнездовой ПЦР амплифицировали участок экзона два гена BoLA-DRB3...
-
Материалы и методы исследований При написании данной курсовой работы я пользовалась ветеринарным законодательством том 4 (инструкция по борьбе с...
-
Генетика крупного рогатого скота - Методы оценки молочной продуктивности крупного рогатого скота
Современная генетика располагает точными фактами об изменчивости и наследственности различных признаков. Выявлены закономерности наследования многих...
-
Симментальская порода - Методы оценки молочной продуктивности крупного рогатого скота
Симментальская порода является наиболее типичным представителем горного скота мясо-молочного направления. По краниологическим признакам она относится к...
-
Таблица 2. Результаты исследований сывороток крови крупного рогатого скота мясных пород на наличие антител к вирусам N° Порода Количество Пробы,...
-
Основные генетические параметры популяций (изменчивость, наследуемость, корреляция) подвержены изменениям под влиянием применяемых в стадах систем отбора...
-
При выяснении природы количественных признаков, их зависимости от генетических и негенетических факторов большое значение имеет изучение повторяемости...
-
В послеотельный период у животных как опытной, так и контрольной группы не было выявлено тяжелых послеродовых осложнений (послеродовый парез, выпадение...
-
Кровь отбирали из хвостовой вены ( V. с occygea ), для забора крови использовали вакуумные системы для забора крови производства фирмы DNK ® (Тайвань)....
-
Помесный симментальский скот - Методы оценки молочной продуктивности крупного рогатого скота
Симментальский скот был широко использован для скрещивания с местным скотом на очень большой территории РФ, в результате чего в стране насчитывается...
-
Синцитиальный метод при ранней идентификации вируса лейкоза крупного рогатого скота
Лейкоз крупного рогатого скота - злокачественное вирусное лимфопролиферативное заболевание. Ретровирус, относящийся к семейству Retroviridae, роду...
-
1. Кахексия трупа. 2. Туберкула величиной с мелкий грецкий орех в области тупого края средней доли левого легкого. 3. Равномерные высыпания милиарных и...
-
Таблица 1. Результаты биохимических исследований сывороток крупного рогатого скота мясных пород N° Показатели Порода крупного рогатого скота Шаролезкая...
-
Воспроизводительная способность животных относится к важнейшим признакам, в значительной степени определяющим экономическую эффективность отрасли....
-
Выворот матки - это осложнение родов, происходит частичное выпячивание рогов матки. Выпадение матки - это полный выворот матки и выпадение ее наружу....
-
У коров после поедания своего последа наблюдается развитие тимпании, профузный понос. Коровы угнетены, у них снижен аппетит, температура повышена. Для...
-
Заключение - Методы оценки молочной продуктивности крупного рогатого скота
Ситуация, сложившаяся в результате проведения экономических реформ и либерализации цен в агропромышленном комплексе страны, требует тщательного анализа в...
-
Показатели красных клеток крови животных обеих групп находятся в пределах физиологической нормы (Табл. 2). Отмечается умеренный лейкоцитоз в крови...
-
В ООО "Сибирская Нива" производится целенаправленная планомерная работа, согласно плана, утвержденного решением главы Администрации Новосибирской...
-
Внедрение современной технологии производства молока на промышленной основе предъявляет более высокие требования к ряду признаков животных, вызывает...
-
Телят в возрасте 3-4 месяцев в групповые станки подбирают по возможности одного возраста и пола, с одинаковой живой массой. Содержат телят по 10-20 голов...
-
К основным параметрам, влияющим на физиологическое состояние животных, относят температуру, влажность, газовый состав атмосферы, освещенность, уровень...
-
Биологические особенности животных Молодняк крупного рогатого скота по своим особенностям отличается от взрослых особей. При рождении у теленка уже есть...
-
Человек, вытесняя естественные биогеоценозы и закладывая агробиогеоценозы, своими прямыми и косвенными воздействиями нарушает устойчивость всей биосферы....
-
Присланный в лабораторию материал принимают и, по возможности, сразу же начинают исследовать, а, если это невозможно, то материал хранят до исследования...
-
Гиподерматоз необходимо дифференцировать от фурункулеза, при котором в центре созревшего фурункула возвышается небольшой флюктуирующий гнойничок,...
-
Патологоанатомические изменения, Диагностика заболевания - Гиподерматоз крупного рогатого скота
Обычно наблюдаются в местах локализации личинок. При вскрытии животных в период заражения личинками в подкожной клетчатке можно обнаружить небольшие...
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, Материал исследования, Выделение ДНК - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота