Определение концентрации спермиев хряка при помощи оптического стандарта - Ветеринарно-санитарная экспертиза спермы сельскохозяйственных животных
В пустую пробирку вносят 1,0 мл 1%-ного раствора натрия хлорида. Микропипеткой набирают 0,1 мл свежеполученной профильтрованной спермы. Конец пипетки вытирают снаружи салфеткой, а затем два раза промывают ее раствором в пробирке. Пробирку слегка встряхивают и держат рядом со стандартом. Стандарт предварительно должен быть хорошо взболтан. К пробиркам сзади вплотную прикладывают лист с печатным текстом.
К исследуемой сперме добавляют пипеткой 1%-ный раствор натрия хлорида в таком количестве, чтобы высота букв шрифта и оптическая плотность были одинаковы со стандартом. Каждый раз при добавлении раствора содержимое пробирки и стандарт встряхивают для получения равномерной взвеси.
После того как оптическая плотность исследуемой спермы и стандарта совпадут, проводят расчет по формуле:
К = 50 (n + 0,1),
Где: К - концентрация спермы (млн./мл);
N - объем внесенного 1%-ного раствора натрия хлорида (мл);
50 - коэффициент.
Оптический стандарт соответствует оптической плотности спермы хряков с концентрацией спермиев 5 млн./мл. Пример: Для выравнивания оптической плотности до стандарта к исследуемой сперме добавлено всего 4,5 мл 1%-ного раствора натрия хлорида (с учетом ранее налитого в пустую пробирку).
К = 50 х (4,5 + 0,1) = 50 х 4,6 = 230 (млн./мл)
Следовательно, в 1 мл исследуемой спермы содержится 230 млн. спермиев.
Определение концентрации спермиев жеребца по стандартам
Стандарты представляют собой стеклянные запаянные пробирки одинакового диаметра, с жидкостью имитирующей сперму жеребца разной концентрации: 10 - 20 - 200 - 300 и 500 млн. спермиев в 1 мл.
Сперму наливают в прилагаемую пустую пробирку такого же диаметра, и сравнивают со стандартом. Стандарты, предварительно встряхивают, чтобы осадок равномерно размешался. Пробирки просматривают на свет, при этом подбирают стандарт, наиболее близкий по густоте к определяемой сперме, который и принимают за ее концентрацию. Концентрация спермиев может быть определена и как промежуточная между двумя стандартами.
При концентрации более 500 млн. спермиев в 1 мл сперму можно разбавлять 7%-ным раствором глюкозы в 2 раза (1: 1), затем установить концентрацию по стандартам и сделать соответствующий пересчет на неразбавленную сперму.
Для большей точности определения к сравниваемым пробиркам сзади вплотную прикладывают стеклянную палочку.
Определение интенсивности дыхания спермиев
Метод основывается на том, что в анаэробных условиях спермин используют для дыхания кислород из молекул метиленового синего, в результате чего раствор обесцвечивается. Поскольку дыхание происходит под влиянием дегидрогеназы, то по существу скорость обесцвечивания раствора метиленового синего показывает активность названного энзима.
Для определения на теплое (30-370С) предметное стекло наносят каплю, спермы и каплю метиленового синего (30 0С). Капли быстро перемешивают, и смесь набирают в два теплых стеклянных капилляра длина которых должна быть не менее 5-6 см и диаметр 0,8-1,0 мм. Длина столба в трубке должна быть примерно 2-3 см. В столбе смеси не должно быть пузырьков воздуха. Капилляры кладут горизонтально и помещают в термостат (+ 37 0С) на белую бумагу. Регистрируют время (таблица 3), в течение которого обесцвечивается раствор метиленового синего.
Таблица 3 - Оценка качества спермы по времени обесцвечивания метиленовой сини (в минутах)
Качество спермы |
Бык |
Баран |
Хорошее |
5 - 10 |
3 - 7 |
Среднее |
11 - 30 |
8 - 12 |
Плохое (непригодное для использования) |
Более 30 |
Более 12 |
Результат является более объективным, если вычисляют и активность дегидрогеназы, поскольку с помощью этого показателя учитывается как подвижность спермиев, так и их концентрация.
Активность дегидрогеназы в условных единицах получают по формуле:
Да = (ПсЧtЧС)/10,
Где:
Да - активность дегидрогеназы;
Пс - подвижность спермиев в баллах;
T - время обесцвечивания раствора метиленового синего в минутах;
С - концентрация спермиев (млрд./мл).
Допустимая активность дегидрогеназы должна быть в сперме быка в пределах 16,8 у. е., для барана 9,6 у. е. пределах 16,8 у. е., для барана 9,6 у. е.
Определение абсолютной выживаемости спермиев
Под выживаемостью спермиев подразумевают продолжительность их жизни вне организма в определенных условиях. Это важный показатель качества спермы, поскольку он дает возможность предсказать оплодотворяющую способность спермы. Выживаемость спермиев выражается абсолютной выживаемостью (S).
Для определения абсолютного показателя выживаемости спермиев берут 11 стерильных пробирок емкостью по 2 мл и нумеруют восковым карандашом. Во все пробирки, за исключением первой, наливают по 0,5 мл синтетической среды. В первую и вторую пробирки вносят по 0,5 мл неразбавленной спермы. Первая пробирка в дальнейшем служит контролем.
Сперму во второй пробирке тщательно перемешивают со средой путем пипетирования и из нее переносят 0,5 мл в третью пробирку; в третьей пробирке смесь перемешивают и переносят в четвертую и т. д. Из последней пробирки (11-ой) 0,5 мл смеси выливают. Таким образом, в первой пробирке сперма не разбавленная, а в пробирках со 2 по 11-ую сперма разбавлена в 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, 1024 раза.
Из каждой пробирки на теплое предметное стекло берут каплю, спермы и оценивают подвижность. Пробирки устанавливают в штатив, закрывают стерильными пробками и ставят на хранение в термос со льдом.
В последующем ежедневно оценивают подвижность спермиев под микроскопом при температуре 40 0С. Оценку подвижности проводят до установления гибели всех спермиев во всех пробирках. Результаты исследований заносят в таблицу. Показатель абсолютной выживаемости (S) определяют по формуле:
S = а 1t 1 + а 2t 2 + a 3t 3+ ... a nt n
Где: а 1, а 2, а 3 , аn - подвижность спермиев за интервалы времени, в балах;
T1 , t 2 , t 3 , tn - последовательные интервалы времени, в часах. Интервалы времени в часах определяются по формуле:
T = (Т n+1 - Т n-1)/2
Где: Т - часы опыта,
Т n+1 - время в часах от начала опыта до последующего определения подвижности;
Т n-1 - время в часах от начала опыта до предыдущего определения подвижности.
Хорошая сперма быка и барана, разбавленная синтетической средой в 16-32 раза, должна иметь показатель абсолютной выживаемости спермиев не ниже 1 400, хряка - 900, жеребца - 400 и выше.
Похожие статьи
-
Подвижность спермиев (активность) -- это способность их к прямолинейно-поступательному движению (ППД). Оценку на подвижность проводят в раздавленной...
-
Определение концентрации спермиев в счетной камере. Концентрация спермиев в сперме -- это степень насыщенности спермы сперматозоидами. Она выражается...
-
Метод основан на том, что в результате метаболических процессов образуется перекись водорода; при помощи дегидрогеназ водород переносится на метиленовую...
-
В настоящее время в сельском хозяйстве для разведения сельскохозяйственных животных активно применяется на практике метод искусственного осеменения...
-
Исследование коли-титра спермы Коли-титр определяют для санитарной оценки спермы. Санитарно-показательными бактериями считают все разновидности кишечной...
-
Проведение ветеринарно-санитарного контроля качества спермы дает нам следующие возможности: Определение репродуктивных способностей производителя;...
-
Качество спермы - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Успех осеменения зависит также от качества спермиев. Чем активнее их движение, тем меньшую дозу спермы можно применять. До недавнего времени при всех...
-
При работе со спермой (как свежеполученной, так и сохраняемой) необходимо учитывать влияние на спермиев таких внешних факторов, как температура, свет,...
-
Оценка качества эякулята - Ветеринарно-санитарная экспертиза спермы сельскохозяйственных животных
Оценка качества эякулята по внешним показателям. Взятый эякулят подвергают макроскопической оценке. Сперму оценивают визуально по объему, цвету,...
-
Хранение и оттаивание спермы - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
При работе с семенем (спермой) следует помнить, что на жизнеспособность спермиев влияют следующие факторы: - свет - солнечные лучи убивают спермиев,...
-
Оценка спермы по подвижности - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Для проверки качества спермы необходимо использовать подогретые предметные и покровные стекла, находящиеся во время работы на обогреваемом столике...
-
Сперма представляет собой смесь спермиев (половых клеток) и секретов придаточных половых желез. Функция спермиев - оплодотворить яйцеклетку, функции...
-
ВЛИЯНИЕ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ И МЕДИКАМЕНТОВ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
Большинство химических соединений для спермиев токсичны. Из неорганических веществ особенно ядовиты соли и окислы тяжелых металлов (ртуть, свинец),...
-
СПЕРМИИ ИХ СТРОЕНИЕ, ВИДЫ И СКОРОСТЬ ДВИЖЕНИЯ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
Спермий имеет микроскопически малую величину. Общая длина спермия составляет 60--70 мкм. В единице объема, соразмерном яйцу млекопитающих, вмещается...
-
ВВЕДЕНИЕ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
В мошонке заключены два яичка. В тонких трубках внутри каждого яичка образуются сперматозоиды со скоростью 10-30 биллионов в месяц. Позади каждого яичка...
-
В условиях производственной обстановки ветеринарные специалисты ощущают острую необходимость в специальных вопросах, где были бы даны отправные сведения,...
-
Оператор по искусственному осеменению ведет учет осеменения, отелов коров и телок в журнале искусственного осеменения животных; заполняет второй...
-
Таблица 1 Размеры положительных АЧС выборок (количества страт и животных по видам), использованные в расчетах для определения диагностической...
-
При выборе метода получения спермы следует ориентироваться на такой, который отвечает следующим основным требованиям: - позволяет получать эякулят без...
-
Наиболее эффективная помощь при отравлениях может быть оказана животному, сели точно известны ядовитое начало, вызвавшее интоксикацию, и механизм его...
-
В практике ветеринарного врача довольно часто встречается такая патология, как острые экзогенные отравления. Клиника острых экзогенных отравлений...
-
САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА СВЕЖЕПОЛУЧЕННОЙ СПЕРМЫ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
Включает определение общего количества апатогенных бактерий в 1 мл, коли-титр, индикацию патогенных грибов, возбудителей инфекционных болезней (в случае...
-
Патогистологическая диагностика - Судебно-ветеринарная экспертиза трупа животного
В необходимых случаях наря-ду с патологоанатомической диагностикой осуществляют и пато-гистологическую. С этой целью можно рекомендовать исследова-ние...
-
ЕСТЕСТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ И ЕГО ТИПЫ - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Процесс оплодотворения - это процесс соединения (слияния) воедино женской (яйцеклетки) и мужской (спермия) половых клеток. Появление оплодотворения,...
-
При этом методе упрощается вся работа по подготовке и получению спермы, а самое главное, удается получать идеально чистую, стерильную сперму, обладающую...
-
Разработка способов искусственного осеменения коров и телок базируется на трех основных положениях: Во-первых: Крупный рогатый скот принадлежит к...
-
Программирование урожая с.-х. культур - разработка комплекса технологических приемов, обеспечивающего оптимизацию регулируемых факторов среды для...
-
Препараты ДДТ и гексахлорана применяются для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и накожными паразитами животных. Наибольшую...
-
Основная причина порчи рыбы - ферментативные процессы, ведущие к распаду тканей в результате глубокого автолиза, активной жизнедеятельности различной...
-
Из препаратов, содержащих мышьяк, наиболее опасными для сельскохозяйственных животных и птиц являются арсенит натрия, парижская зелень, протарс и...
-
Отравлением считают попадание ядов в организм. Обычно животные съедают яды, однако ряд отравлений возникает при вдыхании или попадании на кожу...
-
В сельском хозяйстве широко используются химические препараты для уничтожения сорной растительности, протравливания зерна, уничтожения клещей-паразитов и...
-
Неполноценное кормление нередко выражается в недостаточном ассортименте аминокислот в кормах. В рационе животных должны быть представлены все так...
-
Определение гумуса в почве - Изучение физико-химических свойств почв
Определение гумуса в почве вели по методике описанной в [24] Приготовили хромовую смесь, растворив 20г бихромата калия K2Cr2O7 в воде объемом 400 мл....
-
Правила получения спермы - Получение спермы посредством искусственной вагины
Получают сперму от производителей в условиях теплого, светлого, просторного манежа и идеальной чистоты. За 1,5 -- 2 ч до получения спермы в манеже и...
-
Контроль полноценности - Кормление сельскохозяйственных животных
Контроль полноценности кормления по ветеринарно-зоотехническим и биохимическим показателям является частью комплексной оценки питательности кормов....
-
Для обеспечения животных сухим, мягким и теплым ложем площадки полов клеток покрывают подстилкой, которую по мере ее загрязнения и увлажнения меняют....
-
Для предотвращения отравления сельскохозяйственных и диких животных, в том числе рыб, птиц, пчел, токсическими веществами, применяемыми для обработки...
-
Оплодотворение яйцеклеток происходит в яйцепроводе. Образовавшиеся зиготы подвергаются дроблению, и большинство из них у крупного рогатого скота попадают...
-
Химико-токсикологический анализ в ветеринарной токсикологии имеет решающее значение. При установлении диагноза на отравление, изучении миграции...
Определение концентрации спермиев хряка при помощи оптического стандарта - Ветеринарно-санитарная экспертиза спермы сельскохозяйственных животных