Определение концентрации спермиев в сперме производителей - Ветеринарно-санитарная экспертиза спермы сельскохозяйственных животных
Определение концентрации спермиев в счетной камере.
Концентрация спермиев в сперме -- это степень насыщенности спермы сперматозоидами. Она выражается количеством спермиев в 1 мл в миллиардах.
Определение концентрации спермиев в сперме складывается из: разбавления спермы в смесителе; подготовки счетной камеры; зарядки счетной камеры; подсчета спермиев; вычисления концентрации исследуемой спермы.
Разбавление спермы в меланже. Для определения концентрации спермиев необходимо разбавить сперму в строго определенное количество раз. Для спермы быка и барана применяют эритроцитарный смеситель (с красным шариком), а для спермы хряка и жеребца - лейкоцитарный (с белым шариком).
В меланжер набирают сперму до метки 0,5, а затем 3-ный раствор натрия хлорида до верхней метки. Эту работу необходимо выполнить очень точно. Зажимают большим и указательным пальцами оба конца меланжера и встряхивают его в течение 2-3 минут до полного перемешивания спермы с раствором.
Подготовка счетной камеры. Счетная камера с сеткой Горяева -- это толстое предметное стекло, поверхность которого бороздками разделена на три части. На среднем, окруженном бороздками поле, находится счетная сетка, площадь которой равна 9 мм2. Это поле разделено на 225 больших квадратов, из них 25 в свою очередь разделены на 16 малых квадратиков. Площадь каждого малого квадратика составляет 1/400 мм2.
Счетную камеру и покровное стекло протирают тампоном, смоченным в смеси спирта и эфира (поровну). Вытирают насухо марлевой салфеткой. Покрывают камеру покровным стеклом и притирают стекло к крайним пластинкам до появления радужных колец.
Зарядка счетной камеры. Из капилляра меланжера удаляют на сухой тампон первые 2-3 капли разбавленной спермы, 4-5-ую капли наносят на среднюю часть камеры у самого края притертого покровного стекла.
Подсчет спермиев. Камеру помещают на предметный столик микроскопа. Под малым увеличением находят сетку камеры, а затем переводят увеличение в 200-300 раз. Подсчет спермиев производят в 5-ти больших квадратах, которые разделены на маленькие. Считают в квадратах, расположенных по диагонали или по углам и в центре. Считают головки спермиев, расположенные внутри маленьких квадратов, и на верхней и левой линиях.
Вычисление концентрации спермиев. Концентрацию спермиев определяют по формуле:
С = (400 П. Д)/(N Р.1000000),
Где: С - концентрация спермиев;
П -- число подсчитанных спермиев;
Д -- степень разбавления;
N - число сосчитанных малых квадратов (80);
Р - глубина камеры (О, 1 мм); 400 - множитель, введен в формулу для пересчета в 1 мм, так как площадь малого квадрата равна 1/400 мм2.
Для точности определения концентрации спермиев рекомендуется заправлять обе сетки и при подсчете брать средний показатель. Расхождение результатов не должно превышать 10%. Если разница больше 10%, подсчет повторяют третий раз и берут среднее из двух подсчетов, расходящихся не более чем на 10%.
Определение концентрации спермиев на фотоэлектроколориметре ФЭК-М.
Метод определения концентрации спермиев при помощи ФЭК-М основан на способности спермы ослаблять пропускаемый через нее пучок света пропорционально концентрации спермиев, то есть чем выше концентрация спермиев, тем больше ослабляется проходящий пучок света. Величина ослабления светового пучка регистрируется чувствительными фотоэлементами.
Определение концентрации на ФЭК-М начинают спустя 15-20 минут после включения лампы и засветки фотоэлементов. Для повышения точности исследований рукояткой устанавливают красные светофильтры. Левый отсчетный барабан рукояткой выставляют на "О" по красной шкале (шкала оптической плотности).
Во флакон наливают 10 мл 3,5%-ного раствора натрия лимоннокислого вносят в него 0,1 мл спермы быка (сперма разбавляется в соотношении 1:100). Сперму барана разбавляют в соотношении 1: 400, то есть берут 10 мл 3,5%-ного раствора натрия лимоннокислого и 0,025 мл спермы. Сперму хряка разбавляют в соотношении 1: 30, то есть к 12 мл 3,5%-ного раствора натрия лимоннокислого добавляют 0,4 мл спермы, которая предварительно должна быть профильтрована через 2 слоя капроновой ткани для отделения студенистого секрета.
Перед внесением пробы спермы в раствор микропипетку необходимо снаружи вытереть чистой марлевой салфеткой. После внесения спермы в раствор микропипетку надо 2-3 раза прополоскать в этом же растворе путем насасывания и выдувания. Температура 3,5%-ного раствора натрия лимоннокислого должна быть в пределах 18-25 оС.
После разбавления сперму тщательно перемешивают и наливают в кювету с рабочей длиной 10 мл до метки и быстро определяют оптическую плотность. Для этого на путь прохождения пучка света ставят в левый кюветодержатель чистую кювету с рабочей длиной 10 мм, наполненную 3,5%-ч раствором натрия лимоннокислого, а в правый кюветодержатель - 2 такие-к же кюветы: одну с разбавленной спермой, другую с 3,5%-ным раствором натрия лимоннокислого. При этом кювету с разбавленной спермой устанавливают на пути прохождения пучка света (как и в левом кюветодержателе), а кювету с раствором в запасное гнездо этого же кюветодержателя. Кюветы необходимо устанавливать перпендикулярно к пучку света.
Закрывают крышку прибора и включают гальванометр рукояткой сначала на грубую чувствительность в положение "1". Рукояткой нейтральных клиньев подводят стрелку гальванометра к "0", затем включают гальванометр на высокую чувствительность, в положение "2" и точно устанавливают стрелку на "0". Затем гальванометр сразу же переводят на грубую чувствительность в положение "1". Меняют в правом кюветодержателе местами кюветы так, чтобы на пути прохождения света стала кювета с 3,5%-ным раствором натрия лимоннокислого. Это достигается путем поворота кюветодержателя вокруг оси.
Опустив крышку прибора, опять включают гальванометр сначала на грубую чувствительность (не трогая ручку нейтральных клиньев) рукояткой барабана подводят отклонившуюся стрелку гальванометра на "0". Включают гальванометр на высокую чувствительность, точно устанавливают стрелку на "0", Рукоятку гальванометра переводят в положение "0".
Отсчет берут по красной шкале левого барабана и смотрят, какой величине концентрации он соответствует на калибровочной кривой, которую выводят заранее.
Построение калибровочной кривой. Для определения концентрации спермиев на ФЭК-М необходимо предварительно построить калибровочную кривую, изображающую зависимость оптической плотности от концентрации змиев.
Для построения калибровочной кривой из свежевзятых эякулятов выбирают несколько таких, в которых концентрация спермиев наиболее высокая. Тщательно определяют концентрацию спермиев в счетной камере.
Из отобранных эякулятов путем разбавления их 3,5%-ным раствором лимоннокислого натрия 1: 1, 1: 2, 1: 3 и т. д. готовят ряд образцов спермы и определяют концентрацию спермиев в каждом из них в счетной камере.
Определяют величину оптической плотности каждого образца на приборе, как описано в предыдущей методике. Зная фактическую концентрацию спермиев, установленную в счетной камере, строят калибровочную кривую. Для этого на миллиметровой бумаге откладывают: по горизонтальной оси - известные концентрации спермиев каждого образца, по вертикальной оси - соответствующие им величины оптической плотности. В местах пересечения перпендикуляров ставят точки, калибровочную кривую проводят так, чтобы она прошла через большинство указанных точек, а число точек, лежащих выше или ниже калибровочной кривой, было примерно одинаковым.
Кривая не должна быть сильно изогнутой или изломанной.
Имея калибровочную кривую, можно легко определить неизвестную концентрацию спермиев любого эякулята. Для этого нужно лишь установить его оптическую плотность на приборе, как указано выше и посмотреть какой причине концентрации она соответствует на калибровочной кривой. При этом следует строго соблюдать все условия исследования, при которых выведена и калибровочная кривая. Надо применять ту же кратность разбавления спермы, использовать кюветы той же рабочей длины, те же светофильтры и тот же способ отсчета величин оптической плотности.
Калибровочную кривую следует ежемесячно проверять, так как показания прибора могут изменяться.
Точность электрофотометрического метода определения концентрации спермиев и источник ошибок. По точности электрофотометрический метода определения концентрации спермиев почти не уступает методу определения в счетных камерах. Величина ошибки колеблется в пределах 6%.
Эта величина ошибки обусловлена в основном влиянием плазмы спермы и неточностью взятия проб. Влияние пигментации плазмы на точность результатов исследования ослабляется применением красных монохроматических светофильтров.
Похожие статьи
-
Подвижность спермиев (активность) -- это способность их к прямолинейно-поступательному движению (ППД). Оценку на подвижность проводят в раздавленной...
-
В пустую пробирку вносят 1,0 мл 1%-ного раствора натрия хлорида. Микропипеткой набирают 0,1 мл свежеполученной профильтрованной спермы. Конец пипетки...
-
В настоящее время в сельском хозяйстве для разведения сельскохозяйственных животных активно применяется на практике метод искусственного осеменения...
-
Оценка качества эякулята - Ветеринарно-санитарная экспертиза спермы сельскохозяйственных животных
Оценка качества эякулята по внешним показателям. Взятый эякулят подвергают макроскопической оценке. Сперму оценивают визуально по объему, цвету,...
-
Проведение ветеринарно-санитарного контроля качества спермы дает нам следующие возможности: Определение репродуктивных способностей производителя;...
-
Исследование коли-титра спермы Коли-титр определяют для санитарной оценки спермы. Санитарно-показательными бактериями считают все разновидности кишечной...
-
Метод основан на том, что в результате метаболических процессов образуется перекись водорода; при помощи дегидрогеназ водород переносится на метиленовую...
-
При работе со спермой (как свежеполученной, так и сохраняемой) необходимо учитывать влияние на спермиев таких внешних факторов, как температура, свет,...
-
Хранение и оттаивание спермы - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
При работе с семенем (спермой) следует помнить, что на жизнеспособность спермиев влияют следующие факторы: - свет - солнечные лучи убивают спермиев,...
-
При выборе метода получения спермы следует ориентироваться на такой, который отвечает следующим основным требованиям: - позволяет получать эякулят без...
-
Качество спермы - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Успех осеменения зависит также от качества спермиев. Чем активнее их движение, тем меньшую дозу спермы можно применять. До недавнего времени при всех...
-
ВЛИЯНИЕ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ И МЕДИКАМЕНТОВ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
Большинство химических соединений для спермиев токсичны. Из неорганических веществ особенно ядовиты соли и окислы тяжелых металлов (ртуть, свинец),...
-
СПЕРМИИ ИХ СТРОЕНИЕ, ВИДЫ И СКОРОСТЬ ДВИЖЕНИЯ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
Спермий имеет микроскопически малую величину. Общая длина спермия составляет 60--70 мкм. В единице объема, соразмерном яйцу млекопитающих, вмещается...
-
ВВЕДЕНИЕ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
В мошонке заключены два яичка. В тонких трубках внутри каждого яичка образуются сперматозоиды со скоростью 10-30 биллионов в месяц. Позади каждого яичка...
-
Оценка спермы по подвижности - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Для проверки качества спермы необходимо использовать подогретые предметные и покровные стекла, находящиеся во время работы на обогреваемом столике...
-
САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА СВЕЖЕПОЛУЧЕННОЙ СПЕРМЫ - Сперма сельскохозяйственных животных и ее свойства
Включает определение общего количества апатогенных бактерий в 1 мл, коли-титр, индикацию патогенных грибов, возбудителей инфекционных болезней (в случае...
-
Сперма представляет собой смесь спермиев (половых клеток) и секретов придаточных половых желез. Функция спермиев - оплодотворить яйцеклетку, функции...
-
При организации искусственного осеменения коров и телок руководствуются "Ветеринарно-санитарными правилами при воспроизводстве сельскохозяйственных...
-
Техника искусственного осеменения овец - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Овцы относятся к животным с влагалищным типом осеменения, у которых сперма при естественном осеменении изливается во влагалище, как можно ближе к...
-
ЕСТЕСТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ И ЕГО ТИПЫ - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Процесс оплодотворения - это процесс соединения (слияния) воедино женской (яйцеклетки) и мужской (спермия) половых клеток. Появление оплодотворения,...
-
Нормированное кормление производителей различных видов - Кормление сельскохозяйственных животных
Быки - производители Полноценное кормление быков в сочетании с правильным содержанием и режимом использования обеспечивает хорошее их состояние, высокую...
-
Строение и функции половых органов самцов - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
К половым органов самцов относятся: мошонка, семенники, придатки семенника, семенной канатик, спермопроводы, мочеполовой канал, придаточные половые...
-
ТУБЕРКУЛЕЗ - Выявление и лечение туберкулеза сельскохозяйственных животных
Tuberculosis Определение . Тяжело, хронически протекающая инфекционная болезнь животных многих видов и человека, которая проявляется поражением легких,...
-
При этом методе упрощается вся работа по подготовке и получению спермы, а самое главное, удается получать идеально чистую, стерильную сперму, обладающую...
-
Метод искусственной вагины - Методы получения спермы у самцов животных
На пунктах искусственного осеменения содержат специально выделенных здоровых самок, которых регулярно проверяют на заразные заболевания, или используют...
-
Искусственное осеменение, его становление и развитие Первыми опытами по искусственному осеменению можно считать работы итальянца Лазаро Спалланцани...
-
Визоцервикальный способ осеменения - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Способ получил название по греческим словам: "визо" - смотрю и "цервикс" - шейка. Иными словами - осеменение с визуальным контролем локализации шейки...
-
Для предотвращения отравления сельскохозяйственных и диких животных, в том числе рыб, птиц, пчел, токсическими веществами, применяемыми для обработки...
-
Разработка системы оплодотворения и обеспечения ранних стадий развития эмбрионов млекопитающих вне организма животного (in vitro) имеет огромное значение...
-
Правила получения спермы - Получение спермы посредством искусственной вагины
Получают сперму от производителей в условиях теплого, светлого, просторного манежа и идеальной чистоты. За 1,5 -- 2 ч до получения спермы в манеже и...
-
Результаты суперовуляции определяются эффективным осеменением коров-доноров. Проблема оплодотворения яйцеклеток и получения биологически полноценных...
-
Профилактика, Ветеринарно-санитарная экспертиза - Отравление поваренной солью у свиней
Профилактика заключается в постоянном контроле за обеспечением животных поваренной солью, чтобы не допустить солевого голодания. При скармливании свиньям...
-
Оплодотворение и раннее развитие эмбрионов - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Оплодотворение - слияние половой клетки самца (спермия) со половой клеткой самки (яйцеклеткой) у сельскохозяйственных животных происходит в яйцеводах....
-
Таблица 1 Размеры положительных АЧС выборок (количества страт и животных по видам), использованные в расчетах для определения диагностической...
-
Химико-токсикологический анализ в ветеринарной токсикологии имеет решающее значение. При установлении диагноза на отравление, изучении миграции...
-
Оплодотворение яйцеклеток происходит в яйцепроводе. Образовавшиеся зиготы подвергаются дроблению, и большинство из них у крупного рогатого скота попадают...
-
Ректоцервикальный способ осеменения - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Способ получил название по греческим словам: "ректа" - прямая кишка и "цервикс" - шейка. Иными словами - осеменение с контролем локализации шейки матки...
-
Бешенство (лат. - Lyssa; англ. - Rabies; водобоязнь, гидрофобия) - особо опасная острая зооантропонозная болезнь теплокровных животных всех видов и...
-
Маноцервикальный способ осеменения - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Название способ получил по греческим словам: "мано" - рука и "цервикс" - шейка. Иными словами - осеменение в канал шейки матки c одновременным контролем...
-
Эпицервикальный способ осеменения - Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных
Название способ получил по греческим словам "эпи" - около и "цервикс" - шейка. Иными словами - введение спермы как можно ближе к каналу шейки матки....
Определение концентрации спермиев в сперме производителей - Ветеринарно-санитарная экспертиза спермы сельскохозяйственных животных