Методы культивирования вирусов. - Герперовирусная инфекция у животных
Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий -- облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах.
Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.
Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например, в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.
Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование invitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.
Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться invitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.
К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.
О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.
Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты -- реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты. герперовирус собака инфекция профилактика
Другой метод -- реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.
Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6--7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.
Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.
Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям.
Для получения чистых культур риккетсий ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8--12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках.
О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.
К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очиску риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.
Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки -- к вирусам Коксаки).
Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.
Можно также получать материал из очагов поражения для исследования ДНК возбудителя методами амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР и ЛЦР). Эти новые тесты быстры и точны, и могут служить для дифференциального диагноза ВПГ-1 или ВПГ-2. Тем более что эти методы дают минимальное число ложноотрицательных результатов. Поэтому использование полимеразной цепной реакции (ПЦР) -- самое предпочтительное в диагностике.
Похожие статьи
-
Клинико-эпизоотологическая или до-лабораторная диагностика - проводится в хозяйствах и позволяет поставить лишь предварительный диагноз, проводится...
-
Принцип постановки ПЦР - Герперовирусная инфекция у животных
ПЦР является наиболее чувствительным методом. Реакция обнаруживает вирусные НК. Реакция открыта в 1985 году в США. Сутью метода является амплификация, т....
-
ЭТИОЛОГИЯ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ - Герперовирусная инфекция у животных
Геном вируса простого герпеса представлен линейной двухцепочечной ДНК (молекулярная масса 100 млн), кодирующей более 70 вирусных белков. Строение...
-
ЛЕЧЕНИЕ И МЕРЫ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕРПЕСА СОБАК, О вакцинации - Герперовирусная инфекция у животных
После того как собака заразилась вирусом герпеса, она никогда не сможет полностью от него избавиться. Большинство инфицированных собак при первоначальном...
-
Диагностирование по симптомам Проявляющиеся симптомы герпеса могут значительно варьировать у разных больных. Если у пациента проявляются признаки...
-
Синцитиальный метод при ранней идентификации вируса лейкоза крупного рогатого скота
Лейкоз крупного рогатого скота - злокачественное вирусное лимфопролиферативное заболевание. Ретровирус, относящийся к семейству Retroviridae, роду...
-
Обычно удается рассмотреть вирионы вирусов и установить их структуру с помощью электронной микроскопии, позволяющей различать объекты размерами до...
-
Противовирусная санитарная обработка - Герперовирусная инфекция у животных
Герпес не такой жесткий вирус, как парвовирус. Вирус собачьего герпеса быстро убивается самыми распространенными дезинфицирующими средствами домашнего...
-
ОПИСАНИЕ ГЕРПЕРОВИРУСА, Возбудитель герпетической инфекции - Герперовирусная инфекция у животных
Возбудитель герпетической инфекции Герпетическая инфекция - группа заболеваний, поражающая все органы и системы, вызываемая вирусом герпеса. Вирус...
-
Используют КЭ в вирусологии в основном для тех же целей, что и ЛЖ: обнаружения в патматериале активного вируса биопробой; первичного выделения вируса;...
-
Химико-токсикологический анализ в ветеринарной токсикологии имеет решающее значение. При установлении диагноза на отравление, изучении миграции...
-
ВЛКРС агглютинирует только эритроциты мышей. Максимальная ГА наблюдается при рН 6 и температуре 4°С. После обработки вируса тритоном Х100 или...
-
КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ ГЕРПЕСА СОБАК - Герперовирусная инфекция у животных
Герпесвирусная инфекция у собак беспощадно убивает инфицированных новорожденных щенков. Как правило, щенкам до 2 недель диагноз не ставится, точнее,...
-
В первый период - люди не знали сущности заболевания, только описывали его. В 18 столетии врач Дженер разработал против оспы вакцину, с помощью которой...
-
Многие лекарственные препараты в терапевтических дозировках обладают побочным действием -- вызывают аллергические реакции, поражают отдельные органы. В...
-
СИМПТОМАТИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ, Методы терапии - Внутренние болезни животных
Сущность ее заключается в использовании средств терапии, направленных на ликвидацию или ослабление наиболее угрожающих для жизни животного симптомов...
-
При этом методе упрощается вся работа по подготовке и получению спермы, а самое главное, удается получать идеально чистую, стерильную сперму, обладающую...
-
Лабораторные животные, цели и методы их использования в вирусологии - Ветеринарная вирусология
В связи с тем, что вирусы могут размножаться только в живых клетках, на самых ранних этапах развития вирусологии широко применяли культивирование вирусов...
-
Основное преимущество клонального микроразмножения - получение генетически однородного, безвирусного посадочного материала. Предположение о возможности...
-
Схема лабораторной диагностики вирусных инфекций - Ветеринарная вирусология
Лабораторная диагностика - это система мер по обнаружению, индикации вируса. В нее входят: получение посланного патологического материла, исследование...
-
Для предотвращения отравления сельскохозяйственных и диких животных, в том числе рыб, птиц, пчел, токсическими веществами, применяемыми для обработки...
-
Методы сравнительной оценки быка-производителя по потомству зависят от места проведения, условий, в которых проводят оценку, а также от общей...
-
Методы введения лекарственных средств - Внутренние болезни животных
Всякое вмешательство ветеринарного врача, в целях оказания лечебной помощи больному животному, должно проводиться в обстановке, обеспечивающей больного...
-
В условиях производственной обстановки ветеринарные специалисты ощущают острую необходимость в специальных вопросах, где были бы даны отправные сведения,...
-
Искусственное осеменение, его становление и развитие Первыми опытами по искусственному осеменению можно считать работы итальянца Лазаро Спалланцани...
-
Метод массажа, Метод мастурбации - Методы получения спермы у самцов животных
Применяют у очень ценных быков, в случае когда они не могут делать садку вследствие того или иного заболевания. Для получения спермы вводят руку после...
-
Возбудители и источники бактериальных инфекций, Туберкулез - Лечение туберкулеза у животных
Туберкулез Туберкулез - инфекционная, преимущественно хроническая болезнь многих видов сельскохозяйственных животных и птицы, характеризующаяся...
-
Иммунитет и защита - Бешенство у животных
Одним из основных и эффективных способов предотвращения бешенства является своевременная и эффективная иммунопрофилактика, основанная на использовании...
-
В природе существует два способа размножения растений: половой (семенной) и вегетативный. Оба эти способа имеют как свои преимущества, так и недостатки....
-
Способы выявления половой охоты овец Наиболее точным признаком готовности самки к спариванию и оптимальным сроком осеменения является период половой...
-
Способы выявления половой охоты свиней Наиболее точным признаком готовности самки к спариванию и оптимальным сроком осеменения является период половой...
-
См вопрос №8 Патогенез вирусных инфекций Тропизм - склонность вируса к тому или иному вороту инфекции. При респираторных инфекциях - вирус локализуется в...
-
Взвешивание животных является неотъемлемым элементом производственного цикла птичника. Взвешивание проводится один раз в неделю торсионными или ручными...
-
Метод искусственной вагины - Методы получения спермы у самцов животных
На пунктах искусственного осеменения содержат специально выделенных здоровых самок, которых регулярно проверяют на заразные заболевания, или используют...
-
Применяют следующие методы консервации вирусов: 1. при хранении вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50%-ный...
-
Навоз является главным поставщиком необходимых для роста растений минеральных веществ, микроэлементов, источником увеличения содержания в почве гумуса....
-
Рефлексологический метод диагностики беременности и бесплодия позволяет диагностировать начальные стадии беременности у взрослых животных с точностью до...
-
Пневмоторакс - Диагностика, методы терапии и профилактика гидроторакса и пневмоторакса у животных
-- скопление воздуха или газа в плевральной полости. Заболевание встречается у животных всех видов. Различают пневмоторакс односторонний и двусторонний,...
-
-- накопление транссудата в плевральной полости. Как самостоятельное заболевание регистрируют сравнительно редко, преимущественно у собак и лошадей. В...
-
Разработка системы оплодотворения и обеспечения ранних стадий развития эмбрионов млекопитающих вне организма животного (in vitro) имеет огромное значение...
Методы культивирования вирусов. - Герперовирусная инфекция у животных