Методика окрашивания корней, Методика оценки колонизации арбускулярной микоризы растения, Статистическая обработка результатов - Влияние эндофитных бактерии Bacillus subtilis на микоризацию растений при имитации почвенной засухи

Окрашивание корней производилось по следующему методу [Trouvelot, Kough, Gianinazzi-Pearson, 1986, с. 217-221]:

    1. Отбирали корни 10-20 шт. с одного образца. 2. Промывали под проточной водой (при помощи сита), помещали в марлевые мешочки. 3. Раствор 10% КОН доводили до кипения, выключали плитку, помещали марлевые мешочки с образцами в этот раствор на 10 мин. Покоричневение раствора свидетельствовало о процессе очистки. 4. Промывали водой 4-5 раз. 5. Большинство гистологических красителей являются кислыми, поэтому подкисляли корни 2% НСl в течение 15-20 мин. 6. Готовили краситель трепановый синий и добавляли в приготовленный раствор (вода, глицерин, молочная кислота в соотношении 1:1:1 по объему). Нагревали его до кипения, выключали плитку, помещали образцы на 3-4 мин. 7. Промыли 4-5 раз водой. Краситель используется несколько раз. 8. Образцы хранили при температуре 4°С в воде.
Методика оценки колонизации арбускулярной микоризы растения

Окрашенные корни помещали в чашку Петри и рассматривали корни под микроскопом. Оценку колонизации микоризы и распространенности арбускул проводили согласно [Trouvelot, Kough, Gianinazzi-Pearson, 1986, с. 220]. 1. Из образца корней на 2 предметных стекла вырезали по 15 фрагментов корней в 1 см. длиной. 2. Эти фрагменты рассматривали под микроскопом, и оценивали колонизацию микоризы по рис. 1 3. Результаты записывались в "Шахматку" расчета (рис. 2): 4. Далее вычисляли при помощи компьютерной программы "Mycocalc" следующие параметры: F%, M%, m%, A%, a% , согласно Trouvelot. 1986 год. F% - Частота микоризы в корневой системе F% = (NB фрагментов мико / общая NB) ? 100 M% - Интенсивность колонизации микоризы в корневой системе M% = (95n5 70 N4 30 n3 5 n2 + n1) / (NB общее) где N5 = число фрагментов оценили 5; N4 = число фрагментов 4 т. д. m% - Интенсивность колонизации микоризы в корневом фрагменте m% = M ? (NB общее) / (NB мико) а% - Изобилие арбускул в микоризованной части корневого фрагмента а% = (100mA3 50 mA2 10 mA1) / 100 где mA3, mA2, которые mA1% м, номинальная A3, A2, A1, соответственно, с mA3 = ((95n5A3 70 n4A3 30 n3A3 5 n2A3 + n1A3) / NB мико) ? 100 / м и тот же для А2 и A1. А% - Изобилие арбускул в корневой системе А% = а ? (M/100) V% - Изобилие везикул в корневой системе V% = а ? (M/100) V% - Изобилие везикул в микоризованной части корневого фрагмента V% = (100mA3 50 mA2 10 mA1) / 100

оценка колонизации микоризы и распространенности арбускул согласно [trouvelot, kough, gianinazzi-pearson,1986, с. 217-221]

Рис. 2.1. Оценка колонизации микоризы и распространенности арбускул согласно [Trouvelot, Kough, Gianinazzi-Pearson,1986, с. 217-221].

шахматка расчета по методике [там же. с. 220]

Рис.2.2 Шахматка расчета по методике [Там же. С. 220].

Статистическая обработка результатов

Эксперимент проводили три раза, в трех биологических повторностях. Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами с использованием Microsoft Excel. Для определения зависимости биологических показателей между собой и от влияния почвенной засухи и бактерий использовали многофакторный дисперсионный анализ. В таблицах приведены средние значения и их стандартные отклонения.

Похожие статьи




Методика окрашивания корней, Методика оценки колонизации арбускулярной микоризы растения, Статистическая обработка результатов - Влияние эндофитных бактерии Bacillus subtilis на микоризацию растений при имитации почвенной засухи

Предыдущая | Следующая