Люминесцентная микроскопия. Основы иммунофлюоресценции, Вирус бешенства, его свойства. Патогенность. Принципы диагностики - Ветеринарная вирусология
В основе метода лежит явление люминесценции, сущность которого в том, что поглощая различные виды энергии (световую, электрическую) атомы некоторых веществ переходят в возбужденное состояние, а затем, возвращаясь в исходное состояние, выделяют поглощенную энергию в виде светового излучения. Люминесценция наблюдается в виде флуоресценции - свечение, возникающее в момент облучения возбуждающим светом и прекращающееся сразу после его окончания. Фосфоресценция - свечение продолжающееся длительное время и по окончании процесса возбуждения.
Вирус бешенства, его свойства. Патогенность. Принципы диагностики
Бешенство - острая инфекционная болезнь, протекающая с тяжелым поражением НС, как правило, с летальным исходом. Восприимчивы человек и все млекопитающие животные. Бешенство распространено повсеместно. Возбудителя передают собаки, кошки, дикие грызуны и хищники, а также кровососущие летучие мыши-вампиры. Продолжительность инкубационного периода зависит от места, силы укуса, количества и вирулентности попавшего в рану вируса, резистентности покусанного животного. Инкубационный период длится от 1-3 недель до года и более. Болезнь протекает остро. Клинические признаки при атипичном течение - потеря аппетита, атония рубца, паралич глотки, слюнотечение. Также может быть буйное и тихое течение болезни. Вирус бешенства (ВБ) обладает выраженной нейропробазией. Проникая с периферии по нервным стволам в центральную НС центростремительно, он распространяется в организме центробежно по периферическим нервам и попадает в разные органы, включая слюнные железы.
Вирус относится к семейству Rhabdoviridae, родуLyssavirus. Вирионы имеют форму стержня с обрубленным концом. Вирион вируса - РНК-содержащий со спиральным типом симметрии, имеет липопротеидную оболочку. Низкие температуры консервируют вирус. Вирион ВБ содержит гликопротеидный и нуклеокапсидный АГ. Первый индуцирует образование вируснейтрализующих АТ, а второй - комплементсвязывающих и преципитирующих АТ. В организме вирус локализуется главным образом в ЦНС, в слюнных железах, слюне. Культивируется на мышах, кроликах, морских свинках, в первичных культурах клеток. Размножение вируса в КК не всегда проявляется ЦПД. Источников инфекции являются больные животные. Они передают вирус во время укуса. Диагноз на бешенство ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и результатов лабораторных исследований, имеющих решающее значение. Для исследования направляют в лабораторию свежие трупы мелких животных целиком, а от крупных и средних животных - голову с 2 шейными позвонками. Трупы мелких животных перед отправкой на исследование обрабатывают инсектицидами. Лабораторная диагностика включает: обнаружение вирусного АГ в РИФ и РДП, телец Бабеша-Негри и биопробы на белых мышатах. РИФ - для данной реакции биопромышленность выпускает флуоресцирующий антирабический гамма-глобулин. Принцип - 1)Делают отпечатки или мазки из различных отделов ГМ левой и правой стороны на предметных стеклах (не менее 2 препаратов из каждого отдела); 2)Их высушивают, фиксируют в охлажденном ацетоне; 3)Высушивают, наносят флуоресцирующий гамма-глобулин; 4)Помещают во влажную камеру; 5)Тщательно промываю ИХН, споласкивают водой, высушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают под люминесцентным микроскопом. В препаратах, содержащих АГ ВБ, наблюдаются разной величины и формы флуоресцирующие желто-зеленым цветом гранулы в нейронах, но чаще вне клеток. РДП - 1)Наливают на предметные стекла агаровый гель 2)Делают лунки (Д=4-5 мм); 3)Лунки заполняют пастообразной массой из отделов ГМ. 4)Контроли с "+" и "-" АГ ставят на отдельном стекле по тому же трафарету; 5)После заполнения лунок препараты помещают во влажную камеру и ставят в термостат при 37С на 6 часов, затем при комнатной температуре на 18 часов. Реакцию считают положительной при появлении одной или 2-3 линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический гамма-глобулин. ВЫЯВЛЕНИЕ ТЕЛЕЦ - на предметных стеклах делают тонкие мазки или отпечатки из всех отделов ГМ и окрашивают по Селлерсу или Муромцеву или Манну или Ленцу. БИОПРОБА - отбирают белых мышей (16-20 грамм), нервную ткань из всех отделов ГМ растирают в ступке со стерильным песком, добавляют ИХН до 10-% суспензии, отстаивают 30-40 минут и для заражения используют надосадочную жидкость для заражения мышат. Заражают 10-12 шт: половину интрацеребрально по 0,03 мл, половину подкожно в область носика или в верхнюю губу по 0,1-0,2 мл. Наблюдают 30 дней. При наличии ВБ в патматериале с 7-10 дня после заражения у мышей наблюдают симптомы: взъерошенность шерсти, своеобразную горбатость спины, нарушение координации движений, паралич задних, затем передних конечностей и гибель. У павших мышей ГМ исследуют в РИФ на обнаружение телец Бабеша-Негри и ставят РДП. Биопробу на бешенство считают положительно, если в препаратах из мозга зараженных мышат обнаруживают тельца Бабеша-Негри или выявляют АГ методами РИФ или РДП. Отрицательный диагноз - отсутствие гибели мышат в течение 30 дней.
Похожие статьи
-
Биологическая характеристика вируса ящура. Принцип диагностики - Ветеринарная вирусология
Ящур - остро протекающая высококонтагиозная болезнь парнокопытных, проявляющаяся лихорадкой, везикулярным поражением слизистых оболочек рта, кожи венчика...
-
Ретроспективная диагностика - преследует цель обнаружить динамику прироста АТ, основана на исследовании парных сывороток, которые берут дважды, в начале...
-
Для заражения отбирают пробирки (матрасы) со сплошным клеточным монослоем, просматривая их под малым увеличением микроскопа. Ростовую питательную среду...
-
Смотри вопрос №7 Общие принципы серологических реакций и их использование в диагностике вирусных болезней В целях определения вида данного вируса при...
-
Клинико-эпизоотологическая или до-лабораторная диагностика - проводится в хозяйствах и позволяет поставить лишь предварительный диагноз, проводится...
-
Патологоанатомические признаки - Бешенство у животных
Предварительный диагноз ставят с учетом эпизоотологических и клинических показателей. Принимают во внимание характер эпизоотической ситуации в данной...
-
Лабораторные животные, цели и методы их использования в вирусологии - Ветеринарная вирусология
В связи с тем, что вирусы могут размножаться только в живых клетках, на самых ранних этапах развития вирусологии широко применяли культивирование вирусов...
-
Материал для исследований от заболевших, павших или вынужденно убитых животных следует брать как можно быстрее после появления четких признаков болезни...
-
Обычно удается рассмотреть вирионы вирусов и установить их структуру с помощью электронной микроскопии, позволяющей различать объекты размерами до...
-
Бактериофаги, их значение и основные свойства - Ветеринарная вирусология
Бактериофаги (от. Лат. Bacteriophaga) - разрушающий бактерии. Это вирусы, обладающие способностью проникать в бактериальные клетки репродуцироваться в...
-
РСК. Иммунологическая основа и характеристика компонентов реакции - Ветеринарная вирусология
Реакция связывания комплемента (РСК) -- одна из традиционных серологических реакций, применяемых для диагностики многих вирусных болезней. Само название...
-
В период практики на базе клиники применялись следующие группы препаратов: 1. Противопаразитарные средства: Ь Гельминтал Ь Мибельмакс Ь Пиро-стоп...
-
Титр - это количество вируса, содержащегося в единице объема материала. Из локальных повреждений, вызываемых вирусами, наиболее известны бляшки и оспины...
-
Разные группы вирусов обладают неодинаковой устойчивостью во внешней среде. Наименее устойчивы вирусы, имеющие липопротеидные оболочки, наиболее...
-
Принципы современной классификации вирусов, основные группы вирусов - Ветеринарная вирусология
Современная классификация вирусов универсальна для вирусов позвоночных, беспозвоночных, растений и простейших. Она основана на фундаментальных свойствах...
-
ПТКК - клетки, полученные непосредственно из органов или тканей организма, растущие invitroв один слой. КК можно получить практически из любого органа...
-
РДП в геле основана на способности к диффузии в гелях АТ и растворимых АГ и отсутствие такой способности у комплекса "АГ+АТ". Этот комплекс образуется...
-
Живые противовирусные вакцины представляют собой лиофилизированные взвеси вакцинных штаммов вирусов, выращенных в различных биологических системах (КЭ,...
-
Схема лабораторной диагностики вирусных инфекций - Ветеринарная вирусология
Лабораторная диагностика - это система мер по обнаружению, индикации вируса. В нее входят: получение посланного патологического материла, исследование...
-
Синцитиальный метод при ранней идентификации вируса лейкоза крупного рогатого скота
Лейкоз крупного рогатого скота - злокачественное вирусное лимфопролиферативное заболевание. Ретровирус, относящийся к семейству Retroviridae, роду...
-
Иммунитет и защита - Бешенство у животных
Одним из основных и эффективных способов предотвращения бешенства является своевременная и эффективная иммунопрофилактика, основанная на использовании...
-
Представляют собой чрезвычайно разнородный класс биологических макромолекул. Обязательными компонентами белков являются АК. Альфа-АК - это сравнительно...
-
Коронавирус размножается в чувствительных к нему первичных и перевиваемых культурах клеток с выраженным ЦПД (цитопатическием действием) на 3-7 сутки....
-
Типы взаимодействия, основные исходы взаимодействия вируса с клеткой - Ветеринарная вирусология
1)Продуктивное взаимодействие - когда вирусы размножаясь в клетке образуют новое поколение 2)Абортивное - когда циклы репродукции прерывается на какой...
-
Транскрипция - переписывание ДНК на РНК - осуществляется с помощью фермента РНК-полимеразы, продуктами является биосинтез и-РНК. ДНК-содержащие вирусы,...
-
Пассивная специфическая профилактика вирусных болезней. Принцип получения - Ветеринарная вирусология
Препараты для пассивной ИП - для парентерального и перорального введения АТ или Ig. С целью проведения ИП применяют иммунные, гипериммунные сыворотки,...
-
Периоды и этапы репродукции вирусов. Типы взаимодействия - Ветеринарная вирусология
Взаимодействие вирусов с клетками хозяев и репродукция вирусов. Вирусы проходят в клетке сложный цикл развития. Морфогенез вирусов представляет собой...
-
Применяют следующие методы консервации вирусов: 1. при хранении вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50%-ный...
-
Используют КЭ в вирусологии в основном для тех же целей, что и ЛЖ: обнаружения в патматериале активного вируса биопробой; первичного выделения вируса;...
-
Вирусология - наука изучающая природу и происхождение вирусов, заболевания ими вызываемые. Общая вирусология изучает природу и происхождение вирусов,...
-
Молекулы вирусных ДНК могут быть линейными или кольцевыми, двухцепочечными или одноцепочечными по всей своей длине или же одно цепочечными только на...
-
См вопрос №8 Патогенез вирусных инфекций Тропизм - склонность вируса к тому или иному вороту инфекции. При респираторных инфекциях - вирус локализуется в...
-
Инактивированные вакцины - сложные по составу препараты. Производство их требует большого количества вируса. Основное требование, предъявляемое к убитым...
-
В первый период - люди не знали сущности заболевания, только описывали его. В 18 столетии врач Дженер разработал против оспы вакцину, с помощью которой...
-
Профилактика и меры борьбы - Бешенство у животных
Санитарные правила СП 3.1. 096-96. Ветеринарные правила ВП 13.3. 1103-96. Руководители животноводческих хозяйств, предприятий, учреждений, организаций и...
-
Возбудитель болезни - Бешенство у животных
Вирус, относящийся к роду Lissavarius семейства Rabdoviridae. Длина вирионов, имеющих пулевидную форму, около 180 нм, диаметр 75--80 нм. Вирус...
-
Правила взятия и пересылки материала для вирусологического исследования - Ветеринарная микробиология
Для вирусологических исследований желательно направлять пробы от животных в трех стадиях болезни: - от свежих трупов (кровь, кость, лимфоузел и...
-
Патологоанатомические изменения, Диагностика - Отравление поваренной солью у свиней
Морфологические изменения при солевом отравлении имеют много общего у животных разных видов. У свиней отмечают изменения в головном мозге (эозинофильный...
-
Профилактика и меры борьбы - Диагностика и профилактика лептоспироза
В целях недопущения возникновения лептоспироза ввод животных для племенных и пользовательных целей разрешается только из благополучных хозяйств, при...
-
Убедитесь, что все поступающие кошки полностью вакцинированы. Расселите кошек по отдельности, если только они не принадлежат одному владельцу. Между...
Люминесцентная микроскопия. Основы иммунофлюоресценции, Вирус бешенства, его свойства. Патогенность. Принципы диагностики - Ветеринарная вирусология