Экспланты, режим стерилизации, Способы размножения in vitro, Адаптация микрорастений к внешним условиям in vivo, приемы повышения урожайности - Оздоровление и микроклональное размножение роз

Для введения в культуру ткани растений у представителей рода Rosa L. в качестве исходного экспланта берут из верхушки энергично растущего побега, около 20-40 мм длинной апикальные и латеральные почки, не одревесневших или одревесневшие побеги. Для стерилизации вводимых эксплантов применяют различные способы их обработки (Кузьмина, Потапова, 2002).

На начальном этапе почки одревесневших побегов растений розы Rosa L промывали проточной водой с добавлением моющих средств в течение 15-20 минут, затем почки очищали от кроющих чешуй и листьев. Основную стерилизацию проводили двумя способами: 10% раствором доместоса и 5% раствором лизоформина, промывка дистиллированной водой (3 раза). После чего стерильный материал помещали на искусственную питательную среду МС без гормонального состава. Результаты стерилизации эксплантов различными способами показали их различную эффективность. Так, в первом варианте опыта выход стерильных эксплантов не превышал 20%. Во втором варианте выход стерильных эксплантов у данного сорта составил 80% (Акшикова Н. А., 2013).

Способы размножения in vitro

После стерилизации почки высаживают на твердую питательную среду МС, в пробирки и помещают в световую комнату.

На этом этапе некоторые исследователи для лучшего роста микропобегов розы в культуре in vitro рекомендуют различные концентрации 6-БАП в пределах 0,5 - 1,0 мг/л (Кузьмина, Потапова, 2002).

Рост каллусной ткани первичных эксплантов проходил на среде, содержащей помимо основных добавок (сахароза, агар, мезоинозит, тиамин - HCL, пиридоксин-HCL, глицин), а также цитокинин - БАП (0,5 мг/л) и ауксин - НУК (0,15 мг/л). Через 2 недели инкубации образовался морфогенный каллус: у первичных каллусов наблюдали появление почек, одиночных или многочисленных боковых побегов. Их вырезали и переносили на среды содержащие наряду с основными добавками, БАП - 1,0 мг/л, НУК - 0,1 мг/л или БАП - 2,0 мг/л, 2,4 Д - 0,2 мг/л. На обеих средах спустя 2,5 недели отмечалось разрастание старых побегов и новых. У некоторых образцов образовались корни. Через 3,5 недели в части пробирок (около 5%) появились полноценные растения с листьями и корнями.

Микроразмножение почек проводили на среде, включающей на ряду с основными добавками также 0,1 мг/л ИМК и 1,5 мг/л БАП.

Не образовавшие корней побеги переносили на среду, содержащую 0,75 мг/л БАП и 0,05 мг/л ИМК. Через 4 недели наблюдались развитие корней практически во всех условиях.

Используемые в наших исследованиях среды отличались различным содержанием (БАП - 1,0 мг/л, НУК - 0,1 мг/л или БАП - 2,0 мг/л, 2,4 Д -0,2 мг/л). В процессе наблюдений было выявлено, что питательная среда с гормональным составом в БАП - 1,0 мг/л, НУК - 0,1 мг/л дает больший процент образования микроклонов за месяц, в отличии от содержания БАП - 2,0 мг/л, 2,4 Д -0,2 мг/л в питательной среде (Павловская Н. Е., 1998).

Адаптация микрорастений к внешним условиям in vivo, приемы повышения урожайности

Когда у микроклона образовывались корни, его извлекали из стерильных условий и сажали в горшки, заполненные субстратом. Но перед высадкой в почву, регенеранты проходили акклиматизацию во влажной камере на вермикулите в течение двух недель, а затем горшочки помещали в микро теплички, чтобы дать микрорастениям возможность постепенно привыкнуть к естественным условиям. Как только они адаптировались (через 4-6 недель), поддерживали обычные условия выращивания для данного вида роз. В качестве субстрата использовали торфа-песочную смесь 1:3 и велторф. Наибольший процент приживаемости растений-регенерантов наблюдали во втором типе субстрата 90%. После адаптации к комнатным условиям, пересаживали в открытый грунт, где они прекрасно себя чувствуют, растут и цветут (Акшикова Н. А., 2013).

Похожие статьи




Экспланты, режим стерилизации, Способы размножения in vitro, Адаптация микрорастений к внешним условиям in vivo, приемы повышения урожайности - Оздоровление и микроклональное размножение роз

Предыдущая | Следующая