Биохимические свойства, Серологическая диагностика, Биопроба - Диагностика и профилактика лептоспироза
Лептоспиры - хемоорганотрофы с дыхательным типом метаболизма. Повышенная чувствительность к солям синильной кислоты, а также результаты спектроскопических исследований свидетельствуют об участии в их дыхании цитохромной системы. Они оксидазонегативны, но каталазо - и/или пероксидазопозитивны.
Эти микроорганизмы проявляют выраженную аминопептидазную активность при отсутствии протеолитических свойств.
Серологическая диагностика
Для серологической диагностики лептоспироза применяют различные варианты РА (РАЛ, макроагглютинации, микроскопической аггглютинации, РЛА), РСК.
Для постановки РА необходим набор живых культур патогенных для организма сероваров летоспир, циркулирующих на данной территории. Важнейшими факторами, определяющими специфичность РА, являются чистота и идентичность антигенов. Последнюю контролируют в лабораториях не реже 2 раз в год с применением гипериммунных кроличьих антисывороток или моноклональных антител. Чистоту антигенов лептоспир регулярно проверяют посевами на кровяной агар или тиогликолевый бульон.
Основными недостатками РА при лептоспирозе являются значительные затраты времени и труда на ее постановку, необходимость применения большого количества антигенов лептоспир разных серогрупп, вариабельность качества используемых живых лептоспирозных антигенов, потенциальную опасность заражения проводящих серологическое исследование специалистов (при использовании в качестве антигена живых культур лептоспир), субъективность оценки результатов, возможность перекрестных реакций сероваров, относящихся к разным серогруппам и недостаточно высокую чувствительность (например, при исследовании животных, выделяющих возбудителя с мочой, но не имеющих выраженного антительного ответа). Последнее связано с динамикой IgM-агглютининов (IgG в РА не выявляют).
1. РАЛ
Со времени разработки Мартином и Петтитом в 1918 г этот тест остается "золотым стандартом" серологической диагностики лептоспироза.
Для получения антигена для РАЛ используют 7-10-дневные культуры лептоспир, выращенные на жидких питательных средах и имеющие пышный рост (не менее 50 лептоспир в поле зрения без спонтанной агглютинации и примесей). лептоспироз бактериологический профилактика иммунитет
Агглютинация проявляется склеиванием лептоспир в агломераты, размер которых может варьировать от 3-5 бактерий до огромных шаров, занимающих несколько полей зрения микроскопа. Лизис сначала проявляется образованием зернистости у одиночных и агглютинированных лептоспир. Затем бактерии постепенно теряют подвижность и фрагментируются, превращаясь в скопление аморфных зернистых образований. Агглютинация и лизис протекают в первых разведениях сыворотки одновременно, но по мере увеличения разведения сыворотки начинает преобладать агглютинация так, что в конечных разведениях лизис отсутствует.
Специфические агглютинины появляются в крови собак через 7-10 дн после заражения. У непривитых собак в этот период титр агглютининов обычно невысок (1:100 - 1:200), но в последующем он быстро возрастает до 1:400 и выше, что считают диагностическим уровнем. Обычно к концу второй недели болезни титр антител повышается в 15-40 раз и выше. На этом уровне он сохраняется несколько недель. В последующем отмечают тенденцию постепенного его снижения. На острой стадии инфекции отмечают 4-кратное повышение титра агглютинирующих антител к лептоспирам при тестировании парных проб сывороток. Однако при исследовании этим тестом сыворотки хронически больных собак могут быть получены отрицательные результаты из-за низкого титра специфических агглютининов.
При оценке результатов теста необходимо принимать во внимание большую продолжительность персистенции агглютининов у многих переболевших и привитых, а также возможность отсутствия сероконверсии у части инфицированных животных.
Стабильные титры антител 1:200 -1:400 выявленные в крови собаки с интервалом в 1-2 нед скорее свидетельствуют о ранее перенесенном заболевании или лептоспироносительстве, чем о текущей инфекции. 4-кратное повышение титра антител считатают доказательством последней.
В рутинной лабораторной практике и полевых условиях в настоящее время пользуются не РАЛ, а ее модифицированным вариантом - МРА. Тест проводят в плашках аналогично классической РАЛ, но при учете результатов оценивают лишь степень агглютинации лептоспир.
С целью снижения риска заражения лабораторных работников разработан также вариант реакции, при постановке которого вместо живых культур лептоспир применяют инактивированные 0,2-0,5% формалина бактерины. При оценке результатов МРА учитывают только агглютинацию, поскольку формалинизированные ЛС не лизируются сывороткой. Из-за недостаточно высокой чувствительности эта модификация теста не нашла широкого применения.
Вместо набора антигенов разных сероваров патогенных ЛС при постановке теста может быть использован единственный антиген, которым служит штамм Patoc1 непатогенного видаL. biflexa. Реакция позволяет лишь установить принадлежность тестируемого изолята к лептоспирам.
2. Реакция макроагглютинации (РМА)
Этот вариант РА проводят с жидкими культурами референтных сероваров ЛС, в которых рост бактерий проявляется видимой при встряхивании пробирки мутью. После добавления в них разведения (1:10) гомологичной антисыворотки в соотношении 1:5 из агглютинировавших лептоспир быстро образуются хлопья, сохраняющиеся несколько суток и полностью не распадающиеся даже при энергичном встряхивании пробирок.
С и учитывают результаты с помощью лупы при непрямом освещении. С, а затем 30 мин при 55В модификации Смита-Тулоша (1937 г) реакцию проводят 3ч при температуре 37
Старбук и Уорд (1942 г) предложили проводить тест с формалинизированными культурами лептоспир. Обработанные формалином лептоспиры осаждают центрифугированием и окрашивают генцианвиолетом. При постановке реакции смешивают по 1 капле антигенов и тестируемой сыворотки на стеклянной пластинке белого цвета. Ее осторожно покачивают в течение 10 мин и проводят учет результатов. Положительной реакцией считают появление в смеси рыхлых, окрашенных в синий цвет агрегатов.
3. РЛА
По чувствительности РЛА несколько уступает РАЛ, но проще в постановке и позволяет получить результат в более короткий срок. Проводится с помощью латексных частиц, на которых сорбируется антиген лептоспир.
4. РА полимерных частиц с лептоспирозным антигеном.
Этот современный вариант РА пока еще не нашел широкого применения, хотя получил положительные отклики, как медицинских, так и ветеринарных специалистов. В качестве носителя наружных мембранных антигенов лептоспир использованы частицы поли-DL-лактид-полиэтиленгликоля, покрытые антигеном лептоспир. Тест по специфичности соответствует, но несколько уступает по чувствительности РАЛ. Он проще в постановке и позволяет получить результат серологического исследования в течение 3 ч. Кроме того, агглютинины выявляются им в более ранние сроки и в более высоком титре, чем в РА.
РСК
РСК редко используют для серологической диагностики лептоспироза собак. Комплементсвязывающие антитела появляются у инфицированных сероварами icterohaemorrhagiaee и canicola животных этого вида через 4 дн после заражения, а через 9-10 нед пз они исчезают. Тест не позволяет дифференцировать серовары лептоспир. При постановке РСК большое значение имеет концентрация лептоспир в антигене. Поэтому для приготовления последнего отбирают только те культуры лептоспир, в которых при темнопольном микроскопировании в 1 поле зрения видно не менее 50-100 бактерий. Для получения ориентировочного результата РСК проводят с пулом антигенов разных сероваров (полиантигеном), но при необходимости установления серотипа/серовара лептоспир, вызвавшего инфекцию у животного, для постановки теста пользуются моновалентными антигенами, приготовленными из референтных штаммов, относящихся к определенным серогруппам/сероварам.
Биопроба
Метод более чувствительный, чем культуральный; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения их вирулентности и дифференциации от сапрофитов.
Заражают золотистых хомячков 20--30-дневного возраста и крольчат-сосунов в возрасте 10--20 дней. На каждую пробу берут двух животных; на 4--5й день убивают первого, на 14--16й день -- второго, если оно не погибло раньше. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Сыворотку крови убитого через 14--16 дней животного исследуют в реакции микроагглютинации (РМА) с лептоспирами 13 серогрупп. Положительная РМА в разведении 1:10 и выше указывает на наличие лептоспир в исследуемом материале.
Похожие статьи
-
Особенности взятия и пересылки патологического материала Материалом для прижизненной диагностики служат кровь и моча, для посмертной - трупы мелких...
-
Бактериологическая диагностика, Культуральные свойства - Диагностика и профилактика лептоспироза
Лабораторную диагностику лептоспироза животных проводят в соответствии с действующими Санитарными и ветеринарными правилами. Она основана на комплексе...
-
Смотри вопрос №7 Общие принципы серологических реакций и их использование в диагностике вирусных болезней В целях определения вида данного вируса при...
-
Профилактика и меры борьбы - Диагностика и профилактика лептоспироза
В целях недопущения возникновения лептоспироза ввод животных для племенных и пользовательных целей разрешается только из благополучных хозяйств, при...
-
В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более; будучи типичными гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают...
-
Заключение - Диагностика и профилактика лептоспироза
В целях недопущения заболевания животных лептоспирозом собственники и владельцы скота, ветеринарные специалисты обязаны выполнять следующее:...
-
Краткая характеристика заболевания - Диагностика и профилактика лептоспироза
Лептоспироз (лат., англ. -- Leptospirosis; болезнь Вейля, тиф собак) -- в основном остро протекающая природно-очаговая болезнь животных многих видов и...
-
Морфология возбудителя его место в систематике по Берджи - Диагностика и профилактика лептоспироза
Лептоспиры -- спиралевидные бактерии диаметром 0,1--0,25 и длиной 6--15-- 30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и...
-
Характеристика возбудителя, История открытия возбудителя - Диагностика и профилактика лептоспироза
История открытия возбудителя Заболевания, напоминающие лептоспироз, описывались издавна. В 1841 г. русский врач Зейдлиц, а в 1883 г. французский врач...
-
Эпизоотологические данные - Диагностика и профилактика лептоспироза
К лептоспирозу восприимчивы более ста видов диких и домашних животных. Лептоспирозные эпизоотические очаги подразделяются на природные, антропургические...
-
Введение - Диагностика и профилактика лептоспироза
Лептоспироз относится к числу наиболее распространенных зоонозных заболеваний, он встречается на всех континентах. Именно потому, что основным источником...
-
Лабораторная диагностика - Диагностика и лечение болезни Ауески у поросят
Основная схема лабораторной диагностики вирусных болезней включает: I .Вирусологический метод 1. Обнаружение вируса 1)микроскопией мазков (лучше...
-
Серологический метод диагностики лейкоза - Лейкоз скота
Основан на выявлении в сыворотке крови животных при помощи РИД антител к антигену ВЛКРС. Специфические антитела появляются в крови крупного рогатого...
-
Диагностика, Лечение, Профилактика - Гаффская болезнь
Гаффский болезнь кошка рыба Токсичность рыбы проверяют в биопробах на кошках. Так описано клиническое течение Сартланской болезни у подопытных животных:...
-
Значительное увеличение производства и применения минеральных удобрений, особенно азотных (аммиачной, натриевой и калиевой селитр, мочевины, аммиака), с...
-
Иммунитет, специфическая профилактика, Профилактика - Возбудители лептоспироза
Переболевание лептоспирозом сопровождается формированием вначале нестерильного, а затем (по окончании срока лептоспироносительства) стерильного...
-
При типичном течении актиномикоза поставить диагноз по клиническим признакам достаточно просто. В сомнительных случаях проводят лабораторные...
-
Профилактика лейкоза, Меры борьбы с лейкозом - Лейкоз скота
Общие мероприятия по профилактике лейкоза крупного рогатого скота включают в себя соблюдение ветеринарно-санитарных требований при содержании, кормлении...
-
Лечение - Этиология, диагностика, лечение и профилактика тимпании рубца
При хронической тимпании . Лечение симптоматическое, направлено на улучшение моторной деятельности преджелудков, восстановление рубцового пищеварения....
-
В основе метода лежит явление люминесценции, сущность которого в том, что поглощая различные виды энергии (световую, электрическую) атомы некоторых...
-
Коронавирус размножается в чувствительных к нему первичных и перевиваемых культурах клеток с выраженным ЦПД (цитопатическием действием) на 3-7 сутки....
-
Требования по профилактике туберкулеза животных и человека 1. Владельцы животных, руководители хозяйств, независимо от форм собственности, фермеры,...
-
-- накопление транссудата в плевральной полости. Как самостоятельное заболевание регистрируют сравнительно редко, преимущественно у собак и лошадей. В...
-
ВЛКРС агглютинирует только эритроциты мышей. Максимальная ГА наблюдается при рН 6 и температуре 4°С. После обработки вируса тритоном Х100 или...
-
Лабораторная диагностика - Лейкоз крупного рогатого скота
Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патанатомических изменений и результатов лабораторных...
-
Диагноз. Аллергическая диагностика - Лечение туберкулеза у животных
Основным методом прижизненной диагностики туберкулеза животных является аллергическое исследование туберкулиновой пробой. С этой целью используют (кроме...
-
При острой тимпании периферические вены налиты кровью. Рубец, сетка, сычуг и верхний отдел кишечника переполнены жидким, нередко пенистым содержимым....
-
Профилактика - Этиология, диагностика, лечение и профилактика тимпании рубца
Во время пастбищного содержания животных пастухи и владельцы животных Должны избегать продолжительного выпаса скота на тучных лугах и клеверных полях,...
-
Введение - Этиология, диагностика, лечение и профилактика тимпании рубца
В пастбищный период из-за несоблюдения пастухами режима и правил пастьбы у крупного рогатого скота часто возникает тимпания рубца. Тимпания (Tympania...
-
Диагноз, Течение и прогноз - Этиология, диагностика, лечение и профилактика тимпании рубца
Ставят на основании анамнеза и характерных клинических симптомов. Дифференциальный диагноз. Следует иметь в виду тимпанию, развивающуюся при закупорке...
-
Пневмоторакс - Диагностика, методы терапии и профилактика гидроторакса и пневмоторакса у животных
-- скопление воздуха или газа в плевральной полости. Заболевание встречается у животных всех видов. Различают пневмоторакс односторонний и двусторонний,...
-
Глазная маллеиновая проба, Подкожная маллеиновая проба - Сап
Перед проведением исследования лошади (ослы, мулы) должны быть в течение суток освобождены от физической нагрузки и содержаться на привязи. Обследование...
-
РСК. Иммунологическая основа и характеристика компонентов реакции - Ветеринарная вирусология
Реакция связывания комплемента (РСК) -- одна из традиционных серологических реакций, применяемых для диагностики многих вирусных болезней. Само название...
-
Ооцит беременность бесплодие животное Вымя коровы является одним из наиболее уязвимых органов. Одно из заболеваний вымени - мастит, возникает при...
-
Таблица 2. Серологические варианты сальмонелл, выделенные из проб пищевой продукции (2012 год) N п/п Серотипы сальмонелл Говядина Баранина Свинина Мясо...
-
Удобрения - Свойства картофеля
Картофель - требовательное к обеспеченности элементами питания растение, имеет растянутый период потребления питательных веществ и дает более высокие...
-
Хозяйства для выращивания товарного картофеля должны использовать семенной материал не ниже 3-5 репродукции, поэтому оптимальным сроком обновления...
-
Клинико-эпизоотологическая или до-лабораторная диагностика - проводится в хозяйствах и позволяет поставить лишь предварительный диагноз, проводится...
-
Схема лабораторной диагностики вирусных инфекций - Ветеринарная вирусология
Лабораторная диагностика - это система мер по обнаружению, индикации вируса. В нее входят: получение посланного патологического материла, исследование...
-
Патологоанатомические изменения, Диагностика, Лечение - Псороптоз крупного и мелкого рогатого скота
При генерализованной форме (при поражении 50% и более кожного покрова) развиваются гипоксия и токсемия, сопровождающиеся эозинофилией, эндартериитами,...
Биохимические свойства, Серологическая диагностика, Биопроба - Диагностика и профилактика лептоспироза