Анализ полиморфизма гена BoLA-DRB3 методом ПЦР-ПДРФ - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
Амплификация фрагмента гена BoLA-DRB3 методом ПЦР
Для последующего анализа методом гнездовой ПЦР амплифицировали участок экзона два гена BoLA-DRB3 размером 284 п. н. (281 п. н. для аллелей с делецей).
Конечный объем реакционной смеси составлял 27 мкл. Количество реакционной смеси определялось с учетом положительного и отрицательного контроля.
Для контроля прохождения реакции проводили электрофорез в 1,5 процентном агарозном геле для оценки качества и концентрации полученного фрагмента.
На гель наносили 5 мкл образца.
Рестрикционный анализ
Для рестрикционного анализа фрагмента экзона 2 гена BoLA-DRB3 использовали эндонуклеазы рестрикции RsaI, HaeIII, BstYI, BstX2I фирмы НПО "СибЭнзим", Россия.
Состав буфера для хранения данных ферментов НПО ("СибЭнзим"): 10мM Tris-HCl (pH 7.4); 300мM хлорид натрия (NaCl); 0,1мM EDTA; 1мM DTT; 0,5мг/мл BSA; 50% глицерин.
Состав буфера для инкубации НПО ("СибЭнзим"): 10 мM Tris-HCl (pH 7,9 при 37 градусах Цельсия); 10мM хлорид магния (MgCl2); 50мM хлорид натрия (NaCl); 1мM DTT.
Для обработки брали 5 мкл продуктов ПЦР. Количество фермента на 1 реакцию - 5 ед. активности. Инкубацию проводили в течение 3 ч.
Рестрикционные фрагменты разделяли с помощью электрофореза в 12% полиакриламидном геле. На гель наносили весь объем рестрикционной смеси. Для оценки длины фрагментов использовали маркер молекулярных весов GenPak DNA Marker M50 ООО "Изоген".
Похожие статьи
-
Как было отмечено выше, ген BoLA-DRB3 обладает выраженным естественным полиморфизмом. Локус считается полиморфным, если в популяции существуют два или...
-
Молекулярный вес продуктов ПЦР и их фрагментов, полученных после рестрикции, определяли с помощью электрофореза в агарозном (1,5-2,5 процентном) геле, с...
-
Ген BoLA-DRB3: структура, функции - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
На молекулярно-биологическом уровне трансляция BoLA-DRB3 обеспечивает синтез белкового антигена, расположенного на внешней стороне мембраны В-лимфоцитов...
-
Материалы и методы исследований При написании данной курсовой работы я пользовалась ветеринарным законодательством том 4 (инструкция по борьбе с...
-
Если учитывать весь спектр получаемой от крупного рогатого скота продукции, то он, без сомнения, является одним из самых ценных животных, когда либо...
-
Установлено, что локализация гена BoLA-DRB3 на 23 хромосоме в непосредственной близости от генов, детерминирующих хозяйственно-ценные признаки,...
-
Проблема биоразнообразия доместицированных животных Формирование вида (как единицы естественного отбора), в ходе эво-люции занимало значительные...
-
В современной сельскохозяйственной биотехнологии все большее значение приобретают молекулярно-биологические методы, позволяющие тонко регулировать...
-
Выборка быков - производителей голштинской породы черно - пестрой масти включала 100 животных, рожденных в течение 23 лет в период с 1986 по 2009 год и...
-
Характеристика частот встречаемости аллелей BoLA-DRB3 Полиморфность аллеля BoLA-DRB3 эволюционно возникла в связи с необходимостью вариабельного строения...
-
ВВЕДЕНИЕ - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
Мировая тенденция индустриализации сельского хозяйства несет в себе множество рисков. Один из них - это сокращение национальных генетических ресурсов...
-
ЗАКЛЮЧЕНИЕ - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота
По результатам исследования были сделаны следующие выводы: 1. В выборке из 100 быков принадлежащих к голштинской черно-пестрой породе, из 54 ПДРФ...
-
Материал исследования Исследование проводилось в 2014 году в период с 17.06.14 по 27.07.14 и с 02.09.14 по 12.10.14. В лаборатории биотехнологии...
-
Большинство разновидностей генов имеет довольно консервативный характер. Однако, существует несколько групп генов, в которых эволюционно закрепился...
-
Определяли скорость оседания эритроцитов, содержание гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов в 1 мкл. крови и проводили определение...
-
Введение - Анализ причин выбытия крупного рогатого скота мясных пород
В последнее десятилетие в Российской Федерации интенсивно развивается производство говядины от крупного рогатого скота мясных пород. Для обеспечения...
-
Синцитиальный метод при ранней идентификации вируса лейкоза крупного рогатого скота
Лейкоз крупного рогатого скота - злокачественное вирусное лимфопролиферативное заболевание. Ретровирус, относящийся к семейству Retroviridae, роду...
-
Помесный симментальский скот - Методы оценки молочной продуктивности крупного рогатого скота
Симментальский скот был широко использован для скрещивания с местным скотом на очень большой территории РФ, в результате чего в стране насчитывается...
-
Лабораторная диагностика - Лейкоз крупного рогатого скота
Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патанатомических изменений и результатов лабораторных...
-
Таблица 3. Патологоанатомические изменения, выявленные при ветеринарно-санитарной экспертизе туш, вынуждено убитых коров (нетелей) мясных пород N°...
-
Определение сущности заболевания Туберкулез (лат., англ. -- Tuberculosis) -- тяжелая хроническая болезнь животных многих видов и человека,...
-
Цели и задачи исследования Целью данной работы является разработка метода укоренения микрорастений сортов земляники садовой ex vitro, то есть в...
-
Для правильного выращивания молодняка крупного рогатого скота необходимо соблюдать следующие зоогигиенические правила:Полноценное кормление и правильное...
-
Массовые диагностические исследования запланированы по следующим болезням: туберкулез, бруцеллез и лейкоз крупного рогатого скота и сап лошадей....
-
В ООО "Сибирская Нива" производится целенаправленная планомерная работа, согласно плана, утвержденного решением главы Администрации Новосибирской...
-
ООО "Сибирская Нива" расположено на юга - востоке Новосибирской области в 180 км от г. Новосибирска в селе Барково. Территория Маслянинского района...
-
Протокол патологоанатомического вскрытия вынужденно убитой коровы черно-пестрой породы, черно-пестрой масти, возраст 5 лет, инв. №24010997, под кличкой...
-
1)Приготовление и раздача кормов. Приготовление кормов производится в отдельных помещениях, раздача кормов производится вручную с помощью универсальной...
-
Гиподерматоз необходимо дифференцировать от фурункулеза, при котором в центре созревшего фурункула возвышается небольшой флюктуирующий гнойничок,...
-
Диагноз (нозологический) на туберкулез был поставлен комплексно, на основании результатов патологоанатомического исследования трупа павшего животного, с...
-
Патологоанатомические изменения, Диагностика, Лечение - Псороптоз крупного и мелкого рогатого скота
При генерализованной форме (при поражении 50% и более кожного покрова) развиваются гипоксия и токсемия, сопровождающиеся эозинофилией, эндартериитами,...
-
ВЛКРС агглютинирует только эритроциты мышей. Максимальная ГА наблюдается при рН 6 и температуре 4°С. После обработки вируса тритоном Х100 или...
-
Для определения годовой потребности в кормах для всего поголовья коров по периодам производственного цикла необходимо определить количество кормомесяцев...
-
Девяткин А. И. (Рациональное использование кормов) рекомендует такие способы. В первую очередь разберем способы рационального использования зеленого...
-
Особов В. И. в своем издании "Механическая технология кормов" предложил более подходящие способы, в экономическом плане, заготовки кормов. Ссылаясь на...
-
Приготовление кормов. На современных животноводческих предприятиях для подготовки кормов строят специальные цехи. На комплексах их обязательно размещают...
-
Симментальская порода - Методы оценки молочной продуктивности крупного рогатого скота
Симментальская порода является наиболее типичным представителем горного скота мясо-молочного направления. По краниологическим признакам она относится к...
-
Основные генетические параметры популяций (изменчивость, наследуемость, корреляция) подвержены изменениям под влиянием применяемых в стадах систем отбора...
-
При выяснении природы количественных признаков, их зависимости от генетических и негенетических факторов большое значение имеет изучение повторяемости...
-
Воспроизводительная способность животных относится к важнейшим признакам, в значительной степени определяющим экономическую эффективность отрасли....
Анализ полиморфизма гена BoLA-DRB3 методом ПЦР-ПДРФ - Изучение биоразнообразия популяции крупного рогатого скота