Хімічний склад - Фармакогностичне вивчення рослин роду хризантема

Літературні данні стверджують, що хімічний склад хризантеми індійської містить ряд біологічно-активних сполук.

Надземна частина хризантеми індійської містить пектинові речовини (17,79%), білок (понад 100 мг/г в засушених квітках), амінокислоти, розчинні вуглеводи; ненасичені жирниі кислоти, органічні кислоти: кавову, хлорогенову, неохлорогенову ферулову; фенолокислоти, флавоноїди: хрізеріол, апігенін, лютеолін, кверцетин, глюкозиди кверцетину і тіліаніну, гесперидин, гіперозид; пігменти, кумарини, ефірне масло: б-амірін, в-амірін, хамазулен, фарадіол, лупеол; аденін, холін, стахідрін, антосіон, хрізантемін. вітаміни: аскорбінову кислоту (150 мг%), тіамін, рибофлавін, ніацин; каротиноїди віолоксантин, 5,6-дигідроксилютеін, лютеїн-5,6-епоксид та елементи: Фосфор, Ферум, Магній, Селен, Цинк, Калій, Йод, Марганець та інші.

У надземній частині хризантеми увінчаної (Chrysanthemum coronarium L.) присутні солі Калію, Кальцію, Феруму, вуглеводи, білок, каротин, вітаміни B1, В2, С і PP та ефірна олія. (Таб. 1.4.) [27, 30, 31, 32, 33].

Таблиця 2 Основні біологічно активні речовини вегетативних та генеративних органів рослин роду хризантема

БАР

Сполука

Формула

Флавоноїди

Кверцетин

Лютеолін

Апігенін

Сапоніни

Б-амирин

В-амірін

Лупеол

Ефірна олія

Хамазулен

Вітаміни

Тіамін

Рибофлавін

Ніацин

Визначення основних груп біологічно активних речовин у квітках хризантемы корейської

Окремі порції (по 20,0 г кожна) повітряно-сухої сировини квіток хризантеми корейської сорту "Золотя осінь" екстрагували спиртом етиловим 96% і 40% концентрації, хлороформом, а також дистильованою водою. Отримані витягу упарюють до об'єму 20 мл і далі їх аналізували на вміст БАР.

Якісними реакціями встановлено, що в хлороформній фракції присутні терпени, каротиноїди, токофероли і стерини, а також у слідових кількостях флавоноїди, кумарини та похідні коричної кислоти. У витягу, отриманому спиртом етиловим 96%, виявлено флавоноїди, кумарини, сгерины, терпени, похідні коричної кислоти. У водно-спиртовому витягу крім флавоиоїдів і похідних коричної кислоти присутні аскорбінова кислота, амінокислоти і вуглеводи.

Встановлено елементний, амінокислотний, вітамінний і полісахаридний склад квіток хризантеми корейської

Таблиця 3 Біологічно активні речовини в квітках хризантеми корейської

Елементи

Амінокислоти

Вітаміни

Полісахариди

Калій

Магній

Фосфор

Вільних амінокислот

Аргінін

Глутамінова кислота

Фенілаланін

В-каротин

Вітамін Е

Вітамін С

Водорозчинні полісахариди

Пектинові речовини

Геміцелюлоза A

Геміцелюлоза B

Кількісний вміст гидроксикоричиих кислот в екстракті в перерахунку на хлорогенову кислоту визначено за методикою, запропонованою професором Сампиевым A. M. з співавторами.

Кількісний вміст флавоноїдів і гидроксикоричних кислот у витягу з квіток хризантеми корейської, отриманому спиртом етиловим 40%, встановлено з урахуванням значень відносних показників поглинання розчинів cтандартного зразку рутину і хлорогенової кислоти: флавоноїдів -- 0,847 у перерахунку на рутин; а гідроксикоричних кислот -- 9,547 в перерахунку на хлорогенову кислоту. Кількісний вміст суми флавоноїдів в сировині становить -- 0,874 мг/% у перерахунку на рутин; а каротиноїдів -- 3,132 мг/% в перерахунку на в-каротин. [16, 15, 17]

Ізолювання та ідентифікація полифеіольних сполук

Антиоксидантною активністю володіє екстракт, отриманий при екстракції квіток хризантеми спиртом етиловим 40% концентрації. Викорирстовували колонкову хроматографію. В якості адсорбенту застосовувався силікагель марки L 40/100. Элюентом служили різні розчинники і їх суміші, починаючи з гексана і далі в порядку збільшення полярності. Контроль за процесом элюювання здійснювали методами тонкошарової хроматографії на пластинках "Silufol" і висхідної паперової хроматографії в різних системах розчинників. Підбір хромагографічних систем проводили експериментально. Основним критерієм у виборі системи розчинників для ТШХ було найбільше число плям речовин в элюатах і значення Rf кожного з них.

Всього було отримано 730 фракцій. Хроматографічно ідентичні фракції об'єднували і випаровували у вакуумі до невеликого обсягу, звідки при кімнатній температурі і при сгоянии випадали осади. [16]

Кількісне визначення антиоксидантів

Дослідження сумарного вмісту антиоксидантів в різних екстрактах з квіток хризантеми проводили на аналізаторі антиоксиданої активності "Колір Яуза-01-ЛА". Результати наведено в Таб

Таблиця 4 Концентрації суми антиоксидантів у сухих екстрактах квіток хризантеми корейської

Сухий екстракт, отриманий екстракцією

Площа піка ($а, нА/з)

Сумарна концентрація антиоксидантів, в перерахунку на кверцетин мг/г

Сумарна концентрація антиоксидантів, в перерахунку на галову кислоту мг/г

Спиртом етиловим 96%

5045

88,1±1,0

57,3 ±0,8

Спиром етиловим 70%

9588

172,4 ±2,2

113,6 ±1,2

Спиртом етиловим 40%

9810

177,4 ± 2,3

116,9 ± 1,3

Водою

1678

27,7±0,7

17,1 ±0,6

Максимальна концентрація антиоксидантів визначена в екстракті хризантеми, отриманому при застосуванні в якості екстрагента спирту етилового 40%. [15]

Визначення поліфенольних сполук

У сухому екстракті, отриманому 40 % спиртом етиловим, виявлено найбільший вміст антиоксидантів, досліджували методом ВЕРХ полифенольний склад саме цього екстракту. Виявлено 17 сполук, з яких ідентифіковано 12 з'єднань, представлених флавоиоїдами (гесперидином, гиперозидом, рутином, , кверцетином), фенолокислотами (хлорогеновою, неохлорогеновой, кавовою, цикорєвою, феруловою і о-метоксикумаровою) і кумарином (о - метосикумаровою).

Вивчали наявність неглікозидильованих похідних флавона в квітках хризантеми корейської. У цьому зв'язку витяги, отримані з окремих порцій сировини спиртом етиловим 70% і 40% концентрації, після розпарювання і розбавлення водою обробляли у ділільній воронці діетиловим ефіром. Хроматографічний контроль показав, що склад ефірних фракцій ідентичний, тому їх об'єднали і піддали фракціонуванню методом препаративної колонкової хроматографії. Всі технологічні операції та методи контролю аналогічні, використаним при колонковій хроматографії екстракту хризантеми, отриманого 40% спиртом етиловим, з тією лише різницею, що на початковій стадії процесу элюювання використовували хлороформ, а не гексан.

Контроль процесу элюювання здійснювали методом ТШХ в експериментально підібраних системах розчинників. Хроматографично ідентичні фракції об'єднували і концентрували випаровували у вакумі до невеликого обсягу. При кімнатній температурі в деяких концентрованих фракціях формувалися опади, які ми відокремлювали і очищали методом перекристалізації. Індивідуальність отриманих сполук встановлювали хроматографично в різних системах розчинників і визначенням температур плавлення.

Спиртові розчини речовин, отриманих з окремих фракції (V, VI, I Еф, II Еф і III Еф), в умовах ціанідинової реакції набували оранжеве забарвлення, характерну для похідними флавону.

Подальший аналіз структури індивідуальних флавоноїдів проводили методом УФ-спектрофотометрії з іонізуючими і комплексоутворюючими добавками. [16, 17]

Таблиця 5 ЯМР-'П-спектральні характеристики флавоноїдів виділених з хризантеми корейської

Положення протонів у структурі молекули

Речовини, виділені з фракцій

V DMSO-d6 300MHz

III Еф DMSO-d6 300MHz

VI DMSO-d6 300MHz

II Еф DMSO-d6 300MHz

H-3

6,85

6,85

6,63

6,64

H-6

6,47

6,47

6,52

6,18

H-8

6,97

6,97

6,81

6,44

H-2

8,05

8,05

7,40

7,40

H-3г

7,14

7,14

H-5г

7,14

7,14

6,90

6,90

H-6г

8,05

8,05

7,42

7,42

OH-5

12,95

12,95

12,97

12,95

OCH3-4г

3,83

3,83

Протони

5,20-3,75

3,20-3,75

3,25-3,75

В-алюмірний

5,11

5,10

5,10

Таблиця 6 Фізико-хімічні властивості флавоноїдів, виділених з хризантеми корейської

Речовина

Т пл.

Rf на БХ

ІЧ - спектр н max, см

БУВ

4:1:5

15 %

CH3COOH

OH

C=O - y - пірона

C=C аромат. ядра

C-O

OCH3

V

182-185

0,68

0,26

3294

1657

1564

1246

2928

IIIЕф

182-185

0,69

0,339

3409

1656

1584

1178

2930

VI

253-255

0,47

0,15

3209

1653

1529

1258

IIЕф

330-331

0,78

3377

1651

1578

1261

Вивчення пектинового комплексу

Пектин з квіток хризантеми корейської, отриманий за загальноприйнятою схемою І. К. Кочеткова, являє собою аморфний порошок світло-бузкового кольору, повільно розчинний у холодній воді, легко розчинний в гарячій воді і практично нерозчинний в органічних розчинниках.

Після кислотного гідролізу хроматографічними методами встановлено, що до складу пектинового комплексу входять галактоза і галактуронова кислоти.

Для вивчення поверхневої активності пектину по відношенню до води використовувалися два мегода: сталагмометричний і метод найбільшого тиску, заснований на продавливанні бульбашки повітря через калібрований капіляр. Результати експерименту представлені на ізотермі (рис. 1), звідки слідує що пектин не може бути віднесений до групи поверхнево-активних речовин, оскільки підвищує поверхневий натяг води.

ізотерма поверхневого натягу водних розчинів пектину

Рисунок 1.3 Ізотерма поверхневого натягу водних розчинів пектину

Рівень поверхневого натягу істотно залежить від температури і часу приготування розчинів, тому що при значеннях концентрацій 1% і більше відбувається желювання. Визначення молярної маси проводилося з допомогою віскозометра Оствальда. Розраховувалися відносна, і приведена в'язкості. Характеристична в'язкість [г)} знайдена виходячи з графічної залежності приведеної в'язкості від концентрації розчину

Таблиця 7 Залежність в'язкості водних розчинів пектину від концентрації

Концентрація розчину

Час, сек

З відносна

З удільна

З приведена

(з)

Середня молярна маса г/ моль

0

33,18

29093

0,0625

40,54

1,212

0,212

3,472

2,5

0,2

69

2,079

1,079

5,395

0,3

101

3,074

2,044

6,813

0,4

142

4,280

3,28

8,20

0,5

162

4,910

3,910

9,80

Середня величина обчисленої молярної маси пектину становить 29093 г/моль.

Вивчалася кінетика і адсорбційна ємність пектину in vitro. Як іон - комплексооутворювач був використаний катіон РЬ2+ чию токсичну дію на організм добре вивчено. Має місце лінійна залежність концентрації іонів свинцю, сорбованих на поверхні пектину, від часу, що дозволяє припустити I порядок реакції взаємодії субстрату з іонами свинцю.

Середня величина константи швидкості визначена експериментально і становить 9,76 * 10-3 хв-1.

Протягом 1 години (тривалість комплексоутворення) максимальне вилучення іонів РЬ' становить 30% від рівноважної концентрації, що в перерахунку на 1 г сорбенту дорівнює приблизно 143 мг свинцю.

Для вивчення впливу температури на сорбційні властивості пектину проводили заморожування модельних розчинів (-18'С) та температурну обробку (100-ЬГС) протягом 60 хвилин. Проведені дослідження показали, що відсоток сорбційної здібності пектину щодо його протікання при кімнатній температурі зменшився до 25,1% при термічній обробці і практично зберігся при заморожуванні (28,9%).

Відносне збереження сорбційних властивостей пектину при консервуванні холодом і термічної обробки дозволяє говорити про можливість його використання з лікувально-профілактичною метою.

Фармакологічні дослідження лютеолін - 7-глюкозиду і фракцій, отриманих з квіток хризантеми корейської

Оскільки у витягах, отриманих з квіток хризантеми, кількісно переважає лютеолін-7-глюкозид і його аглікон - лютеолін, для цих сполук здійснено комп'ютерний прогноз (програма PASS) біологічної актисносги.

Це дозволило отримати інформацію про високу ймовірність впливу лютеолін-7-глюкозила і лютеоліну на серцево-судинну систему (капілярозміцнююча, кардіопротекторна, антиангінальна) і антирадикальна властивість цих сполук (антиоксидантна, мембранозахисна, хемозахисна і протипухлинна активність).

На підставі даних прогнозу вважали за доцільне провести скринінг-дослідження кардіотропної дії лютеолін-7-глюкозпда, а також фракцій, отриманих з хризантеми та виявили максимальний антиоксидантний ефект у дослідах invitro.

При визначенні гострої токсичності значення LD50 для екстракту, отриманого 40% спиртом етиловим, склала 4850 мг/кг, що за класифікацією Сидорова К. К. відповідає класу IV "Малотоксичні".

Екстракт хризантеми і люгеолин-7-глюкозид достовірно знижують САД протягом 30 хвилин на 30-37%. До 60-й хвилині цей результат зберігався тільки па тлі лютсолин-7-ппокозида.

Дія досліджуваних речовин на ритм скорочення міокарду вивчали на моделі хлоркальцієвої аритмії, а препаратом порівняння було обрано настоянка глоду.

Основним показником прояву антиаритмічної активності служить тривалість життя щурів після введення 10% розчину кальцію хлориду в лозі 2 мг/кг.

Дослідження впливу лютеолін-7-глюкозиду і екстракту квіток хризантеми, отриманого спиртом етиловим 40%, на ритм серцевих скорочень на моделі хлоркальцієвої аритмії показали значне зниження тривалості життя щурів.

Антигіпоксичну активність виявляли шляхом моделювання гіперкапнічної нормобаричної гіпоксії за допомогою термокамери. Результати експерименту свідчать про позитивний вплив усіх досліджуваних речовин на тривалість життя мишей в умовах гіпоксії (Таб 1.4.6).

Таблиця 8 Тривалість життя мишей при гіперкапнічній гіпоксії (п б)

Досліджуваний об'єкт, доза

Тривалість життя, хв. М ±m

Зміни відносно контролю, %

Зміни щодо екстракту елеутерококу жидкого про, %

Контроль (фіз. розчин)

18.7 г± 1.12

-

-

Лютсолнн-7-глюкозид. 10 мг/кг

21,5 ±0,96

+14.97

-2.27

Екстракт, отриманий 40% спиртом етиловим, 100 мг/кг

22.0 ± 1,12

+ 17,65

0,00

Екстракт елеутерококу рідкий, 0,5 мл/кг

22.0 ±0.36

+ 17,65

-
    - достовірно по відношенню до контролю 4 - достовірно по відношенню до екстракту елеутерококу рідкого (Р

Вивчення актопротекторної активності показало, що всі досліджувані об'єкти підвищують фізичну витривалість мишей, причому лютеолін-7 - глюкозид достовірно збільшує цей показник на 149% в порівнянні з контролем. Щодо дії екстракту елеутерококу екстракт хризантеми в меншій мірі збільшує витривалість мишей, а лютеолін-7-глюкозид - більшою мірою (на 26%), але недостовірно.

Таблиця 9 Актопротекторна дія лютеолін-7-глюкозиду іфракцій, отриманих з хризантеми (n=6)

Досліджуваний об'єкт, доза

Середній час рухової активності, с М ± m

Зміна відносно до контролю, %

Зміна по відношенню до екстракту елеутерококу. %

Контроль (фіз. розчин)

115,5±10.6

-

-

Екстракт елеутерококу рідкий. 0.016 мл/кг

229.5 ±39,5

+ 98,7

-

Екстракт хризантеми, ;

Отриманий 40% ; 100 мг/кг

128.5 ±2.9

+11,3

- 44,0

Лютеолін-7-глюкозид, 10 мг/кг

288 25 ±18,7

+ 149,6

- + 26,0
    * - достовірно по відношенню до контролю (Р - достовірно по відношенню до екстракту елеутерококу рідкому (Р

Результати фармакологічного скринінгу дозволяють стверджувати про наявність адаптогенної активності, найбільш вираженої лютеолін-7-О-в - D-глюкопіранозида і екстракту, отриманого спиртом етиловим 40% концентрації. [14, 15, 17]

Хімічний склад ефірної олії різних видів хризантем:

Домінуючими речовинами ефірної олії хризантеми китайської: хризантенон (Chrysanthenone), борнеол (Borneol), борнілацетат (BornylAcetate).

ефірна олія хризантеми дівочої chrysanthemum parthenium

Рис 1.4 Ефірна олія хризантеми дівочої Chrysanthemum parthenium

Домінуючими речовинами ефірної олії хризантеми увінчаної: транс-хризантенил ацетат (13.2%), транс-хризантенил изовалерат (10.2%), цис-хризантенил ацетат (9.9%), камфора (до 15.7%).

Домінуючими речовинами ефірної олії хризантеми індійської: 1,8 - цинеол, камфори, борнеол, борнілацетат [27].

Похожие статьи




Хімічний склад - Фармакогностичне вивчення рослин роду хризантема

Предыдущая | Следующая