Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro

Оценка соотношения живых и погибших клеток в культурах гиппокампа проводилась через 1, 3, 7 и 10 суток после гипоксического воздействия. Число живых клеток в интактных культурах на протяжении всего периода наблюдения практически не изменялось. Гипоксическое воздействие вызывало морфологические изменения и гибель культивируемых клеток. Уже через сутки после гипоксии число живых клеток в культурах, подвергнутых гипоксии, было достоверно ниже по сравнению с интактной группой (73,19±3,95% и 89,37±1,33%, соответственно). В течение последующих дней доля живых клеток в культурах, подвергавшихся гипоксическому воздействию, неуклонно снижалась и на 10 сутки составила 20,84±4,78% (рис. 19). Стоит отметить, что наиболее резкое снижение жизнеспособности клеток в культурах отмечалось между 7 и 10 днями после гипоксии/реоксигенации.

Аппликация N-ADA (10 мкМ) во время гипоксии и в первые сутки после реоксигенации существенно повышала выживаемость клеток. На первые сутки после гипоксии/реоксигенации в присутствии N-ADA происходило незначительное снижение жизнеспособности, сопоставимое с контрольными культурами, однако в дальнейшем она не снижалась и на 10 сутки после гипоксии/реоксигенации статистически значимых отличий между опытными и интактными культурами не обнаруживалось.

количество живых клеток в культуре клеток гиппокампа после гипоксии, *- статистически достоверные различия в сравнении с контрольной группой

Рисунок 19 Количество живых клеток в культуре клеток гиппокампа после гипоксии, *- статистически достоверные различия в сравнении с контрольной группой, p<0.05, **- различия в сравнении с контрольной группой # - статистически достоверные различия с группой, подвергавшейся гипоксии (p<0,05, критерий Стьюдента)

Число жизнеспособных клеток в культурах, подвергавшихся 10- минутной гипоксии с аппликацией N-ADA, на 10 сутки после воздействия было более чем в 3 раза выше, чем в контрольных культурах (75,24±9,37% и 20,84±4,78%, соответственно). Таким образом, введение N-ADA во время гипоксии и в первые сутки после нее сохраняют жизнеспособность клеток как минимум в течение 10 суток после гипоксического воздействия.

Для выявления возможных механизмов антигипоксического действия исследуемого вещества в культуры добавлялся N-ADA в сочетании с блокаторами различных рецепторов, связывающих каннабиноид. В отсутствие гипоксии антагонисты CBR-1, CBR-2 и TRPV1 не влияли на выживаемость клеток. Блокада CBR-1 селективным антагонистом SR141716A на первые сутки после гипоксии/реоксигенации в культурах, подвергнутых гипоксии в присутствии N-ADA, вызывала, по сравнению с интактными культурами, достоверное снижение жизнеспособности клеток, которая на 3 сутки оставалась на прежнем уровне, но на 7 сутки продолжала снижаться. К 10 суткам постгипоксического периода число жизнеспособных клеток снижалось наиболее интенсивно (до 24,95±3,21%) и статистически не отличалось от контрольной группы, подвергутой гипоксии в отсутствие каннабиноида. Таким образом, блокада CBR-1 устраняла нейропротекторное действие N-ADA.

Исследование роли активации CBR-2 в реализации нейропротекторного эффекта N-ADA показало, что под воздействием селективного антагониста CBR-2, SR144528, в течение первых 7 суток происходит постепенное достоверное снижение жизнеспособности клеток, сходное с ее изменениями в контрольной группе. Однако к 10 суткам, в отличие от контрольной группы, резкого снижения числа живых клеток не происходило. Их количество в присутствии N-ADA и SR144528 на 10 сутки после гипоксии было достоверно выше, чем в контрольной группе культур (62,0±2,43%). Эти данные свидетельствуют о том, что активация CBR-2 не оказывает существенного влияния на реализацию нейропротекторного эффекта N-ADA.

Применение при гипоксии N-ADA (10 мкМ) в сочетании с антагонистом TRPV1 капсазепином (1 мкМ) не оказывало нейропротекторного эффекта. Количество жизнеспособных клеток снижалось уже на 1 сутки после гипоксического воздействия, а к 10 суткам постгипоксического периода их число в группе культур, инкубированных с N-ADA и капсазепином, составило всего 32,08±12,41, что не отличалось от контроля. Следовательно, активация TRPV1, так же, как и CBR-1, имеет важное значение в реализации нейропротекторного эффекта N-ADA при гипоксии.

Таким образом, аппликация N-ADA (10 мкМ) во время гипоксии снижает гибель культивируемых клеток гиппокампа в постгипоксическом периоде, при этом защитный эффект эндоканнабиноида опосредуется прежде всего метаболическими каскадами, запускаемые при активации CBR-1 и TRPV1.

Похожие статьи




Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro

Предыдущая | Следующая