Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro
Оценка соотношения живых и погибших клеток в культурах гиппокампа проводилась через 1, 3, 7 и 10 суток после гипоксического воздействия. Число живых клеток в интактных культурах на протяжении всего периода наблюдения практически не изменялось. Гипоксическое воздействие вызывало морфологические изменения и гибель культивируемых клеток. Уже через сутки после гипоксии число живых клеток в культурах, подвергнутых гипоксии, было достоверно ниже по сравнению с интактной группой (73,19±3,95% и 89,37±1,33%, соответственно). В течение последующих дней доля живых клеток в культурах, подвергавшихся гипоксическому воздействию, неуклонно снижалась и на 10 сутки составила 20,84±4,78% (рис. 19). Стоит отметить, что наиболее резкое снижение жизнеспособности клеток в культурах отмечалось между 7 и 10 днями после гипоксии/реоксигенации.
Аппликация N-ADA (10 мкМ) во время гипоксии и в первые сутки после реоксигенации существенно повышала выживаемость клеток. На первые сутки после гипоксии/реоксигенации в присутствии N-ADA происходило незначительное снижение жизнеспособности, сопоставимое с контрольными культурами, однако в дальнейшем она не снижалась и на 10 сутки после гипоксии/реоксигенации статистически значимых отличий между опытными и интактными культурами не обнаруживалось.
Рисунок 19 Количество живых клеток в культуре клеток гиппокампа после гипоксии, *- статистически достоверные различия в сравнении с контрольной группой, p<0.05, **- различия в сравнении с контрольной группой # - статистически достоверные различия с группой, подвергавшейся гипоксии (p<0,05, критерий Стьюдента)
Число жизнеспособных клеток в культурах, подвергавшихся 10- минутной гипоксии с аппликацией N-ADA, на 10 сутки после воздействия было более чем в 3 раза выше, чем в контрольных культурах (75,24±9,37% и 20,84±4,78%, соответственно). Таким образом, введение N-ADA во время гипоксии и в первые сутки после нее сохраняют жизнеспособность клеток как минимум в течение 10 суток после гипоксического воздействия.
Для выявления возможных механизмов антигипоксического действия исследуемого вещества в культуры добавлялся N-ADA в сочетании с блокаторами различных рецепторов, связывающих каннабиноид. В отсутствие гипоксии антагонисты CBR-1, CBR-2 и TRPV1 не влияли на выживаемость клеток. Блокада CBR-1 селективным антагонистом SR141716A на первые сутки после гипоксии/реоксигенации в культурах, подвергнутых гипоксии в присутствии N-ADA, вызывала, по сравнению с интактными культурами, достоверное снижение жизнеспособности клеток, которая на 3 сутки оставалась на прежнем уровне, но на 7 сутки продолжала снижаться. К 10 суткам постгипоксического периода число жизнеспособных клеток снижалось наиболее интенсивно (до 24,95±3,21%) и статистически не отличалось от контрольной группы, подвергутой гипоксии в отсутствие каннабиноида. Таким образом, блокада CBR-1 устраняла нейропротекторное действие N-ADA.
Исследование роли активации CBR-2 в реализации нейропротекторного эффекта N-ADA показало, что под воздействием селективного антагониста CBR-2, SR144528, в течение первых 7 суток происходит постепенное достоверное снижение жизнеспособности клеток, сходное с ее изменениями в контрольной группе. Однако к 10 суткам, в отличие от контрольной группы, резкого снижения числа живых клеток не происходило. Их количество в присутствии N-ADA и SR144528 на 10 сутки после гипоксии было достоверно выше, чем в контрольной группе культур (62,0±2,43%). Эти данные свидетельствуют о том, что активация CBR-2 не оказывает существенного влияния на реализацию нейропротекторного эффекта N-ADA.
Применение при гипоксии N-ADA (10 мкМ) в сочетании с антагонистом TRPV1 капсазепином (1 мкМ) не оказывало нейропротекторного эффекта. Количество жизнеспособных клеток снижалось уже на 1 сутки после гипоксического воздействия, а к 10 суткам постгипоксического периода их число в группе культур, инкубированных с N-ADA и капсазепином, составило всего 32,08±12,41, что не отличалось от контроля. Следовательно, активация TRPV1, так же, как и CBR-1, имеет важное значение в реализации нейропротекторного эффекта N-ADA при гипоксии.
Таким образом, аппликация N-ADA (10 мкМ) во время гипоксии снижает гибель культивируемых клеток гиппокампа в постгипоксическом периоде, при этом защитный эффект эндоканнабиноида опосредуется прежде всего метаболическими каскадами, запускаемые при активации CBR-1 и TRPV1.
Похожие статьи
-
На 21-й день in vitro в клетках гиппокампа наблюдалась синхронизованная спонтанная кальциевая активность. Частота возникновения кальциевых осцилляций в...
-
Объект исследования Объектом исследований In vitro Служили первичные диссоциированные культуры клеток гиппокампа, полученные от 18-дневных мышиных...
-
Оценка жизнеспособности клеток, культивируемых в 48-луночных планшетах, проводилась в период нормоксии (21 DIV) и через 1, 3, 7 и 10 суток после...
-
Гипоксия - широко распространенное состояние организма, возникающее как из-за дефицита кислорода во внешней среде, так и при самых различных патологиях,...
-
Острые и хронические повреждения нервной системы, в том числе, травмы, ишемические или воспалительные заболевания, остаются серьезной проблемой...
-
Поскольку не все эффекты, вызываемые каннабиноидами, можно объяснить активацией CBR-1 и CBR-2, предполагается также наличие других, еще не до конца...
-
Гипоксию In vitro Моделировали на 21-й DIV путем замены на 10 минут нормоксической культуральной среды на среду без кислорода. Для вытеснения кислорода...
-
Доказательства существования CBR в мозге были получены в середине 80-х годов (Howlett, Fleming, 1984). На сегодняшний день наиболее полно изучено...
-
Для имиджинговых исследований функциональной активности по параметру изменений [Ca2+]i, отражающих функциональное состояние кальциевого гомеостаза...
-
Для моделирования острой гипобарической гипоксии (ОГБГ) In vivo Использовалась вакуумная проточная барокамера при внешней температуре 20-22оС. Мыши...
-
Взаимодействие агонистов с CBR-1 и CBR-2 приводит к диссоциации сопряженных с ними Gi-белков на б субъединицу и вг димер, которые участвуют в регуляции...
-
Нейронная сеть мозга является структурно-функциональной единицей, отвечающей за процессы обработки, хранения и воспроизведения информации. Одним из...
-
N-арахидоноилдофамин Все агонисты CBR принято подразделять на растительные (фитоканнабиноиды), эндогенные и синтетические. Среди фитоканнабиноидов (рис....
-
Для оценки способностей животных к формированию и сохранению пространственной долговременной памяти применялось тестирование в водном лабиринте Морриса....
-
ст "открытое поле" Установка для теста "открытое поле" представляет собой круглую камеру диаметром 90 см с пластиковыми стенками высотой 28 см. Пол...
-
Спонтанную биоэлектрическую активность нейронов регистрировали с использованием мультиэлектродной системы MED64 и MEA60 при стандартных условиях...
-
Спонтанная биоэлектрическая активность Мультиэлектродные матрицы MED64 и MEA60 Мультиэлектродная система MED64, основанная на технологии плоских...
-
Каннабиноиды синтезируются и реализуются локально On demand (по требованию). Таким образом, уровень их генерации не является постоянным, а кинетика их...
-
CBR-1 представлены на пресинаптических окончаниях ГАМК - эргических, глутаматэргических, холинэргических и норадреналинэргических нейронов, их активация...
-
Влияние церулоплазмина на количественный состав и фагоцитарную функцию лейкоцитов при асептическом воспалении Воспалительные процессы различной этиологии...
-
При лейкоцитозе в ответ на введение пирогенала нами отмечено изменение функциональной активности лейкоцитов. В контрольной группе, по данным ХЛ -...
-
Влияние церулоплазмина на количественный состав лейкоцитов при "невоспалительных" лейкоцитозах На предыдущем этапе работы было показано, что Цп способен...
-
Первой группе интактных животных Цп вводили внутрибрюшинно однократно в дозе 30 мг/кг. 30 мг/кг - доза, составляющая 75% от физиологической концентрации...
-
Многочисленными исследованиями показано, что чувствительность к патогенам и характер течения различных инфекционных процессов у насекомых зависит от...
-
Одним из представителей РОФ третьего эшелона является Цп - исключительно активный гликопротеин 2 - глобулиновой фракции сыворотки крови человека и высших...
-
РОФ - функционально разнородная группа белков, способных быстро изменять свою концентрацию при различных нарушениях гомеостаза независимо от природы и...
-
На следующем этапе исследования у нас возник вопрос о возможности влияния Цп на изменение функциональной активности лейкоцитов при воспалении на...
-
Диагностика - Лечебные и профилактические мероприятия при гипоксии внутриутробного плода
При диагностике гипоксии необходима комплексная оценка результатов различных методов исследований. Основными методами исследования гипоксии плода...
-
Классификация - Лечебные и профилактические мероприятия при гипоксии внутриутробного плода
Гипоксия классифицируется по типу, длительности и течению: 1. По типу: 1.1. Гипоксическая гипоксия, встречается при снижении насыщения кислородом...
-
Введение - Исследование воздействия электромагнитного поля низкой частоты на клетки крови
Электромагнитное поле (ЭМП) окружает нас с самого рождения. Электромагнитная среда нашей планеты определяется в основном электрическим и магнитным полями...
-
Введение - Клетка как элементарная живая система
Клетка - Элементарная живая система. Она обладает всеми признаками живого организма: растет, размножается, обменивается с окружающей средой веществами и...
-
Индукция интерфероном устойчивости клеток к вирусам - Строгие постулаты Коха
Клетки в культуре in vitro, в которых синтез интерферона индуцирован убитым вирусом или полинуклеотидами, также становятся устойчивыми к вирусам. Кроме...
-
Мир микроорганизмов велик и разнообразен. Поэтому при классификации микроорганизмов встречается много трудностей, а полученные данные иногда бывают...
-
Открытие клетки - Цитологические исследования
Изучение мельчайших структур живых организмов стало возможным лишь после изобретения микроскопа, т. е. после 1600. Первое описание и изображения клеток...
-
Озонотерапия стенокардия напряжение Одним из важных достижений медицины второй половины XX века явилось открытие факторов риска (ФР), влияющих на...
-
Похмелье - это физический дискомфорт после потребления избыточного количества алкоголя. Симптомы могут включать головную боль, расстройство желудка,...
-
Реализация функциональной активности фагоцитирующих клеток находится, в том числе, под контролем различных отделов нервной системы и регуляторных...
-
Лечение и профилактика - Лечебные и профилактические мероприятия при гипоксии внутриутробного плода
В настоящее время имеется комплекс мероприятий, направленных на улучшение маточного кровотока, маточно-плацентарного кровообращения и улучшение...
-
Для изучения влияния Цп на процессы генерации АФК фагоцитами в условиях in vitro использовали цельную кровь здоровых людей - доноров крови, так как...
-
Заболевание анамнез диагноз обследование Зызарова Ираида Анатольевна 47 лет (03.01.1966 г.) Место работы: Адрес проживания: Поступила: 27.04.2013 г....
Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro