Оценка жизнеспособности культивируемых клеток в диссоциированной культуре - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro

Оценка жизнеспособности клеток, культивируемых в 48-луночных планшетах, проводилась в период нормоксии (21 DIV) и через 1, 3, 7 и 10 суток после гипоксического воздействия. В культуры опытных группа при замене среды на гипоксическую, при реоксигенации и на следующие сутки добавляли N-ADA в разных концентрациях, а также N-ADA в сочетании с антагонистами CBR. В культуры контрольной группы исследуемые вещества не добавлялись.

Для оценки жизнеспособности культур их окрашивали пропидий иодидом (Sigma) и бис-бензимидом (Sigma) с целью идентификации ядер погибших клеток и общего количества клеток в культуре, соответственно. С помощью флуоресцентного инвертированного микроскопа DMIL HC (Leica, Германия) осуществлялся подсчет числа клеточных ядер, окрашенных пропидий иодидом и бис-бензимидом. Максимальный коэффициент поглощения у пропидий иодида регистрировался при 488 нм, флуоресцирует данный краситель в красной области спектра, максимум эмиссии составляет 562-588 нм. Максимальный коэффициент поглощения бис-бензимида регистрировался при 350 нм, флуоресценция регистрировалась в диапазоне 510-540 нм.

Количество живых клеток рассчитывалось как разница между числом бис-бензимид-позитивных и пропидий иодид-позитивных клеток (Ведунова с соавт., 2012, 2013).

Похожие статьи




Оценка жизнеспособности культивируемых клеток в диссоциированной культуре - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro

Предыдущая | Следующая