Функциональный кальциевый имиджинг - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro
Для имиджинговых исследований функциональной активности по параметру изменений [Ca2+]i, отражающих функциональное состояние кальциевого гомеостаза клеток, использовался лазерный сканирующий микроскоп LSM 510 (Zeiss, Германия). Методика позволяла визуализировать функциональную архитектуру нейрональной сети культуры на клеточном уровне. В качестве флуоресцентных зондов были выбраны специфический кальциевый краситель Oregon Green 488 BAPTA-1 АМ (OGB1) (Invitrogen) с константой диссоциации Кd=170 нМ, возбуждаемый линией излучения аргонового лазера 488 нм, и Са2+-нечувствительный краситель Sulforhodamine 101 (SR101) (Sigma), возбуждаемый излучением гелий - неонового лазера 543 нм, селективно маркирующий глиальные клетки (Nimmerjahn et al., 2004; Paredes et al., 2008). Эти длины волн близки к максимумам спектров поглощения соответствующих красителей. Излучение флуоресценции разделялось по каналам регистрации с помощью дихроичных зеркал и светофильтров с полосой пропускания 650-710 нм для выделения флуоресценции SR101 и 500-530 нм для выделения флуоресценции OGB1 (Митрошина с соавт., 2011).
Регистрировались временные серии изображений поля флуоресценции красителей Sulfophodamine 101 (SR101) как глиального маркера, и OGB1 как индикатора свободного кальция. Первичная обработка полученных изображений заключалась в разделении спектров этих красителей в разные каналы регистрации для идентификации нейрональных и глиальных клеток и записи функции F(t) Средней интенсивности флуоресценции OGB1 выделенной области поля (совпадающей, как правило, с телом или частью отростка клетки) от времени. Интенсивность флуоресценции (усл. ед.) показывала зависимость [Ca2+]i от времени, свидетельствующую о метаболической активности клеток, связанных в сети определенной архитектуры. Выделение кальциевых осцилляций, полученных при помощи флуоресцентной конфокальной микроскопии, проводили с использованием оригинального программного пакета "Astroscanner". Анализировались записи функции F(t) Средней интенсивности флуоресценции OGB1 выделенной области поля (совпадающей, как правило, с телом или частью отростка клетки) от времени. Для определения времени начала (Tstart) и конца (Tend) осцилляции был взят порог отклонения от среднего значения в размере стандартной квадратичной ошибки F(t). Отмечалось также время достижения максимальной интенсивности флуоресценции (Tmax) для каждой осцилляции. Учитывались следующие параметры: длительность достижения максимума (длительность "фронта" осцилляции), общая длительности осцилляции и интервалы между максимумами (Митрошина с соавт., 2011; Захаров с соавт., 2012; Zakharov et al., 2013).
Исследование влияния N-ADA на спонтанную кальциевую активность проводилось на 21-й DIV после 10-минутного гипоксического воздействия. Опытным группам при замене среды на гипоксическую, при реоксигенации и на следующие сутки проводилась аппликация N-ADA в разных концентрациях, а также аппликация N-ADA в сочетании с антагонистами CBR. К контрольной группе культур исследуемые вещества не добавлялись. В интактной группе осуществлялась полная смена нормоксической среды. Функциональный кальциевый имиджинг проводился во время моделирования гипоксии и на 7 сутки постгипоксического периода (табл. 1).
Похожие статьи
-
Объект исследования Объектом исследований In vitro Служили первичные диссоциированные культуры клеток гиппокампа, полученные от 18-дневных мышиных...
-
Спонтанная биоэлектрическая активность Мультиэлектродные матрицы MED64 и MEA60 Мультиэлектродная система MED64, основанная на технологии плоских...
-
Спонтанную биоэлектрическую активность нейронов регистрировали с использованием мультиэлектродной системы MED64 и MEA60 при стандартных условиях...
-
Острые и хронические повреждения нервной системы, в том числе, травмы, ишемические или воспалительные заболевания, остаются серьезной проблемой...
-
Гипоксия - широко распространенное состояние организма, возникающее как из-за дефицита кислорода во внешней среде, так и при самых различных патологиях,...
-
Нейронная сеть мозга является структурно-функциональной единицей, отвечающей за процессы обработки, хранения и воспроизведения информации. Одним из...
-
Доказательства существования CBR в мозге были получены в середине 80-х годов (Howlett, Fleming, 1984). На сегодняшний день наиболее полно изучено...
-
CBR-1 представлены на пресинаптических окончаниях ГАМК - эргических, глутаматэргических, холинэргических и норадреналинэргических нейронов, их активация...
-
Взаимодействие агонистов с CBR-1 и CBR-2 приводит к диссоциации сопряженных с ними Gi-белков на б субъединицу и вг димер, которые участвуют в регуляции...
-
Каннабиноиды синтезируются и реализуются локально On demand (по требованию). Таким образом, уровень их генерации не является постоянным, а кинетика их...
-
Поскольку не все эффекты, вызываемые каннабиноидами, можно объяснить активацией CBR-1 и CBR-2, предполагается также наличие других, еще не до конца...
-
N-арахидоноилдофамин Все агонисты CBR принято подразделять на растительные (фитоканнабиноиды), эндогенные и синтетические. Среди фитоканнабиноидов (рис....
-
Реализация функциональной активности фагоцитирующих клеток находится, в том числе, под контролем различных отделов нервной системы и регуляторных...
-
РОФ - функционально разнородная группа белков, способных быстро изменять свою концентрацию при различных нарушениях гомеостаза независимо от природы и...
-
Одним из представителей РОФ третьего эшелона является Цп - исключительно активный гликопротеин 2 - глобулиновой фракции сыворотки крови человека и высших...
-
В каждом организме (животном, растительном или микробной клетке) все время происходят сложные процессы превращения веществ. Велика роль в этих процессах...
-
Влияние церулоплазмина на количественный состав лейкоцитов при "невоспалительных" лейкоцитозах На предыдущем этапе работы было показано, что Цп способен...
-
Первой группе интактных животных Цп вводили внутрибрюшинно однократно в дозе 30 мг/кг. 30 мг/кг - доза, составляющая 75% от физиологической концентрации...
-
Для изучения влияния Цп на процессы генерации АФК фагоцитами в условиях in vitro использовали цельную кровь здоровых людей - доноров крови, так как...
-
На следующем этапе исследования у нас возник вопрос о возможности влияния Цп на изменение функциональной активности лейкоцитов при воспалении на...
-
Влияние церулоплазмина на количественный состав и фагоцитарную функцию лейкоцитов при асептическом воспалении Воспалительные процессы различной этиологии...
-
Введение - Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях
Актуальность исследования. Регуляция количественного состава и функциональной активности фагоцитирующих клеток является актуальной проблемой современной...
-
При лейкоцитозе в ответ на введение пирогенала нами отмечено изменение функциональной активности лейкоцитов. В контрольной группе, по данным ХЛ -...
-
В фармацевтической практике используют высушенные, реже свежие подземные органы многолетних растений, собранные чаще осенью или ранней весной, очищенные...
-
Методы и организация исследования Анализ литературных источников проводился на всех этапах исследования. Анализ специальной научно-методической...
-
Диагностика, Инструментальное обследование пациентов при ИМ - Острый инфаркт миокарда
Лабораторные методы диагностики инфаркта миокарда: Џ Анализ крови Џ Биохимический анализ крови Џ Кровь на миоглобин Резорбционно-некротический синдром -...
-
Адгезивную способность лейкоцитов изучали по их способности прилипать к эндотелию сосудистой стенки по разработанной оригинальной методике. У крысы под...
-
1.1 не нарушена (норма) 1.2 нарушена (дисфункция) по типу: 1.2.1 синусовой брадикардии (ЧСС днем 1.2.2 синдрома Шорта (тахикардии-брадикардии) 1.2.3...
-
Энзимодиагностика - Использование ферментов в медицинской практике в качестве лекарственных средств
Энзимодиагностика заключается в постановке диагноза заболевания (или синдрома) на основе определения активности ферментов в биологических жидкостях...
-
Таблица 68 - Дифференциация видов и биоваров рода Brucella Признаки В. abortus биовары В. canis В. melitensis В. neotomae В. ovis В. suis Потребность в...
-
Оценка результатов (написание эпикриза), Рекомендации для пациента - Острый инфаркт миокарда
Захаров Сергей Васильевич, 55 лет, находился на госпитализации в Селятинской районной больнице №5 с 13 мая 2013 года с врачебным диагнозом: острый...
-
Припухлости в поясничной области нет. Почки по Образцову-Стражеско не пальпируются. Верхние и нижние мочеточниковые точки безболезненны при пальпации....
-
Учитывая тему дипломной работы, при анализе данных оценки функционального состояния организма изучались показатели только двух измерений: базового и...
-
ПЕНИЦИЛЛИНЫ - Действие антибиотиков
Относятся к классу бета-лактамов - основы современной АБ-химиотерапии, являются первым классом АБ, примененных для лечения. Природные: бензилпенициллин...
-
Правильная оценка состояния больного и течения заболевания при остром холецистите требует клинического опыта и внимательного наблюдения за состоянием...
-
3 Основы методики лечебной физической культуры при заболеваниях органов дыхания В занятиях лечебной физической культурой при заболеваниях органов дыхания...
-
Фагоциты как центральное звено неспецифической защиты организма На современном этапе развития медицинской науки иммунофагоцитарная система...
-
Блокаторы медленных кальциевых каналов (антагонисты кальция) -- это группа неоднородных органических соединений, наиболее характерным свойством которых...
-
Существует два типа клеток, в которых "сгорает" сахар (глюкоза). Одни из них глюкоза принимает легко без участия инсулина. Обычно внутри этих клеток...
-
ОСТРЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ КОНЪЮНКТИВЫ - Острые заболевания конъюнктивы
Конъюнктивиты Конъюнктивиты встречаются у 1/3 больных с заболеваниями глаз Классификация По течению конъюнктивиты можно разделить на острые и...
Функциональный кальциевый имиджинг - Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vintro