Подсчет и замер колоний микроорганизмов, Методы микроскопического исследования микроорганизмов - Этапы получения лизина
Подсчет колоний микроорганизмов производился с помощью счетчика колоний Flash&;Go. Изначально с помощью сопутствующей программы производилась калибровка, а затем анализ каждой чашки с ручной корректировкой.
Замер колоний производился вручную с помощью обыкновенной линейку с ценой деления в 1 мм. Из каждой чашки случайным образом выбиралось 5 колоний, которые затем замерялись с точностью до 0,5 мм.
Методы микроскопического исследования микроорганизмов
Метод раздавленной капли. Данный метод был нами использован для определения подвижности бактерий. На середину чистого предметного стекла мы наносили каплю дистиллированной воды, затем стерильной петлей добавляли небольшое количество бактерий, хорошо размешивая. Сверху каплю накрывали покровным стеклом, предварительно подкрасив ее метиленовым синим. Рассматривали препарат под микроскопом при увеличении 400х. При этом в поле зрения можно было наблюдать подвижные формы микроорганизмов.
Фиксированный препарат. Данный метод мы использовали для определения формы бактериальных клеток. Работу начинали с приготовления мазка, который высушивали над пламенем спиртовки. При этом важно было не допустить перегрева мазка, так как при этом может произойти свертывание белков протоплазмы бактериальной клетки. Затем мы производили фиксирование препарата путем быстрого проведения покровного стекла над пламенем горелки, что обеспечивает лучшее прикрепление мазка к стеклу. После этого - окрашивали препарат раствором карболового фуксина, промывали водопроводной водой, высушивали и рассматривали увеличении 400х.
После фотографии фиксированных препаратов колоний, выращенных при каждой конкретной температуре, подвергались анализу программой ScopeTek, где случайно выбиралось и измерялось по 100 клеток.
Метод окраски по Граму. Данный метод основан на способности клеток микроорганизмов удерживать красители трифенилметанового ряда.
Готовили фиксированный мазок на чистом предметном стекле, сверху помещали полоску фильтровальной бумаги и наносили краситель. Через 1-2 минуты снимали бумагу и, не промывая, наносили на мазок каплю йода. Через 1 мин обесцвечивали мазок спиртом и окрашивали красителем (карболовым фуксином). Затем смывали остатки красителя водой, высушивали над пламенем спиртовки и рассматривали под микроскопом при увеличении 400х. При этом грамположительные бактерии окрашивались в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в розовый.
Метод окраски спор по Цилю-Нильсону в модификации Мюллера. Данный метод был использован для определения возможности некоторых видов загрязнителей к спороношению.
Готовили фиксированный мазок на чистом предметном стекле, затем наносили 5% раствор серной кислоты для протравы. Препарат подогревали пять минут (до появления паров), затем сливали кислоту. После мазок промывали водой, покрывали фильтровальной бумагой и наносили на нее карболовый фуксин Циля. Красили препарат в течение семи минут, периодически добавляя раствор красителя и подогревая его до появления пара или же доводя до кипения. По мере испарения растворителя добавляли краситель, не давая ему подсохнуть во время подогревания. Затем снимали фильтровальную бумагу, препарат промывали и обесцвечивали (в течение 15 сек.) 1% раствором серной кислоты, после чего промывали водой. Потом окрашивали препарат метиленовым синим в течение 1 мин. Затем препарат тщательной промывали водой, высушивали над пламенем спиртовки и рассматривали под микроскопом при увеличении 400х.
Споры при этом приобретали характерный красный цвет, а вегетативные клетки - синий.
Похожие статьи
-
Объект и методы исследования, Объект исследования - Этапы получения лизина
Объект исследования Штамм Corynebacterium glutamicum B-11167 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) и имеет...
-
Результаты исследования, Характеристика загрязнителей - Этапы получения лизина
Характеристика загрязнителей Как указывалось ранее, агаризованная среда LB, на которой рекомендовано поддерживать активность культуры Corynebacterium...
-
Исследование морфологии клеток - Этапы получения лизина
В ходе эксперимента нам удалось пронаблюдать некоторые отличия от данных исходного паспорта штамма B-11167 Corynebacterium glutamicum. К примеру, длины...
-
Методы исследования, Методика оживления и очистки культуры - Этапы получения лизина
В основу эксперимента положена методика культивирования бактерии продуцента лизина штамма B-11167 Corynebacterium glutamicum на основе сред, предложенных...
-
Методика исследования влияния температуры, Приготовление питательной среды - Этапы получения лизина
Методика исследования влияния температуры на штамм B-11167 Corynebacterium glutamicum включает в себя следующие этапы: - подготовка разведений на основе...
-
Влияние температуры на рост культуры - Этапы получения лизина
Следующий эксперимент был разделен на 2 части: было измерено количество колоний в чашках Петри для анализа объемов роста и были измерены размеры колоний...
-
Производство высококонцентрированных кормовых препаратов - Этапы получения лизина
При получении высококонцентрированных кормовых препаратов лизина готовую культуральную жидкость предварительно подкисляют серной кислотой до pH 1,6-2,0....
-
Технология биосинтеза лизина - Этапы получения лизина
Производство аминокислот в виде высокоочищенных кристаллических препаратов строится по схеме, типичной для получения и выделения вторичных метаболитов....
-
Эта важная технологическая операция, состоящая в обеспечении основного производства достаточным количеством высококачественной биомассы клеток продуцента...
-
Производство кормового препарата ЖКЛ (жидкого концентрата лизина) - Этапы получения лизина
Технология производства ЖКЛ основана на упаривании готовой культуральной жидкости до содержания 40% АСВ. Для этого предварительно нагретую до температуры...
-
Процесс биосинтеза в производственных условиях начинают с получения посевного материала в инокуляторах и посевных аппаратах. Питательная среда для...
-
Конденсационные методы получения коллоидных систем - Методы очистки и получения коллоидных растворов
Из классификации дисперсных систем по размеру частиц следует, что коллоидные растворы (золи) занимают промежуточное положе-ние между молекулярными и...
-
Основные понятия теории экономико-математического моделирования Кибернетический подход к исследованию экономико-математических систем Обычно...
-
Схема реакции: Реактивы: Фенолфталеин - 3,18 г; дихлорангидрид изофталевой кислоты - 2,03 г (мольное соотношение 1:1); едкий натр - 0,8 г;...
-
Методы очистки коллоидных растворов - Методы очистки и получения коллоидных растворов
При получении коллоидных растворов тем или иным методом, особенно с помощью химических реакций, практически невозможно точно предусмотреть необходимое...
-
Вычисления для следующих входных данных F=1000H m=200 кг m'=1 кг/сек k=2 t0=0 сек V0=0 м/сек B=50 n=50 V1 (t) - результаты, полученные с помощью...
-
Статистическая обработка результатов - Этапы получения лизина
Математическую статистику, прежде всего, используют для планирования опытов. Ее основной задачей является определение достоверности полученных...
-
Общая схема исследования: 1. Составление среднего образца. 2. Извлечение пестицидов из пробы. 3. Очистка экстракта. 4. Анализ экстракта. Прием образцов в...
-
Применение в биотехнологии - Этапы получения лизина
Некоторые характеристики Corynebacterium glutamicum делают ее чрезвычайно полезной в биотехнологии. Она не патогенна, не образует спор, быстро растет,...
-
Обзор литературы, Роль лизина в питании человека и животных - Этапы получения лизина
Роль лизина в питании человека и животных Лизин (б, е-диаминокапроновая кислота) - незаменимая основная алифатическая аминокислота. Это специфичная...
-
Современные методы исследования в химии - Этапы становления химии
С середины 20 в. происходят коренные изменения в методах химических исследований, в которые вовлекается широкий арсенал средств физики и математики....
-
Диспергированием называют тонкое измельчение твердых мате-риалов или жидкостей и распределение их частиц в жидкой или газообразной среде, в результате...
-
Культивирование продуцента и биосинтез лизина в промышленных ферментерах - Этапы получения лизина
Проводят в стандартных биореакторах объемом 50, 63 и 100 м3. Такие аппараты должны обеспечить нормальный рост и развитие промышленного продуцента в...
-
Адсорбционные методы исследования свойств поверхности позволяют количественно охарактеризовать происходящие при адсорбции межмолекулярные взаимодействия,...
-
Методы отбора выборок - Основы научных исследований
Известны три метода отборок выборок: случайный, систематический и комбинированный. В результате случайного отбора получается случайная выборка. Выборка...
-
Динамическое программирование Динамическое программирование -- один из разделов оптимального программирования, в котором процесс принятия решения и...
-
Разработка новой парадигмы - О новой парадигме математических методов исследования
Организационно-экономическое и экономико-математическое моделирование, эконометрика и статистика предоставляют интеллектуальные инструменты для решения...
-
МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИМЕРНЫХ МЕМБРАН, Получение мембран из растворов полимеров - Полимеры в мембранах
Разделяющая способность мембран, их производительность и стабильность характеристик зависят не только от химической природы полимера, но и от хитростей...
-
Технологическое оформление процесса получения винилхлорида сбалансированным по хлору методом Первой стадией этого комбинированного процесса является...
-
Схема реакции: Реактивы: Тимолфталеин, триэтиламин, хлороформ, дихлоангидрид терефталевой кислоты, гексан. Оборудование: Прибор для поликонденсации при...
-
Структура генома, Клеточная структура и метаболизм - Этапы получения лизина
Corynebacterium glutamicum имеет при себе круговую хромосому и несколько плазмид. Ее геном состоит из 3314179 нуклеотидов (в расчет берется геном штамма...
-
Характеристика Corynebacterium glutamicum - Этапы получения лизина
Систематическое положение: домен - Bacteria; тип - Actinobacteria; класс - Actinobacteria, порядок - Actinomycetales; семейство - Corynebacteriaceae, род...
-
Пути микробного синтеза - Этапы получения лизина
Производство аминокислот в промышленных масштабах является третьим наиболее важным направлением в белой биотехнологии, не превосходящим по своим объемам...
-
В 2011 - 2015 гг. в серии статей в научных журналах и докладов на международных, зарубежных и всероссийских научных конференциях была представлена...
-
Приготовление разбавлений - Этапы получения лизина
Для микробиологического анализа микрофлоры сыра мы использовали три разбавления - 1:106, 1:107 и 1:108. Стерильную дистиллированную воду разливали по 9...
-
Метод дихотомии требует менее всего итераций цикла для получения корней уравнения с заданной точностью. Если расчет ведется без помощи ЭВМ, то это...
-
Качественные методы анализа - Разработка технологической схемы получения анизола и крезола
Рециркуляционных реакционно-ректификационных процессов. При анализе сложных ХТС, характеризующихся большим числом параметров и переменных необходимо...
-
В основе метода лежит закон адитивности оптической плотности при соблюдении основного закона светопоглощения. Ход работы 1. Выбор оптимальных...
-
Этапы экономико-математического моделирования - Методы экономико-математического моделирования
Основные этапы процесса моделирования уже рассматривались выше. В различных отраслях знаний, в том числе и в экономике, они приобретают свои...
-
Процессы окисления. - Методы очистки и получения коллоидных растворов
Наряду с серой в реакциях окисления обычно образуются политио-новые кислоты, главным образом пентатионовая кислота H2S5O6 Реакции двойного обмена....
Подсчет и замер колоний микроорганизмов, Методы микроскопического исследования микроорганизмов - Этапы получения лизина