Объект и методы исследования, Объект исследования - Этапы получения лизина

Объект исследования

Штамм Corynebacterium glutamicum B-11167 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) и имеет регистрационный номер ВКПМ В-11167. И, согласно паспорту, обладает следующими культурально-морфологическими признаками:

    - клетки овальные, размером 1,0-1,5x0,6-0,8 мкм, неподвижные, грамположительные, полиморфны, спор не образуют; - через 3-5 суток роста при 30 °С на МПА образует колонии диаметром 2-4 мм, желтовато - кремовые, поверхность гладкая, форма выпуклая, край ровный, структура однородная тестообразная. При посеве штрихом через 2 суток рост умеренный, край гладкий, поверхность матовая; - через 3-5 суток роста при 30 °С на глюкозоминеральной среде Гловера, содержащей лейцин, биотин и тиамин, колонии 1 - 2 мм, край ровный, структура однородная, консистенция тестообразная, поверхность гладкая, цвет колоний светло-кремовый. Рост штриха на этой среде через 2 суток умеренный.

Указанный штамм обладает следующими физиолого-биохимическими признаками:

    - аэроб; - желатину не разжижает; - хорошо растет на глюкозе, сахарозе, мальтозе, фруктозе, маннозе, этаноле, уксусной кислоте. Не растет на ксилозе, арабинозе, лактозе, раффинозе; - усваивает азот в форме солей аммония и мочевины. Не усваивает нитратный азот; - растет при температуре 24-40 °С. Оптимальная температура 30-32 °С; - растет на средах с рН от 6 до 8,5. Оптимальное значение рН 6,8-7,2; - при росте в минимальной среде нуждается в биотине, тиамине и L-лейцине; - устойчив к аналогу лизина S-(2-аминоэтил)-L-цистеину (АЭЦ); - устойчив к стрептомицину.

Штамм обладает следующими генетическими характеристиками:

В составе ключевых генов, влияющих на уровень продукции лизина - генов аспартакиназы (lys С), гомосерин дегидрогеназы (hom), пируват карбоксилазы (рус) выявлены следующие мутации:

    - в гене lysC - точечная замена в позиции нуклеотидов G835A и двойная замена в триплете ТСС на GCT в позициях T949G и С951Т, что ведет к замене аминокислот А279Т и S317A, соответственно. - в гене hom - точечная замена в позиции нуклеотидов G443C, что ведет к замене аминокислоты G148A. - в гене рус - точечная замена в позиции нуклеотидов C1364G, что ведет к замене аминокислоты A455G. - штамм несет мутацию устойчивости к аналогу лизина S-(2-аминоэтил)-L-цистеину (АЭЦ) и мутацию устойчивости к антибиотику стрептомицину.

Предположительно данный штамм был получен методом классического или случайного мутагенеза, который включает в себя повторное мутации, выбор желаемого мутанта и последующей возгонки продуктивности с помощью постоянных пересевов.

Продуктивность штамма составляет не менее 130 г лизина с 1 л рабочего объема реактора при росте на среде, содержащей в качестве источников углерода глюкозный сироп и гидролизат глютена, что в принципе не является наибольшей величиной среди штаммов-продуцентов этого типа.

Похожие статьи




Объект и методы исследования, Объект исследования - Этапы получения лизина

Предыдущая | Следующая