Методы анализа - Свойства флавоноидов

Качественное определение.

Для обнаружения флавоноидов в ЛРС используют химические реакции и хроматографию. Химические реакции подразделяются на цветные и реакции осаждения.

    1. Цветные реакции. 1. Цианидиновая проба.

Общей реакцией на флавоноидные соединения является цианидиновая проба, проводимая с помощью концентрированной соляной кислоты и металлического магния. Действие водорода в момент выделения приводит к восстановлению карбонильной группы и образованию ненасыщенного пиранового цикла, который под действием соляной кислоты превращается в оксониевое соединение, имеющее окраску от оранжевой (флавоны) до красно-фиолетовой (флаваноны, флавонолы, флаванонолы).

Изменение условий восстановления путем замены магния на цинк приводит к изменению окраски. При использовании цинка по­ложительную реакцию дают флавонолы и флавонол-3-гликозиды, а флаваноны не обнаруживают ее.

Цианидиновую реакцию не обнаруживают халконы, ауроны, но при добавлении концентрированной соляной кислоты (без маг­ния) образуют красное окрашивание за счет образования оксониевых солей.

Для постановки реакции 1 г порошка сырья заливают 10 мл 95% этанола, нагревают на водяной бане до кипения и настаивают 3-4 ч. Спиртовое извлечение фильтруют, упаривают до объема 2 мл, делят пополам и разливают в 2 пробирки; в каждую пробирку прибавляют по 3 капли концентрированной хлористоводородной кислоты. В 1-ю пробирку добавляют 0,03-0,05 г цинковой пыли и нагревают на водяной бане до кипения. Жидкость окрашивается в красный цвет. Во 2-й пробирке окрашивание отсутствует.

ЦИАНИДИНХЛОРИД

2. Борно-лимонная реакция (реакция Вильсона - Таубека)

    5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодействуя с борной ки­слотой в присутствии лимонной (реактив Вильсона), образуют жел­тую окраску с красноватой флюоресценцией в УФ-свете. При замене лимонной кислоты на щавелевую (реактив Таубека) в УФ-свете отме­чается зеленая или желтая флюоресценция. 3. Реакция с треххлористой сурьмой.
    5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодействуя с треххлори­стой сурьмой, образуют комплексные соединения, окрашенные в жел­тый или желто-оранжевый цвет - флавоны, в красный или красно-фиолетовый - халконы. 4 . Характерной реакцией на флавоноиды является их взаимодей­ствие со щелочами с образованием желтой окраски. Халконы и ау­роны дают со щелочами красное или ярко-желтое окрашивание, антоцианидины-синее окрашивание. 5. Флавоноиды со свободной 7-оксигруппой легко образуют азо-красители с диазотированной сулъфаниловой кислотой и другими производными ароматических аминов [6]. Появление тотчас же оранжево-красной окраски в видимом свете указывает на присутствие 7-оксифлавонов, 7-оксифлавонолов, 7-оксиизофлавонов. Появление окраски через 1-2 минуты, подтверждает наличие 7-оксифлавононов. 6. Ряд флавоноидов дает окрашенные комплексы с ионами алю­миния, циркония, окрашенные, как правило, в УФ-свете в ярко-желтый цвет, что используется при их хроматографическом обнару­жении. 7. Как все фенольные соединения, флавоноиды взаимодействуют с хлоридом окисного железа с образованием различно окрашенных комплексов (от зеленого до коричневого). Реакция мало специфична. 2. Реакции осаждения.

Все флавоноиды с основным ацетатом свинца образуют осадки, окрашенные в ярко-желтый или красный цвет.

Средним ацетатом свинца осаждаются лишь флавоноид, содержащие свободные орто-гидроксильные группы в 3'4'-положениях кольца В.

3. Хроматография.

Для обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется бумажная и тонкослойная хроматография. Флавоноиды идеально подходят для хроматографического анализа благодаря их различной растворимости, сорбционной способности, а также характерным окраскам самих веществ в видимом и фильтрованном ультрафиолетовом свете до и после проявления различными хромогенными реагентами. Обнаружение флавоноидов на хроматограммах проводят:

    * по окраске пятен в видимом свете (антоцианы); * по характеру свечения в УФ-свете: флавоны, флавонол-3-О-гликозиды, флаваноны и халконы обнаруживаются в виде темно-коричневых пятен, флавонолы и их 7-О-гликозиды - в виде желтых или желто-зеленых; * по характеру свечения в УФ-свете после проявления 5%-ным спиртовым раствором хлорида алюминия и последующего прогревания хроматограммы при 105°С в течение 2-3 мин, наблюдают пятна флавоноидов с интенсивной желтой и желто-зеленой флуоресценцией.

Количественное определение.

Для количественного определения флавоноидов в растительном сырье наибольшее распространение получили физико-химические методы, прежде всего фотоколориметрия и спектрофотометрия.

    1. Фотоколориметрический метод основан:
      * на цветных реакциях комплексообразования с солями различных металлов (алюминия, циркония, хрома, сурьмы); * на реакции с лимонно-борным реактивом; * на реакции восстановления атомарным водородом в кислой

Среде в присутствии металлического магния или цинка.

    2. Спектрофотометрический метод, основанный на способности флавоноидов поглощать свет в УФ-области спектра. 3. Хромато-спектрофотометрический метод - более совершенный метод количественного определения флавоноидов, используется в сочетании с хроматографией, что позволяет произвести очистку и разделение суммы веществ на отдельные компоненты.

Реже используют:

    4. Флюориметрический метод. 5. Полярографический метод. 6. Наличие фенольных гидроксилов, обуславливающих слабокислые свойства флавоноидов, позволяет использовать метод кислотно-основного титрования в неводных растворителях: диметилформамиде, диметилсульфоксиде, ацетоне.

Похожие статьи




Методы анализа - Свойства флавоноидов

Предыдущая | Следующая